全 文 ：文章编号:1006-1126 (2006)03-0136-04
荔枝叶中黄酮甙元的分离提纯及其表征
作者简介:黄绍军 , 男 , 主要从事化学的教学和科研工作。
黄绍军 , 黄秋玲 , 黄路路 , 喻　菁
(江西中医药高等专科学校基础部 , 江西　抚州　344000)
摘　要:以荔枝叶为原料提取黄酮 , 黄酮经水解 、 溶剂萃取 、 柱层析等方法 , 得到高纯度甙元;经熔点 、 薄层
色谱 、 液相色谱 、 红外光谱 、 核磁共振法等分析方法进行结构表征 , 证实荔枝叶含有黄酮甙 , 其甙元为槲皮素
和山奈酚。
关键词:荔枝;荔枝叶;黄酮甙元;分离提纯;表征
中图分类号:S667.1 , TQ028.32　文献标识码:B
　　荔枝 (Litchi chinensis)是无患子科植物 , 是
一种营养较丰富的水果 , 产于我国福建 、广东 、 广
西等地。荔枝叶具有抗炎 、止痛 、 解暑消滞及收湿
敛疮作用[ 1-2] 。目前对荔枝的研究较多 , 但大多
是针对果实的保鲜及荔枝核的研究利用 , 没有对荔
枝叶的化学成分及药理作用进行系统的研究 , 大
量的荔枝叶没有得以利用 。黄酮类化合物广泛分布
于植物界 , 大多数具有显著生理药理活性 , 对一些
常见病多发病有重要的生理作用[ 3] , 如有抗氧化
作用和清除氧自由基作用;抗癌 、 防癌作用;用于
对心血管 、脑血管 、 动脉硬化 、高血压等疾病的治
疗 , 有其他药物不能达到的特殊疗效[ 4] 。
为此 , 开展荔枝叶中黄酮的研究 , 对了解荔枝
植株的化学成分分布 、开发荔枝系列产品具有重大
的意义 。以荔枝叶为原料运用提取 、水解 、萃取 、
柱层析 、重结晶等手段 , 得到高纯度的黄酮甙元;
并用熔点 、 TLC 、 HPLC 、 红外光谱 、 核磁共振等
分析手段进行了定性及结构表征。
1　试验部分
1.1　原料与试剂
荔枝叶于 2004 年秋采于广西陆川 。槲皮素 、
山奈酚对照品由中国药品生物制品检定所提供 。
LSA-10 大孔吸附树脂 (西安蓝深交换吸附材料
有限责任公司)、 95%乙醇 (食用)、薄层层析用硅
胶GF254 、 乙酸乙酯 (A.R)、 甲醇 (A.R)、 氯仿
(A.R)。
1.2　仪器与装置
RE-52A 型旋转蒸发仪 (上海亚荣生化仪器
厂)、 WS210S 型电子天平 (北京赛多利斯仪器系
统有限公司)、 P200Ⅱ型高压液相色谱仪 (大连依
利特分析仪器有限公司)、 Bruker AV500MHz/
DRX500超导核磁共振仪 (瑞士 Bruker 公司)、 X
-4显微熔点测定仪 (上海予华仪器有限公司)、
红外光谱仪 (5-DX美国 Nicolet公司)。
硅胶层析柱 (4.0 cm×60 cm):称取一定量硅
胶 , 加入氯仿中 , 不断搅拌使空气泡除去 , 并混合
均匀;将上述吸附着氯仿的硅胶湿法装柱 , 不断轻
敲管壁 , 使硅胶压紧 , 保持浸泡状态 , 备用。
1.3　荔枝叶黄酮的提取
荔枝叶黄酮的提取工艺如下:
荔枝叶※加水煮沸 (3次)※过滤※合并滤液
※柱吸附※水洗至无色※80%乙醇洗脱※洗脱液干
燥※粗黄酮※无水乙醇溶解※过滤※干燥※精制黄
酮。
称取破碎荔枝叶 200 g , 置于2 500 mL 圆底烧
瓶中 , 加 1 500 mL 蒸馏水 , 煮沸 30 min , 冷却过
滤 , 重复 3 次 , 合并滤液 。将滤液以 10 mL/min
的速度过大孔吸附树脂柱 (6.0 cm×60 cm)。吸附
完毕后 , 首先用蒸馏水洗柱 , 至流出液无色 , 然后
用 80%乙醇洗脱。洗脱液用旋转蒸发仪旋干 , 得
到粗黄酮 12.0 g 。粗黄酮再经无水乙醇溶解 、过滤
(重复 3次)弃残渣 , 将滤液干燥后得棕黄色精制
黄酮 5.8 g 。
1.4　荔枝叶黄酮的HPLC分析
1.4.1　色谱条件
第 35 卷　第 3 期
2006 年 9 月 　　　　　　　　　　　　　
广 西 林 业 科 学
Guangxi Forestry Science
　　　　　　　　　　　　　　　Vol.35　No.3
Sep.2006
色谱柱:Turner YWG C18 (5 μm , 4.6 mm×
250 mm);流动相:V甲醇:V水:V磷酸 =60:40:
0.3;流速:1.0 mL/min　检测波长:360 nm 　灵
敏度:0.005　柱温:室温
1.4.2　标准溶液及样品制备
分别配制浓度为 0.2 mg/mL 的槲皮素 、 山奈
酚标准溶液。准确吸取槲皮素标准溶液和山奈酚标
准溶液各 1 mL , 置入 10 mL 容量瓶中 , 用甲醇定
容 、 摇匀 , 得槲皮素 、 山奈酚混合标样。
准确称取精制黄酮 60.00 mg , 置于 50 mL 圆
底烧瓶中 , 加入甲醇 30 mL 和盐酸 (1:1)10
mL , 水浴加热回流水解 1 h , 然后用甲醇定容至
50 mL 得样品待测溶液 。分别取标准溶液及样品溶
液 10 μL 进样 , 色谱图见图 1和图 2。
　　样品中两大峰的保留时间分别与标准溶液中槲
皮素及山奈酚的保留时间一致 。
1.5　黄酮甙元的分离提纯
1.5.1　荔枝叶黄酮的水解
称取精制黄酮 5.0 g , 加入甲醇 200 mL 和盐
酸 (1∶1)50 mL , 加热回流水解 2 h , 然后浓缩成
浸膏状 , 然后用乙酸乙酯回流提取 3 次 , 合并滤
液 , 减压蒸干得到紫红色糖浆状固体 1.5 g 。
1.5.2　甙元的分离提纯
取上述糖浆状固体 1.5 g , 加入少量甲醇充分
溶解 , 然后加入 5 g 硅胶 (300 ～ 400目)拌匀 , 置
于真空干燥箱于 60℃下烘干。取经过处理过的样
品加于硅胶柱顶 , 边加边轻敲管壁除去气泡 。以氯
仿-甲醇 (50∶1※10∶1)梯度洗脱 , 流速 1 ～ 2
滴/ s , 每 100 mL 收集 1份 , 共收集了 32份。
将收集到的洗脱液敞口放置 , 让溶剂慢慢挥发
自然结晶 。其中 9-11份析出淡黄色絮状固体 , 22
-27份析出黄色针状晶体;待晶体大量析出后过
滤除去母液 , 再用少量氯仿冲洗掉晶体上的母液后
晾干。使用氯仿 -甲醇 (9∶1)作展开剂 , 进行
TLC分析 , 9-11 份晶体都只有只有一个点 , 且
Rf值皆为 0.32 , 但有拖尾;22-27份晶体也都只
有一个点 , 且 Rf值皆为 0.18 , 但也有拖尾。因此
把 Rf值相同的晶体合并 , 用氯仿-甲醇 (5∶1)重
结晶 , 最后分别得到黄色针状晶体 A 和淡黄色针
状晶体 B。
2　样品分析
2.1　熔点的测定
取少量结晶A 样品 , 采用 X-4显微熔点测定
仪进行熔点测定 , 5 次测定平均结果为 309.2 ～
310.7℃, 与槲皮素熔点相符[ 5] 。同理 , 结晶 B 样
品测定结果为 276.4 ～ 278.6℃, 与山奈酚熔点相
符[ 6] 。
2.2　TLC分析
分别取样品和混合标样进行 T LC 分析 , 展开
剂为甲苯∶氯仿∶丙酮=40∶25∶35 , 结晶 A 与槲皮
素 Rf值一致 , Rf=0.50;结晶B与山奈酚 Rf值一
致 , Rf=0.72。
2.3　HPLC分析
将所得两结晶体A 、 B进行 HPLC分析 , 采用
保留时间定性 。样品色谱图见图 3和图 4。
137第 3 期　　　　　　　黄绍军 , 黄秋玲 , 黄路路 , 等:荔枝叶中黄酮甙元的分离提纯及其表征
2.4　IR分析
采用 KBr 压片法 , 在波数为 5000 ～ 400cm-1
范围分别对结晶 A 和槲皮素对照品进行扫描 , 图
谱见图 5和图 6;对结晶 B和山奈酚对照品进行扫
描 , 图谱见图 7和图 8。
138 广 西 林 业 科 学　　　　　　　　　　　　　　　　　第 35 卷
　　结晶 A 与槲皮素对照品的红外光谱图在指纹
区各峰的波数一致 , 结晶 B 与山奈酚对照品的红
外光谱图在指纹区各峰的波数一致 。
2.5　NMR分析
2.5.1　结晶A 的 NMR分析
1H -NMR (500MHz , DMSO ,δppm):6.2
(1H , d , J =1.9Hz , 6-H), 6.4 (1H , d , J=
1.9Hz , 8 -H), 7.8 (1H , d , J =1.5Hz , 2′-
H), 6.9 (1H , d , J=8.4Hz , 5′-H), 7.7 (1H ,
dd , J=8.4 、 1.5Hz , 6′-H)。
13　C-NMR (100MHz , DMSO ,δppm):146.6
(C-2), 135.5 (C -3), 176.0 (C -4), 156.8
(C-5), 97.8 (C -6), 164.2 (C -7), 93.0 (C
-8), 161.1 (C-9), 103.1 (C-10), 122.8 (C
-1′), 114.6 (C -2′), 144.8 (C -3′), 147.3
(C-4′), 114.8 (C-5′), 120.3 (C-6′)。
结晶 A样品的 NMR图谱显示各化学位移数值
与槲皮素相同[ 5] 。
2.5.2　结晶 B的 NMR分析
1H -NMR (500MHz , DMSO ,δppm):6.2
(1H , d , J =1.8Hz , 6-H), 6.4 (1H , d , J=
1.8Hz , 8 -H), 8.1 (1H , d , J =8.8Hz , 2′-
H), 6.9 (1H , d , J=8.8Hz , 3′-H), 6.9 (1H ,
d , J=8.8Hz , 5′-H), 8.1 (1H , d , J=8.8Hz ,
6′-H)。
13　 C - NMR (100MHz , DMSO , δppm):
146.7 (C -2), 136.0 (C -3), 176.0 (C -4),
156.9 (C -5), 97.9 (C -6), 164.2 (C -7),
93.1 (C -8), 161.1 (C -9), 103.2 (C -10),
122.4 (C-1′), 129.3 (C-2′), 114.9 (C-3′),
159.2 (C-4′), 114.9 (C-5′), 129.3 (C-6′)。
结晶 B样品的 NMR图谱显示各化学位移数值
与山奈酚相同[ 6-7] 。
3　结论
试验结果表明 , 荔枝叶中含有黄酮甙 , 其甙元
分别为槲皮素和山奈酚 。
参考文献
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