全 文 ：3　讨论
　　Melo的测定方法多为 HPLC法 [ 1、3] ,本试验采
用高效液相色谱 -串联质谱法测定血浆中 Melo的浓
度 ,仪器灵敏度高 ,最低检测浓度可达 0.01mg·L-1 ,
出峰时间仅为 1.2min;血浆样品采用直接沉淀蛋白
法 ,操作简单 ,准确度 、精密度均好。
　　结果显示 , Melo在受试者体内的 t1/2β远大于 t1/2α,
说明 Melo在体内主要以消除过程为主 ,属慢消除过
程 ,故药物在体内作用持久。因服用 NSAIDs的病人年
龄都较大 ,半数以上会出现胃肠道副作用 ,国内主要有
片剂和胶囊等[ 3] ,本文所测各参数与口服片剂比较 ,
Cmax、AUC0-∞值均大于片剂 , Tmax、t1/2ka较快 , t1/2β相
近 ,显示注射剂具有高效 、速效 、副作用小的优势。
　　Melo在受试者体内的药动学存在明显的个体
差异 ,在低 、高剂量组及多次给药组分别有 1、1、3名
受试者可能属弱代谢者 ,其 t1 /2β明显延长 , AUC明
显增大 , CL明显降低 ,这主要是由于药物的代谢消
除能力不同造成的 [ 1] 。 Melo在肝中的代谢受
CYP2C9的影响 , 而此酶在人群中存在遗传多态
性 [ 4] 。本试验的代谢分型没有严格进行基因测定 ,
只按照 AUC0 -96h值进行分析 ,对其中特别高或特别
低的数值进行 Q检验 ,以 P<0.05为标准 ,将异常
数值进行单独分析 ,此方法比较实用 ,但仍须进一步
探讨 。
　　本试验提示 ,对于主要以 P450酶代谢消除的药
物 ,如果其代谢途径仅由单一 P450同工酶催化 ,则将
存在遗传代谢多态性导致药物体内蓄积的风险。在
临床用药中 ,特定的患者群应该避免使用这类药物 ,
对于其他患者也需要特别注意药物代谢相互作用 。
参考文献:
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caminhumanliverinvolvescytochromesP450 2C9 and3A4 [ J].
Xenobiotica, 1998, 28(1):1
(收稿日期:2007-08-03;修回日期:2007-09-12)
(本文编辑　狄亚敏)
文章编号:1008-9926(2008)01-0051-03　　中图分类号:R943　　　文献标识码:A
黄金菊提取工艺的正交设计试验
马宏芳①② ,牛雪平② ,赵海东
(①山西大同大学化学与化工学院　山西　大同　037009;②内蒙古大学化学化工学院　内蒙古　呼和浩特　010021)
摘　要:目的　通过四因素三水平的正交试验 , 结合紫外分光光度法 , 优选黄金菊中黄酮的最佳提取条件。方法　以乙醇浓
度 、溶剂倍量 、回流时间 、提取次数为因素 , 每个因素 3个水平 ,以测定的总黄酮含量作为评价指标进行正交试验 。结果　得到
最佳提取条件为:乙醇浓度 85%, 溶剂倍量 20倍 , 回流时间 1h, 提取次数 3次。 工艺验证试验表明:平均提取得率高达
6.902%, 平均回收率为 98.41%, RSD为 2.67%(n=5)。结论　本提取方法为提取黄金菊中总黄酮提供了依据 。
关键词:黄金菊;总黄酮;正交试验;提取工艺
TheExtractingConditionsofPerennialChamomilebyOrthogonalDesignTest
MAHong-Fang①② , NIUXue-Ping② , ZHAOHai-Dong
(①ColegeofChemistryandchemicalengineering, ShanxiDatongUniversity, DaTong　037009, Shanxi　China)
(②Colegeofchemistryandchemicalengineering, InnerMongoliaUniversity, Hohhot　010021, Neimenggu　China)
ABSTRACT:AimTodeterminetheoptimumextractionprocedureoftotalflavonoidsinPerennialChamomileby
orthogonaltestofL9(34)andUV-spectrophotometry.MethodsTheorthogonaltestwasemployedtotesttheefects
ofthefourfactorsincludingtheconcentrationofalcohol, volumeofalcohol, timeandfrequencyofextactionontotal
·51·　解放军药学学报　第 24卷第 1期　　黄金菊提取工艺的正交设计试验　　　　　　　　　　　　　马宏芳　　
① 作者简介:马宏芳(1978-),女 ,山西怀仁人 ,助教 ,硕士。研究方向:天然药物化学研究。 Tel:13994319790;E-maiL:mahftot@ 126.com
flavonoidcontentsofPerennialChamomile.ResultsTheoptimumextractionprocedurewasdeterminedwith20
timesof85% alcoholextracting3 timeseachfor1 hour.Theresultsofverifiableexperimentswerestatedasfol-
lows:theaverageextractionratewas6.902%;theaveragerecoverywas98.41%;therelativestandarddeviation
was2.67% (n=5).ConclusionThemethodofersascientificevidenceforextractingthetotalflavonesin
PerennialChamomile.
KEYWORDS:PerennialChamomile;Totalflavones;Orthogonaldesign;Extractingconditions
　　菊花作为一种传统中药 ,具有疏风 、清热 、明目 、
解毒等功效 [ 1] ,黄金菊(Perennialchamomile)是菊
花的一种 ,此花可助消化 ,花的煎剂具有护发 、清凉
降火 、去脂护容等作用 ,黄金菊的这些功效与其含有
的黄酮类化合物有着密切关系 。黄酮类化合物广泛
存在于植物中 ,不仅具有抗肿瘤 、增强心血管功能 、
治疗慢性前列腺炎 、调解内分泌系统 、护肝 、抗炎 、抗
过敏 、抑菌 、抗病毒等作用 ,同时它还是一种天然的
抗氧化剂 ,具有清除人体中超氧离子自由基 、延缓衰
老 、增强机体免疫力的生理活性 [ 2 ～ 4] 。
　　许多黄酮类提取物已在食品 、药品 、化妆品等产
品中得到运用 ,经内蒙古中蒙医研究所药物实验室
预试 ,黄金菊的花中含黄酮类化合物 [ 5] ,但有关花
中黄酮的种类 、含量 、提取工艺未见报道 ,为有效开
发和利用药材资源 ,充分提取黄金菊所含黄酮类成
分 ,采用正交试验的方法确定乙醇提取黄金菊中总
黄酮的最佳工艺 ,并验证该工艺的稳定性 ,为黄金菊
有效成分的提取奠定了基础。
1　仪器与试药
　　UV-120-02型紫外 -可见分光光度计(日本岛津
制作所);ALC-210.4电子天平(北京塞多利斯仪器
系统有限公司)。芦丁对照品(中国药品生物制品
检定所);黄金菊(黄山澳达食品有限公司 ,并经李
哲研究员鉴定为菊科菊属植物);其它试剂均为分
析纯。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备　(1)对照品溶液 　精密称芦丁
对照品 50mg,加乙醇适量 ,使之充分溶解 ,用乙醇定
容到 100ml量瓶中 ,摇匀。精密量取 20ml, 置 50ml
量瓶中 , 用水稀释至刻度 ,摇匀 ,即得(含芦丁对照
品 0.2mg·ml-1)[ 1] 。 (2)样品溶液　分别精密称取
黄金菊 5.0g共 9份 ,以乙醇为提取溶剂 ,选择乙醇
浓度 、提取时间 、提取次数 、溶剂倍数为考察因素 ,每
个因素选择 3个水平 ,以测得黄金菊样品中总黄酮
含量为考察指标 ,选用 L9(34)正交表进行试验 ,对
黄金菊总黄酮提取工艺进行研究 ,正交设计试验见
表 1。按因素水平表设计正交试验进行加热回流 ,
合并滤液 ,乙醇定容到 250ml,分别从定容好的样液
中取 10ml定容到 50ml,待测定。
表 1　黄金菊乙醇提取工艺因素水平表
Tab1　FactorsandlevelsofPerennialchamomileextractedbyethanol
水平 A乙醇浓度(%)
B溶剂倍量
(倍)
C回流时间
(h)
D提取次数
(次)
1 85 20 3 1
2 70 15 2 2
3 55 10 1 3
2.2　标准曲线的制备　精密量取对照品溶液 0.0、
1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml,分别置 25ml量瓶中 ,
各加水至 6ml,加 5%亚硝酸钠溶液 1.0ml,混匀 ,放
置 6min, 加 10%硝酸铝溶液 1.0ml, 摇匀 , 放置
6min,加 1%氢氧化钠溶液 10.0ml,再加水至刻度 ,
摇匀 ,放置 15min,按文献[ 1]的方法在 510nm波长处
测定吸收度 ,以吸收度为纵坐标 ,浓度为横坐标 ,绘
制标准曲线 ,得回归方程:
　　Y=9.866 07X+0.004 93, r=0.999 8
　　表明在 0.008 ～ 0.048mg·ml-1范围内呈良好的
线性关系 。
2.3　样品液的测定　精密量取样品液 5.0ml,置
25ml量瓶中 ,按照标准曲线方法进行操作 ,显色 ,在
510nm波长处测定吸收度 A1;另精密量取样品液
5.0ml,置 25ml量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀 ,在 510nm
波长处测定吸收度 A2;取 2次吸收度的差值 ,由回
归方程计算样品中总黄酮的含量 。
2.4　按 L9(34)正交表设计方案进行试验 ,以紫外
分光光度法测得黄金菊中总黄酮含量为评价指标进
行分析 ,结果见表 2、3。
　　从表 2、表 3可看出影响黄金菊总黄酮得率的
主要因素为回流次数和乙醇浓度 ,其次是溶剂倍量 ,
回流时间影响较小。综合考虑 ,确定其最佳工艺组
合为 A1B1C3D3 ,即用 20倍量的 85%乙醇加热回流
3次 ,每次 1h。
2.5　工艺验证试验　为考察上述优选工艺的稳定
性 ,按该工艺条件 A1B1C3D3进行重复性试验 3次 ,
·52· 　解放军药学学报　 2008年 2月　第 24卷　第 1期　　　PharmJChinPLA　Vol24　 No2　Feb2008　　　　　
分别测定黄金菊总黄酮的含量 , 平均提取得率达
6.902%,优于正交试验表中的任何一组;RSD为
0.645%,说明该工艺稳定可行。
表 2　黄金菊乙醇提取正交设计及数据处理
Tab2　Orthonogaldesignanddataprocesingof
Perennialchamomileextractedbyethanol
试验号 A B C D 总黄酮含量(%)
1 1 1 1 1 5.259
2 1 2 2 2 5.512
3 1 3 3 3 6.120
4 2 1 2 3 6.184
5 2 2 3 1 5.005
6 2 3 1 2 5.031
7 3 1 3 2 5.297
8 3 2 1 3 4.929
9 3 3 2 1 3.967
K1 16.891 16.740 15.219 14.231
K2 16.220 15.446 15.663 15.840
K3 14.193 15.118 16.422 17.233
R 0.899 0.541 0.401 1.000
表 3　乙醇提取方差分析
Tab3　Variantanalysisoforthogonaltestbyethanolextraction
方差来源 SS f MS F P值
A 1.347 2 0.6735 4.866 0.05>P>0.01
B 0.5200 2 0.2600 1.879 >0.1
C 0.2767 2 0.1384 …
D 1.537 2 0.7685 5.553 0.05>P>0.01
2.6　稳定性试验　精密量取黄金菊提取液 5.0ml,
分别于配制后 0、 1、 2、 3、 4、 5、 24h测定 , RSD为
2.898%,说明黄金菊样品溶液在 24h内稳定。
2.7　精密度试验　取 0.2mg·ml-1的标准溶液5.0ml
置 25ml量瓶中 ,按实验方法测定 , RSD为0.139%。说
明仪器的精密度较高 ,实验数据可靠。
2.8　加样回收试验　取已测得总黄酮含量的黄金
菊样液 5.0ml加入 0.2mg·ml-1的芦丁对照液 1.0
ml,按实验方法测定含量 ,计算回收率 ,结果见表 4。
表 4　回收率试验结果
Tab4　Theexperimentresultoftheaveragerecovery
加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) x(%) RSD(%)
0.200 0.203 101.45
0.200 0.190 95.11
0.200 0.193 96.38 98.41 2.67
0.200 0.198 98.91
0.200 0.200 100.18
3　讨论
　　通过正交试验 ,确定了黄金菊黄酮类化合物的
最佳乙醇提取条件为:乙醇浓度 85%,溶剂倍量 20
倍 ,回流时间 1h,提取次数 3次 。
　　工艺验证试验表明 ,最佳工艺的平均提取得率
高 ,稳定性好 ,且工艺操作控制容易。
　　加样回收实验结果证明:用紫外分光光度法测
定黄金菊中总黄酮的含量 ,方法的精密度与准确度
均较高 ,可作为黄金菊原料中黄酮含量指标检测的
标准方法 。
参考文献:
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(收稿日期:2007-03-23;修回日期:2007-06-07)
(本文编辑　狄亚敏)
文章编号:1008-9926(2008)01-0053-04　　中图分类号:R927.2　　　文献标识码:A
高效液相色谱法同时测定人血清中水杨酸和维生素 C浓度及其方法学研究
张华峰① ,张福成 ,王健康 ,贾恒明 ,刘真业
(①空军总医院　药学部　北京　100036)
摘　要:目的　建立高效液相-色谱法同时测定人血清中水杨酸和维生素 C的药物浓度。方法　选呋喃甲酸为内标 ,利用氨基
柱为分析柱。结果　水杨酸的线性范围为 1.16 ～ 112.78μg·ml-1 ,血清最低检测浓度 1.16μg·ml-1;维生素 C的线性范围为
4.69 ～ 75μg·ml-1 , 最低检测浓度为 4.69μg·ml-1。结论　本方法简便 、准确 、灵敏 , 特异性强 ,重复性好 , 适用于水杨酸和维生
素 C临床药动学研究。
·53·　解放军药学学报　第 24卷 第 1期　高效液相色谱法同时测定人血清中水杨酸和维生素C浓度及其方法学研究　张华峰
① 作者简介:张华峰(1964-),男 ,山东菏泽人 ,副主任药师。研究方向:临床药学。 Tel:(010)66928504