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第 1 5卷 第 5 期
2013 年 5 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 15 No. 5
May，2013
黄金菊药效组分标准物质分量定值的不确定度评价
张雅楠，张贵君，张智圆，黄睿，刘晶晶，刘长松，李景松
（北京中医药大学中药学院，北京 100102）
摘 要：目的：评价黄金菊药效组分标准物质[1]分量定值的不确定度。方法：建立数学模型，逐层对三批（批号
为20110201、20110202、20110203）黄金菊药效组分标准物质分量定值的不确定度来源进行分步计算和整体合成，
得到合成标准不确定度（Uc）和扩展不确定度（U）。结果：黄金菊药效组分中黄芩苷的含量测定结果20110201 ：
（88.04±0.84）%，20110202 ：（88.03±0.84）%，20110203 ：（88.06±0.84）%；绿 原 酸 的 含 量 测 定 结 果20110201 ：
（5.67±0.12）%，20110202 ：（5.67±0.16）%，20110203 ：（5.67±0.12）%；荭草苷的含量测定结果20110201 ：（4.53±
0.09）%，20110202 ：（4.54±0.09）%，20110203 ：（4.54±0.09）%；牡荆苷的含量测定结果20110201 ：（1.136±0.02）%，
20110202 ：（1.135±0.02）%，20110203 ：（1.134±0.02）%，k=2，p=95%。结论：影响药效组分标准物质分量定值的不
确定度的主要是操作因子中的称量、定容和移液。
关键词：黄金菊；药效组分；标准物质；分量定值；不确定度
中图分类号：R284 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 05- 0054- 04
收稿日期：2012-11-14
作者简介：张雅楠（1986-），女，黑龙江虎林人，2010级硕士研究生，研究方向 ：中药药效组分及药效组分质量评价体系研究。
通讯作者：张贵君（1954-），男，黑龙江人，教授，博士研究生导师，研究方向 ：中药药效组分及药效组分质量评价体系研究、中药鉴定方法
学研究。E-mail ：guijunzhang@163.com。
Uncertainty Evaluation for Content Determination of Reference
Material of Active Components Alignment of Huangjinju
ZHANG Yanan，ZHANG Guijun，ZHANG Zhiyuan，HUANG Rui，LIU Jingjing，LIU Changsong，LI Jingsong
（School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100102，China）
Abstract ：Objective ：To evaluate the measurement uncertainty of value of the reference materia of the
active components alignment of Huangjinju. Methods ：The mathematics model was established and three
图7 松果菊苷对照品色谱图
2.2.5 方法学考查
①标准曲线的制备。分别精密吸取2.2.2项下
的标准品溶液0.9、5、10、15、20 μL进样，按上述色
谱条件测定，以峰面积（Y）为纵坐标，进样样品量
为横坐标，绘制标准曲线，进行线性回归，松果菊苷
回归方程为 ：Y=1315039.83X-2375.33，R2=0.9999 ；
毛蕊花糖苷回归方程为 ：Y=1492306.11X-3051.30，
R2=0.9999。
②精密度实验。精密吸取松果菊苷对照品溶
液和毛蕊花糖苷对照品溶液各10 μL注入高效液
相色谱仪，连续进行6次测定，记录峰面积。计算其
RSD值为 ：松果菊苷0.23%，毛蕊花糖苷0.28%，均小
于2%。表明仪器精密度良好。
③重复性实验。精密称定同一批号的健脑丸粉
末6份，制备供试品溶液，进行测定，记录松果菊苷
和毛蕊花糖苷峰面积值。计算其RSD值分别为 ：松
果菊苷1.32%，毛蕊花糖苷1.02%，均小于2%，表明
本法重复性良好。
④稳定性实验。取同一供试品溶液，分别在
0、2、4、8、12、24 h进行测定，记录峰面积，计算得其
RSD分别为 ：松果菊苷0.72%，毛蕊花糖苷0.59%，均
小于2%，表明样品在24 h内稳定。
⑤回收率实验。采用加样回收法，去已知含量
的样品适量，精密称定，分别精密加入松果菊苷对照
品和毛蕊花糖苷对照品适量，按上述样品溶液制备
方法和色谱条件测定，计算其平均回收率为 ：松果
菊苷97%，毛蕊花糖苷102%，RSD值为 ：松果菊苷
0.91%，毛蕊花糖苷1.86%。
2.2.6 样品含量测定
称取健脑丸粉末，按样品方法制备供试品溶液
（n=3），测定样品含量为松果菊苷和毛蕊花糖苷的
总含量为0.12%。◆
参考文献
[ 1 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[ S ] .北京 ：中
国医药出版社，2010 ：1003-1004.
[ 2 ] 李正国.丹参薄层鉴别方法研究及其对照图谱的建立[ J ] .中
国药事，2007，21 ( 12 ) ：1006-1007.
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2013.05.56.zhangyn.077
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1 5 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
黄金菊是传统临床清热利咽的验方，其配伍
组分为黄芩-金莲花-野菊花（3∶5∶6）。药效组
分标准物质是在中药药效组分理论[2]指导下，根
据原方剂型的组分分析和等效性实验[3]，确定为
黄芩苷-绿原酸-荭草苷-牡荆苷（155∶10∶8∶
2）。
不确定度是表征合理地赋予被测量之值的分
散性与测量结果相联系的参数[6]。测量数据误差越
小即不确定度越小，表明的定值越准确、越接近真
值。本试验为明确黄金菊药效组分标准物质含量检
测数据的可靠性与准确性，依据《化学分析测量不
确定度评价》（JJF 1135-2005）、《化学分析中不确
定度的评估指南》（CNAS-GL06）等标准中的有关
规定[4-5]，采用标准不确定度的A类评价中的贝塞尔
法，对黄金菊药效组分标准物质的定值进行系统分
析。为黄金菊药效组分标准物质的定值提供了科学
依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Agilent 1100 高 效 液 相 色 谱 仪，DAD检 测
器（G1315B），四 元 泵（G1311A），自 动 进 样 器
（G1313A）（美国安捷伦公司），电子分析天平BT25S
（十万分之一，线性误差a ≤ ±0.05 mg，德国赛多利
斯集团）。
1.2 材料
黄芩苷、绿原酸、荭草苷、牡荆苷标准品 ：中国
食品药品检定研究院，批号分别为110715-200815、
110753-200413、111777-200801、111687-200501，供
含量测定用。
黄金菊药效组分标准物质 ：本实验室自制，
批号 ：20110201、20110202、20110203。
试剂 ：色谱纯乙腈（美国Fisher公司）；液相
用水为屈臣氏蒸馏水 ；其他均为市售分析纯试
剂。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
液相色谱柱 ：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充
剂Venusil ASB-C18（5 μm，150 Å，4.6 mm×250 mm，
美国艾杰尔科技）；流动相 ：乙腈（A）-0.2%磷酸
水（B）（0~30 min，A 15%~35%线性洗脱），（流速
1.0 mL·min-1）；检测波长 ：340 nm ；柱温25 ℃ ；进
样量10 μL。
2.2 溶液制备
2.2.1 分量标准品溶液制备
取黄芩苷、绿原酸、荭草苷和牡荆苷标准品适
量，精密称定，加甲醇制成每毫升含黄芩苷0.9 mg、
绿原酸0.06 mg、荭草苷0.05 mg、牡荆苷0.02 mg的混
合溶液，即得。
2.2.2 供试品溶液制备
取黄金菊药效组分标准物质10 mg，精密称定，
置10 mL量瓶中，加甲醇适量超声处理使溶解并稀
释至刻度，即得。
2.3 数学模型
根据标准不确定度的A类评价[2]中贝塞尔法，
计算公式如下 ：
uA=ux/ n ，ux=Sx，Sx=  
2
11
1 


n
i
i xxn
2.4 不确定度分量的评价
黄金菊药效组分含量测定使用外标两点法。
2.4.1 质量引入的不确定度分量
（1）天平校准产生的不确定度分量 ：该天平线
性误差a ≤ ±0.05 mg，按矩形分布，则线性不确定
度为a/ n =0.05 mg/ n =0.0289 mg，线性分量应计
算两次，一次为空盘，一次为毛重，产生的不确定度
uml= 2)0289.0(2 =0.0408 mg。
（2）可读性不确定度分量 ：该天平分辨率为0.01
mg，按矩形分布，则天平的标准偏差，即不确定度
umr=μ0.01 mg/ n =0.00577 mg。
（3）重复性变化不确定度分量 ：制造证书中称
该天平重复性误差为0.02 mg，按矩形分布，则天平
重复性变化不确定度ump=0.02 mg/ n =0.0115 mg。
各分量无关，三者合成质量不确度um=  2u i =
2
mp
2
mr
2
ml uuu  =0.04278 mg。
黄金菊药效组分中测定4种成分的含量，需分
别计算各成分的质量相对标准不确定度。
黄芩苷标准品因质量产生的相对标准不确
定度umb= =0.00024 ；绿原酸标准品因质量产生
的相对标准不确定度umc=0.003 ；荭草苷标准品
因质量产生的相对标准不确定度umo=0.00372 ；
牡荆苷标准品因质量产生的相对标准不确定度
umv=0.00712 ；供试品因质量产生的相对标准不确
定度ums=0.00428。
groups（The batch numbers wre 20110201，20110202，20110203）of the sources of uncertainty evaluation
for content determination of the active components alignment of Huangjinju were determind step-by-step
and composed for the whole determination procedure. The standard uncertainty（Uc）and the expanded
uncertainty（U）were achieved. Results ：The determined content of Baicalin in the active components
alignemnt of Huangjinju was 20110201 ：(88.04±0.84)% ；20110202 ：(88.03±0.84)% ；20110203 ：(88.06±
0.84)%. The determined content of chlorogenic acid was 20110201 ：(5.67±0.12)% ；20110202 ：(5.67±
0.16)% ；20110203 ：(5.67±0.12)%. The determined content of Orientin was 20110201 ：(4.53±0.09)% ；
20110202 ：(4.54±0.09)% ；20110203 ：(4.54±0.09)%. The determined content of Vitexin was 20110201 ：
(1.136±0.02)% ；20110202 ：(1.135±0.02)% ；20110203 ：(1.134±0.02)% ；k=2，p=95%. Conclusion ：
The main factors that have effect on the uncertainty of content determination of the reference material of the
active components alignment are samples of weighing，capacity and pipetting.
Key words ：Huangjinju ；active components alignment ；reference material ；content determination ；
uncertainty
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辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 5 卷
2.4.2 体积引入的不确定度分量
（1）定容体积不确定度分量。
①容量瓶校准不确定度（容量瓶所标体积的不
确定度）：20 ℃时A级单标线容量瓶的容量最大允
许误差[6]100 mL为±0.08 mL，50 mL为±0.05 mL，
25 mL为±0.03 mL，10 mL为±0.02 mL。 认 为 均
按三角形分布，则uvcf100=0.08 mL/ n =0.0326 mL，
uvcf50=0.05 mL/ n =0.0204 mL，uvcf25=0.03 mL/ n =
0.0122 mL，uvcf10=0.02 mL/ n =0.00816 mL。
②容量瓶重复性不确定度（充满容量瓶的变化
引起的不确定度）：通过对容量瓶的定容操作重复性
试验来进行评估。称量得出空瓶质量，以接近20 ℃
的纯水注到各型号容量瓶标线处[6-7]，称得纯水的质
量，如此重复10次求得标准偏差。万分之一天平引
起的质量不确定度ums=0.416 mg。
二者合并，得uvrf100=0.00362 mL，uvrf50=0.00303
mL，uvrf25=0.00342 mL，uvr10=0.00283 mL。
③容量瓶温度不确定度 ：容量瓶校准温度为
20 ℃，实验室温度控制在（20±5）℃，因温度控制
不充分引起的不确定度需考虑温度范围和水体积
膨胀系数（2.1×10-4 ℃ -1）（容量瓶体积膨胀系数为
1.5×10-5 ℃ -1，因明显小于水体积膨胀系数，故忽略
不 计），则uvtf100=（100×5×2.1×10-4）/ n =0.0606
mL，uvtf50=（50×5×2.1×10-4）/ n =0.0303 mL，
uvtf25=（25×5×2.1×10-4）/ n =0.0152 mL，uvtf10=
（10×5×2.1×10-4）/ n =0.00606 mL。
各分量无关，三者合成定容体积相对标准不确
定 度uvf100=0.000689，uvf50=0.000732，uvf25=0.000792，
uvf10=0.00106。
（2）移液体积不确定度分量。
①吸量管校准不确定度（吸量管所标体积的
不确定度）：20 ℃时A级单标线吸量管的最大允
许 误 差[8]25 mL为±0.03 mL，20 mL为±0.03 mL，
10 mL为±0.02 mL，5 mL为±0.015 mL，按三角形
分 布，则uvcp25=0.03 mL/ n =0.0122 mL，uvcp20=0.03
mL/ n =0.0122 mL，uvcp10=0.02 mL/ n =0.00816 mL，
uvcp5=0.015 mL/ n =0.00612 mL。
②吸量管重复性不确定度（排出体积的变
化引起的不确定度）：称取带盖称量杯的重量，
将吸量管内吸至刻度线的纯水放入称量杯中，
等待3 s，称得纯水质量，如此重复10次，求得标
准偏差。万分之一天平引起的质量不确定度
ums=0.416 mg。
二者合并，得uvrp25=0.00213 mL，uvrp20=0.00214 mL，
uvrp10=0.00214 mL，uvrp5=0.00234 mL。
③吸量管温度不确定度 ：吸量管校准温度为
20 ℃，实验室温度控制在（20±5）℃，因温度控
制不充分引起的不确定度需考虑温度范围和水体
积 膨 胀 系 数（2.1×10-4 ℃ -1），则uvtp25=（25×5×
2.1×10-4）/ n =0.0151 mL，uvtp20=（20×5×2.1×
10-4）/ n =0.0121 mL，uvtp10=（10×5×2.1×10-4）/
n =0.00606 mL，uvtp5=（5×5×2.1×10-4）=0.00303
mL。
各分量无关，三者合成移液体积相对标准不确
定度uvp25=0.00078，uvp20=0.0000865，uvp10=0.00104，
uvp5=0.00144。
黄金菊药效组分中测定4种成分的含量，各成
分使用的容量瓶与吸量管不同，因此需单独计算各
成分的体积相对标准不确定度。
黄芩苷标准品使用100 mL的容量瓶1次，
10 mL的容量瓶1次，使用5 mL吸量管1次，体
积相对标准不确定度uvb=0.00192 ；绿原酸标准
品使用50 mL容量瓶1次，25 mL容量瓶1次，使
用5 mL吸量管1次，则体积相对标准不确定度
uvc=0.00808 ；荭草苷标准品使用50 mL容量瓶1
次，25 mL容量瓶1次，使用5 mL吸量管1次，则
体积相对标准不确定度uvo=0.00808 ；牡荆苷标准
品使用50 mL容量瓶2次，使用5 mL吸量管1次，
则体积相对标准不确定度uvv=0.00177 ；供试品使
用10 mL的容量瓶1次，体积相对标准不确定度
uvs=uvf10=0.00106。
2.4.3 重复测定引入的不确定度分量
主要包括液相色谱仪精密度及进样量引入的
不确定度，因本仪器配备自动进样器，不涉及手工进
样引起的不确定度，因此本项不确定度可由标准品
溶液重复性测定结果获得。
连续吸取由黄芩苷、绿原酸、荭草苷、牡荆苷标
准品溶液制成的混合标准品溶液6针，每针10 μL，
注入高效液相色谱仪，记录峰面积。
黄芩苷因重复测定引入的相对标准不确定度
urb=0.000212 ；绿原酸因重复测定引入的相对标准不
确定度urc=0.000532 ；荭草苷因重复测定引入的相对
标准不确定度uro=0.000706 ；牡荆苷因重复测定引入
的相对标准不确定度ur=0.00112。
2.4.4 样品均匀性引入的不确定度分量
取3批黄金菊药效组分含量均匀度检测进行分
析。
批号20110201黄金菊药效组分中黄芩苷因样
品均匀性引入的相对标准不确定度uub=0.0000637 ；
绿原酸因样品均匀性引入的相对标准不确定度
uuc=0.00134 ；荭草苷因样品均匀性引入的相对标准
不确定度uuo=0.00137 ；牡荆苷因样品均匀性引入的
相对标准不确定度uuv=0.000892。
同理可得出20110202与20110203批次中各成
分因样品均匀性引入的相对标准不确定度，具体数
据见表1。
2.4.5 样品稳定性引入的不确定度分量
取长期稳定性试验样品并对0、3、6、9个月与12
个月长期试验数据进行稳定性评价。
批号20110201黄金菊药效组分中黄芩苷因样
品稳定性引入的相对标准不确定度usb=0.0000914 ；
绿原酸因样品稳定性引入的相对标准不确定度
usc=0.00158 ；荭草苷因样品稳定性引入的相对标准
不确定度uso=0.00148 ；牡荆苷因样品稳定性引入的
相对标准不确定度usv=0.000394。
同理可得出20110202与20110203批次中各成
分因样品稳定性引入的相对标准不确定度，具体数
据见表1。
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1 5 卷 辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
表1 含量测定各标准不确定度评价汇总表
不确定度来源（uxi）
相对标准不确定度（uxi/xi）
黄芩苷 绿原酸 荭草苷 牡荆苷
质量（um） 0.04278 mg 0.00429 0.00523 0.00567 0.00831
体积（uv） 0.00219 0.00815 0.00815 0.00206
重复性（ur） 0.000212 0.000532 0.000706 0.00112
均匀性（uu）
20110201 0.0000637 0.00134 0.00137 0.000892
20110202 0.000127 0.00134 0.00172 0.000923
20110203 0.0000954 0.00118 0.00115 0.00086
稳定性（us）
20110201 0.0000914 0.00158 0.00148 0.000394
20110202 0.000224 0.00269 0.00256 0.00118
20110203 0.000295 0.00205 0.00226 0.000789
合成标准不确定度uc
20110201 0.42% 0.056% 0.045% 0.00987%
20110202 0.42% 0.058% 0.047% 0.00994%
20110203 0.42% 0.056% 0.047% 0.00988%
k 2 2 2 2
扩展不确定度U
20110201 0.84% 0.12% 0.09% 0.02%
20110202 0.84% 0.16% 0.09% 0.02%
20110203 0.84% 0.12% 0.09% 0.02%
定值
20110201 88.04%±0.84% 5.67%±0.12% 4.53%±0.09% 1.136%±0.02%
20110202 88.03%±0.84% 5.67%±0.16% 4.54%±0.09% 1.135%±0.02%
20110203 88.06%±0.84% 5.67%±0.12% 4.54%±0.09% 1.134%±0.02%
2.5 合成标准不确定度
与每一个分量有关的不确定度合成标准不确
定度ucx，取置信水平为95%，包含因子k=2，则扩展
不确定度U=k×ucx。
批号20110201黄金菊药效组分中黄芩苷含
量测定合成标准不确定度ucb=0.42%，扩展不确定
度Ub=2×0.42%=0.84%，则黄芩苷的定值结果为
88.04%±0.84%。
绿 原 酸 含 量 测 定 合 成 标 准 不 确 定 度
ucc=0.056%，扩展不确定度Uc=2×0.056%=0.12%，则
绿原酸的定值结果为5.67%±0.12%。
荭 草 苷 含 量 测 定 合 成 标 准 不 确 定 度
uco=0.045%，扩展不确定度Uo=2×0.045%=0.09%，则
荭草苷的定值结果为4.53%±0.09%。
牡 荆 苷 含 量 测 定 合 成 标 准 不 确 定
度ucv=0.00987%， 扩 展 不 确 定 度Uo=2×
0.00987%=0.02%，则牡荆苷的定值结果为1.136%±
0.02%。
同理可得出批号20110202与20110203中各成
分含量的不确定度，并由此得到各批号样品的定值，
具体数据见表1。由表中可看出，4种成分在3批样
品中的合成标准不确定度和扩展不确定度基本一
致。
0
0.001
0.002
0.003
0.004
0.005
0.006
0.007
0.008
0.009
质量 体积 重复性 均匀性 稳定性
不确定度分量
ux
i
黄芩苷
绿原酸
荭草苷
牡荆苷
图1 不确定度分量比较
3 讨 论
从表1可看出，各批号样品的定值均在标示量
的±2%区间范围内，但若以干燥品计则均在标示
量的±1.5%区间范围内，因此进一步确定本品的含
量限度为标示量的±1.5%。
通过对影响黄金菊药效组分含量测定不确定
度各分量的评价，见图1，从该不确定度分量比较图
中可直观看出，对不确定度贡献最大的是质量分量
和体积分量，测定过程中应在称量、定容、移液等方
面多加注意，以保证定值的准确。
从图1中还可看出仪器方面（重复性）、样品均
匀性、样品稳定性对不确定度的影响较小，说明检验
仪器精密度较高，样品均匀性较好，样品较稳定。较
小的样品均匀性不确定度，间接证明本品制备工艺
可行，制得的样品均匀度较高。在稳定性方面，绿原
酸和荭草苷的含量测定受到的影响最大，因此本品
贮藏条件应严格遵照长期稳定性实验条件，以保证
贮藏期间量值保持稳定。
本研究可为药效组分标准物质分量定值提供
科学依据，为同类方法测量结果的不确定度评价提
供一种参考思路和模式。◆
参考文献
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