全 文 ：树头发菌丝体最适培养基的正交试验研究
蒋盛岩,陈立德,赵良忠,段林东,余有贵
(邵阳学院 生物与化学工程系,湖南 邵阳 422000)
摘 要:采用四因素三水平的正交试验设计培养树头发菌丝体,对菌丝体直径进行测量及分析,探讨树头
发菌丝体适宜的培养条件.结果表明:树头发菌丝体培养的各因素影响程度为培养基的 pH值 >蛋白胨 >磷酸二
氢钾 >葡萄糖,最适培养条件为:葡萄糖 15g/L,蛋白胨 5.0g/L,KH2PO40.25g/L,pH值 5.8.
关 键 词:树头发;菌丝体;正交试验
中图分类号:Q949.3 文献标识码:A
收稿日期: 2007-03-30
基金项目: 湖南省教育厅资助项目(03C438)
作者简介: 蒋盛岩(1967- ),男,湖南隆回人,邵阳学院副教授,主要从事生物技术研究.
文章编号:1672-7010(2007)04-0088-03
StudyontheoptimumcultureconditionsofPterulaumbrinelaBres.myceliumbyorthogonalexperiment
JIANGSheng-yan,CHENLi-de,ZHAOLiang-zhong,DUANLin-dong,YUYou-gui
(DepartmentofBiologicalandChemicalEngineering,ShaoyangUniversity,HunanShaoyang422000,China)
Abstract:TheoptimumcultureconditionofPterulaumbrinelaBres.wasinvestigatedbytheorthngonalexperimentinfourfac-
torsandthreelevels.TheresultshowedthattheorderofthefactorsinfluencingmyceliumgrowthwaspH>peptone>KH2PO4>glucose
andtheoptimumcultureconditionswereglucose15g/L,peptone5.0g/L,KH2PO40.25g/L,pH5.8.
Keywords:PterulaumbrinelaBres.;mycelium;orthogonalexperiment
树头发(PterulaumbrinelaBres.)是珊瑚菌科龙
须菌属的一种药用真菌,别名黑龙须、银头发,细丝
状,黑色,担子果丛生,质韧,基部细圆柱形,向上渐
细,干后象人头发,生于高山,多附于潮湿的黄栎树
皮裂缝中,或悬挂在树枯枝上,具有止咳止痛,接骨
消肿的作用[1,2],目前还不能人工栽培,本文研究了树
头发菌丝体的培养条件,结果报道如下.
1材料与方法
1.1实验菌株
实验菌株为树头发,由邵阳学院蒋盛岩、段林东
自湖南洞口雪峰山分离.分离菌种用的培养基是
MMN培养基:葡萄糖 20g,CaCl20.05g,MgSO40.15g,
KH2PO40.5g,NaCl0.025g,(NH4)2HPO40.25g,FeCl3(1%)
1.2ml,琼脂 20g,麦芽汁(12.7波美)80ml,维生素 B1
100μg,加蒸馏水至 1000ml,pH6.0左右.
1.2方法
1.2.1培养基正交试验设计
选取葡萄糖、蛋白胨、磷酸二氢钾、pH值 4个因
素,以四因素三水平的正交试验 L9(34),设置 2个重
复,确定树头发菌丝体最佳培养条件,各因素水平安
排见表 1.
1.2.2配制培养基
根据表 1,按四因素三水平的正交试验 L9(34)设
计,配制 9种培养基,0.11Mpa灭菌 20min.
1.2.3接种
第4卷 第4期
2007年12月
邵阳学院学报(自然科学版)
JournalofShaoyangUniversity(NaturalScienceEdition)
Vol.4No.4
Dec.,2007
无菌条件下接种.接种块绿豆粒大小,接种到装
有 50ml培养基的 100ml三角瓶内,置于 26.2℃温箱
内培养.
1.2.4最佳培养条件的选择
菌丝体培养 15d后,测量菌丝体生长直径,对数
据进行直观分析和方差分析,找出该菌种菌丝体培
养的主要影响因素和各因素的最优水平,确定最佳
培养基配方.
2结果与分析
2.1正交试验结果直观分析
树头发菌丝体培养的正交试验结果见表 2,A
因素 Kn值中,K2最大,说明 A因素最优水平为 2
[15g/L],同理 B因素最优水平为 2[5.0g/L],C因素最
优水平为 1[0.25g/L],D因素最优水平为 2[pH5.8].由
表 2数据可知:D因素[pH]的 R值最大,因素的极差
越大,说明该因素的变动对结果的影响越大,即 D因
素[pH]为最重要的因素.根据表中 R值的大小,排列
出试验因素的主次顺序:
2.2正交试验结果方差分析
用 SPSS统计软件对 L9(34)正交试验结果进行数
据分析,见表 3,因素 A(葡萄糖:10、15、20g/L):F=28.
952,按 0.05检验水准,可认为因素 A效应显著,培养
基中添加葡萄糖的量对菌丝体的培养有显著影响.
因素 B(蛋白胨:2.5、5.0、7.5g/L):F=44.024,按 0.05
检验水准,可认为因素 B效应显著,培养基中添加蛋
白胨的量对菌丝体的培养有显著影响.因素 C(磷酸
二氢钾:0.25、0.5、0.75g/L):F=4.167,按 0.05检验水
准,可认为因素 C效应不显著,在实验设置的范围
内,培养基中添加磷酸二氢钾的量对菌丝体的培养
基本无影响.因素 D(pH:5.5、5.8、6.1):F=446.881,按
0.05检验水准,可认为因素 D效应极显著,不同 pH
值的培养基对菌丝体的培养有极显著影响.D因素
(pH)的 F值最大,F数值越大,表明该因素采取不同
的水平对试验结果影响显著,所以对 D因素(pH)应
控制在最优水平上(即 pH5.8),与直观分析的结果基
本一致.
蒋盛岩,陈立德,赵良忠,段林东,余有贵:树头发菌丝体最适培养基的正交试验研究第 4期 89
表 3 正交试验方差分析表
3 讨论
树头发具有止咳止痛,接骨消肿的功能,具有重
要的药用价值,是苗医和瑶医用来止咳止痛、接骨消
肿的传统特效药物,是一种宝贵的药用资源,但到目
前这止,国内外没有相关的中成药产品,也未见该药
物的研究报道,开发树头发这一药用真菌资源对民
族药物的发展具有重要意义.我们对树头发的菌丝
体生长条件进行研究,最适培养条件为:葡萄糖
15g/L,蛋白胨 5.0g/L,KH2PO40.25g/L,pH值
5.8,这一结果为树头发菌丝体的人工发酵提供参考
依据.
参考文献:
[1]《全国中草药汇编》汇编组.全国中草药汇编(下册)
[M].北京:人民卫生出版社,1978,420.
[2]江苏新医学院编.中药大辞典(下册)[M].上海:上海
人民出版社,1986,1536.
邵阳学院学报(自然科学版) 第 4卷90