全 文 ：HPLC法同时测定软蒺藜中 2种黄酮类化学成分的含量
赵排风
(河南省灵宝市食品药品检验所 , 灵宝 472500)
摘要　目的:建立同时测定软蒺藜中异鼠李素 -7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷和苜蓿素 2种黄酮类成分含量的方法。方法:采
用 HPLC法 , 用 HIQsilC18W色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)分离 , 以甲醇 -水(60∶40)为流动相 ,流速 0.8mL· min-1 ,检测
波长 360 nm, 柱温 30 ℃。结果:异鼠李素 -7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷和苜蓿素 2种成分的线性范围分别为 3.223 ～ 80.58
μg· mL-1(r=0.9997)和 1.720 ～ 43.00μg· mL-1(r=0.9995), 方法回收率(n=9)分别为 100.5%和 98.7%。结论:本方法
简便 、快捷 ,结果准确 , 重复性好 ,可应用于软蒺藜中异鼠李素 -7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷和苜蓿素 2种黄酮类化学成分含
量的同时测定。
关键词:软蒺藜;异鼠李素 -7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷;苜蓿素;高效液相色谱法
中图分类号:R917　　　文献标识码:A　　　文章编号:0254-1793(2009)11-1873-04
HPLCsimultaneousdeterminationoftwoflavonoidinthe
AtriplexcentralasiaticaL.
ZHAOPai-feng
(LingbaoInstituteforFoodandDrugControl, Lingbao472500, China)
Abstract　Objective:Todevelopasimpleandsensitivechromatographymethodforsimultaneousdeterminationof
twochemicalconstituents(isorhamnetin-7 -O-α-L-rhamnopyranosideandtricin)extractedfromtheAtriplex
centralasiaticaL..Methods:SeparationwasperformedonaHIQsilC18Wcolumn(250 mm×4.6 mm, 5 μm)with
methanol– water(60∶40)asmobilephaseataflowrateof0.8 mL· min-1.Thedetectionwascariedoutat360
nmandacolumntemperatureof30 ℃.Results:Thecalibrationcurvewaslinearintherangesof3.223 -80.58 μg
· mL-1(r=0.9997)forisorhamnetin-7 -O-α-L-rhamnopyranoside, 1.720 -43.00 μg· mL-1 (r=
0.9995)fortricin;Theaveragerecoveries(n=9)ofthetwocompoundswere100.5% and98.7%, respectively.
Conclusion:Themethodissimple, accurateandselective.ItcanbeappliedtodeterminetwoflavonoidsintheAtri-
plexcentralasiaticaL.
Keywords:AtriplexcentralasiaticaL.;isorhamnetin-7-O-α-L-rhamnopyranoside;tricin;HPLC
　作者　Tel:(039)88666746;E-mail:zpaifeng yjs@163.com
软蒺藜为双子叶藜科植物中亚滨藜 (Atriplex
centralasiaticaL.)的干燥成熟果实 [ 1] 。始载于 《神
农本草经》 ,为历版中国药典收载之中药 ,主要生
于盐碱地 ,我国主要分布于东北 、西北 、华北等地。
其味苦 、性平 ,具有祛风 、活血 、清肝 、明目的功效 ,
可用于治疗结膜炎 、头痛 、皮肤瘙痒 、肿毒 、乳汁不
通 [ 2] 。软蒺藜含有皂苷 、黄酮 、生物碱 、多糖等化
合物 ,其他尚含甾类 、氨基酸类 、萜类 、脂肪酸 、无
机盐等成分 ,其主要化学成分为黄酮 ,且被认为是
主要的活性成分之一 。黄酮类成分有促进混合培
养的鼠视网膜神经细胞存活的作用 ,故软蒺藜有
可能被开发成为保护视力 、治疗青光眼的一种新
药 [ 3] 。苜蓿素能抑制小肠蠕动收缩 ,并有抗氧化 、
抗肿瘤等生物活性 [ 4 ～ 6] ;异鼠李素 -7 -O-α-L
-吡喃鼠李糖苷 ,具有抗氧化 ,保护心血管和抗血
栓的药理活性 [ 7] 。除了关于软蒺藜中 3种黄酮苷
元(槲皮素 、山柰酚 、异鼠李素)含量的报道 [ 8]及
软蒺藜中总黄酮的含量测定的报道 [ 9] ,国内外未
见有关软蒺藜中异鼠李素 -7 -O-α-L-吡喃
鼠李糖苷和苜蓿素 2种成分同时进行含量测定
—1873—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(11)DOI :10.16155/j.0254-1793.2009.11.016
的报道 。因此 , 本文选择苜蓿素和异鼠李素 -7
-O-α-L-吡喃鼠李糖苷作为定量的指标 , 建
立高效液相色谱同时测定软蒺藜中此 2种黄酮
类化学成分含量的方法 ,为评价软蒺藜药材质量
提供依据 。
1　仪器与材料
LC-10ATVP高效液相色谱仪:SPD-10AVP
紫外检测器(日本 Shimadzu公司);Anastar色谱工
作站(美国 SuntekScience公司)。余姚记铭称重校
验设备有限公司 JM3102型电子分析天平 ,湘仪天
平仪器厂 TG332A电子分析天平 。
异鼠李素 -7 -O-α-L-吡喃鼠李糖苷和苜
蓿素(自制 , 通过 NMR及参考文献鉴定结构 ,由
HPLC面积归一化法标定纯度大于 98%),甲醇(色
谱纯 ,天津市康科德科技有限公司),甲醇(分析纯 ,
沈阳市医药公司化玻站试剂分装厂),水为重蒸馏
水 。
从安徽省亳州市收集了 3批软蒺藜药材 ,经沈
阳药科大学中药学院路金才副教授鉴定为中亚滨藜
(AtriplexcentralasiaticaL.)的干燥成熟果实。
2　方法与结果
2.1　色谱条件　色谱柱:HIQsilC18W(250 mm×
4.6 mm, 5 μm),流动相:甲醇 -水(60∶40, v/v),检
测波长:360 nm,柱温:30℃,流速:0.8 mL· min-1 ,
进样量:20 μL。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品储备液　取异鼠李素 -7 -O-α-L
-吡喃鼠李糖苷和苜蓿素对照品各适量 ,精密称定 ,
分别置于 10 mL量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度 ,
摇匀 , 即得上述 2种化合物浓度分别为 0.3223
mg· mL-1和 0.1720 mg· mL-1的单一成分对照品
溶液。
2.2.2　供试品溶液　取软蒺藜药材粉末 (过 60
目筛)1.0 g,精密称定 ,加甲醇 20 mL,加热回流提
取 2 h,浓缩提取液 ,回收溶剂 ,残渣用甲醇溶解并
转移至 10 mL量瓶中 ,并加甲醇稀释至刻度 ,摇
匀 ,用微孔滤膜(0.45 μm)过滤 ,取续滤液作为供
试溶液 。
2.3　系统适用性试验　精密吸取对照品溶液和供
试品溶液各 20 μL,在上述色谱条件下进样分析 ,记
录色谱图 ,结果见图 1。理论塔板数按苜蓿素计算
不低于 3000,异鼠李素 -7-O-α-L-吡喃鼠李糖
苷和苜蓿素色谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于
1.5,拖尾因子分别为 0.98和 1.01。
图 1　对照品(A)及样品(B)色谱图
Fig1　HPLCchromatogramsofreferencesubstancesoftwoflavonoids
(A)andsampleofAtriplexcentralasiatica(B)
1.异鼠李素-7-O-α-L-吡喃鼠李糖苷(isorhamnetin-7 -O-α
-L-rhamnopyranoside)　 2.苜蓿素(tricin)
2.4　线性关系考察　依次精密量取异鼠李素 -7 -
O-α-L-吡喃鼠李糖苷对照品储备液 0.1, 0.4,
0.8, 1.2, 1.6, 2.0, 2.5 mL,分别置 10 mL量瓶中 ,再
依次精密量取苜蓿素对照品储备液 0.1, 0.6, 1.2,
1.6, 1.8, 2.0, 2.5 mL,按顺序置于上述 10 mL量瓶
中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得系列浓度对照品
混合溶液 。分别取上述混合溶液各 20 μL进样 ,在
上述色谱条件下进行分析。以各溶液浓度 X(μg·
mL-1)为横坐标 ,峰面积 Y为纵坐标 ,绘制标准曲线
并进行回归计算 ,得异鼠李素 -7 -O-α-L-吡喃
鼠李糖苷和苜蓿素回归方程分别为:
Y=1.492 ×104X-3.192×102　r=0.9997
Y=3.666 ×104X+1.019×103　r=0.9995
线性范围分别为 3.223 ～ 80.58和 1.720 ～ 43.00
μg· mL-1。
2.5　精密度试验　精密吸取对照品混合溶液 20
μL,连续进样 6次 ,计算异鼠李素 -7 -O-α-L-
吡喃鼠李糖苷和苜蓿素峰面积的 RSD分别为
0.52%和 0.78%。
2.6　重复性试验　精密称取同一软蒺藜样品 6份 ,
按 “ 2.2.2”项下方法制备供试品溶液 ,在上述色谱
条件下进样分析 ,异鼠李素 -7 -O-α-L-吡喃鼠
—1874— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(11)
李糖苷和苜蓿素含量平均值(n=6)分别为 0.239
mg·g-1和 0.128 mg· g-1 , RSD分别为 1.3%和
1.5%。
2.7　回收率试验　精密称取 9份已知含量的软蒺
藜药材(No.1),每份约 0.5 g,分别加入高 、中 、低 3
种质量浓度的异鼠李素 -7 -O-α-L-吡喃鼠李
糖苷对照品储备液(0.2, 0.4, 0.6 mL)和苜蓿素对
照品储备液(0.4, 0.8, 1.2 mL),依 “2.2.2”项下方
法制备溶液 ,在上述色谱条件下进样分析 。结果:异
鼠李素 -7 -O-α-L-吡喃鼠李糖苷低中高浓度
的回收率 (n=3)分别为 99.6%(RSD=2.1%),
101.2%(RSD=2.7%), 100.8%(RSD=2.3%),平
均值(n=9)为 100.5%;苜蓿素低中高浓度的回收
率(n=3)分别为 97.8%(RSD=1.6%), 98.0%
(RSD=1.6%), 100.5%(RSD=3.2%);平均值
(n=9)为 98.7%。
2.8　稳定性试验　取供试品溶液 ,室温下放置 ,分
别于 0, 4, 8, 12, 24 h进样测定。测得异鼠李素 -7
-O-α-L-吡喃鼠李糖苷和苜蓿素峰面积的 RSD
(n=5)分别为 1.4%和 1.6%,表明供试品溶液在
24 h内稳定 。
2.9　样品测定　取 3批软蒺藜样品粉末各 1.0 g,
分别按 “2.2.2”项下方法制备供试品溶液 ,在上述
色谱条件下进样分析 ,以峰面积按外标法计算不同
批次软蒺藜药材中异鼠李素 -7 -O-α-L-吡喃
鼠李糖苷和苜蓿素含量 ,测定结果见表 1。
表 1　样品中异鼠李素 -7-O-α-L-
吡喃鼠李糖苷和苜蓿素含量测定结果(mg· g-1)
Tab1　Contentsofisorhamnetin-7-O-α-L-
rhamnopyranosideandtricinintheseedsofAtriplex
centralasiaticasamples
样品
(sampleNo.)
异鼠李素 -7-O-α-L-吡喃
鼠李糖苷(isorhamnetin-7-O-α-L-
Rhamnopyranoside)
苜蓿素
(tricin)
1 0.243 0.124
2 0.216 0.108
3 0.265 0.139
3　讨论
3.1　提取方法的选择　比较了超声和回流 2种提
取方法 ,虽然超声操作较为简便 ,但是待测组分的提
取效率不及回流的提取效率高 ,所以最终选择了回
流提取;在提取溶剂的考察中 ,选择了各种比例的甲
醇和乙醇水溶液 ,结果发现乙醇的提取效率不及甲
醇的提取效率高;提取时间比较了回流 1.0, 1.5, 2.
0, 2.5 h,结果表明回流 2 h即可提取完全;提取次数
比较了 1, 2, 3次 ,结果表明 ,每次 2 h提取 3次与提
取 1次测得含量差异不大 ,考虑到中间损失且误差
大 ,因此确定提取条件为甲醇回流提取 2 h, 1次。
提取溶剂甲醇的用量比较了 10, 20, 30 mL,结果表
明 , 20 mL已提取完全 。最终选择 20 mL甲醇回流
提取 2 h, 1次 。
3.2　色谱柱的选择　比较了不同厂家的色谱柱 ,考
察了 HIQsilC18W(250 mm×4.6 mm, 5 μm)和 Dia-
monsilC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)色谱柱。结果
待测黄酮在各柱上的分析时间接近 ,但保留行为却
差异很大 , HIQsilC18W(250 mm×4.6 mm, 5 μm)
色谱柱能够对样品实现良好的分离。
3.3　流动相的选择 　首先考察了一定比例
(70∶30)的甲醇 -水和乙腈 -水系统 ,发现甲醇 -
水系统对样品中的组分实现较好的分离 ,故决定选
用甲醇 -水系统;又进一步考察了不同比例
(60∶40;70∶30;80∶20)的甲醇 -水系统 ,发现甲醇
-水(60∶40)系统对样品中的组分已经可以实现较
好的分离 ,故决定选用甲醇 -水系统(60∶40);添加
不同比例磷酸和醋酸调节 pH,结果表明 ,在流动相
中添加酸对于改善峰形并没有帮助 ,最终选择流动
相为甲醇 -水(60∶40)。
3.4　检测波长的选择　在 200 ～ 400 nm波长内扫
描 ,异鼠李素 -7 -O-α-L-吡喃鼠李糖苷在 370
nm处有最大吸收 ,苜蓿素在 348 nm处有最大吸收 ,
兼顾两者在 360 nm处均有较强的吸收 ,且干扰峰相
对较少 ,故选 360 nm为测定波长 。
3.5　小结　作者建立了 HPLC法同时测定软蒺藜
中 2种黄酮类化学成分的含量 , 该法具有简单 、快
速 、灵敏的特点 ,在一定浓度范围内 , 2种成分的质
量浓度与峰面积均成良好的线性关系 ,回收率高 ,无
干扰 。因此能准确可靠地测定 2种黄酮类化学成分
的含量。可以为软蒺藜药材的质量控制和综合评价
提供分析方法 。
参考文献
1　 CHENWei-qi(陈伟启), LIXiao-yan(李小燕).Theidentica-
tionofTribulusterrestrirsL.andconfusedAtriplexcentralasiaticaL.
(蒺藜与混淆品软蒺藜的鉴别).ChinTraditHerbDrugs(中草
药), 2002, 34(4):365
2　 JiangsuNewMedicalCollege(江苏新医学院).TheChineseTradi-
tionalMedicineDictionary(中药大辞典).Shanghai(上海):Shang-
haiPeoplesPublishingHouse(上海人民出版社), 1977.1324
3　 CHUShu-di(褚书地), QUWei-jing(瞿伟菁), LIMu(李穆),
—1875—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(11)
etal.Researchadvanceonchemicalcomponentandpharmacological
actionofTribulusterestris(蒺藜化学成分及药理作用研究进展).
ChinWildPlantResour(中国野生植物资源), 2003, 22(4):4
4　 JiangsuNewMedicalColege(江苏新医学院).TheChineseTradi-
tionalMedicineDictionary(中药大辞典).Shanghai(上海):Shang-
haiScienceandTechnologyPublishers(上海科技出版社), 1986.
1305
5　 WangHK, XiaY, YangZY, etal.Recentadvancesinthediscovery
anddevelopmentofflavonoidsandtheiranaloguesasanti-tumor
andanti-HIVagents.AdvExpMedBiol, 1998, 439:191
6　 HudsonEA, DinhPA, KokubunT, etal.Characterizationofpoten-
tialychemopreventivephenolsinextractsofbrownricethatinhibit
thegrowthofhumanbreastandcoloncancercels.CancerEpidemiol
BiomarkerPrev, 2000, 9(11):1163
7　 SenatoreF, AgostinoM D, DiniI.FlavonoidglycosidesofBarbarea
vulgarisL.JAgricFoodChem, 2002, 48:2659
8　 SHIQin(师勤), YUBo-yang(于伯阳), XULuo-shan(徐珞
珊), etal.Determinationofthreehydrolyticflavonoidaglyconesin
TribulusterrestrisandAtriplexcentralasiaticabyRP-HPLC(反相高
效液相色谱法测定蒺藜类 3种水解黄酮苷元的含量).ChinJ
PharmAnal(药物分析杂志), 1999, 19(2):75
9　 ZHAOPai-feng(赵排风).Studyondeterminationandextraction
oftotalflavonoidsinseedsofAtriplexcentralasiatica(软蒺藜中总黄
酮的含量测定及其提取工艺的优化).JHenanUniv(MedSci)
(河南大学学报 医学版), 2009, 28(2):115
(本文于 2009年 9月 25日收到)
“第二届中美药品分析技术与检测方法研讨会 ”成功召开
　　第二届中美药品分析技术与检测方法研讨会于 2009年 11月 6日至 8日在广州市成功召开。研讨会由中检所和美
国药典会主办 ,广州市药品检验所承办 ,会议主题为 “药品质量与生命安全”。
今年 3月 ,中检所与美国药典会签署了合作备忘录。本次会议是落实合作备忘录的内容之一。国家食品药品监督
管理局 、中检所 、美国药典委员会 、国家药典委员会 、广州市政府 、广州市食品药品监督管理局等部门的相关领导出席到
会 ,来自全国各地包括香港 、澳门地区 、各级药品检验检测机构 、科研院所 、高等院校 、一些知名仪器公司和著名制药企业
等相关领域的专家 、学者和技术人员 400余人参加了本次会议。
国家食品药品监督管理局副局长边振甲出席会议开幕式并作了重要讲话。他指出 ,药品检验检测工作是药品监管工
作的重要技术支撑, 是监管科学性的主要保障 ,国家局始终把发展药品分析技术 ,支持药品检验工作作为推进药品监管的
着力点。不断提高检验检测技术 , 是加强药品监管工作的需要 , 是确保药品质量与安全的需要 , 是确保公众健康的需要。
当前, 积极开展国际交流与合作 ,集中各国专家共同的智慧 ,研究药品分析技术的新问题、老难题, 已经成为各国的共识。
新技术和新方法要能及时地转化为具体的监管措施 ,要能转化为实实在在的监管效果 ,要能切实提高药品质量。
中检所所长李云龙致开幕辞。他表示 , 总结我国药品检验事业的发展 ,开阔国际视野 ,重视国际交流与合作 ,是不断
提高我国药品检验检测能力的一条重要途经。近年来 ,中检所积极推行能力建设的 “国际战略”, 自觉与国际先进水平
对比 、看齐 , 不断加大了与发达国家合作与交流的力度。 进一步加强和深化与美国 USP的广泛合作 , 已经构成了 “中国
药检”国际战略的重要组成部分。希望中国药检系统 , 抓住机遇 , 通过借鉴美国 USP的有益经验 , 不断提高检验检测能
力和水平。同时也相信 ,中国在药品检验和药物分析技术方面所进行的积极探索和有益尝试 ,也会给美国 USP的同行
们提供有益的帮助和参考。希望通过我们的努力 , 不断提高中美药品质量控制水平 , 更好地服务公众健康。 紧紧围绕
“药品质量与生命安全”这一研讨会主题 ,坦诚交流 , 取长补短 ,共同提高 ,把交流的成果尽可能多 , 尽可能快地转化为控
制药品质量 ,确保人民用药安全的新技术 ,新方法 , 以造福两国人民。
会议期间 ,共有 4位国外专家和 6位国内专家做了特邀报告 , 内容包括:USP热点话题 、中国药典的发展与展望 、现
代分析技术在药品质量控制中的应用 、残留溶剂 、残留溶剂控制从附录进入各论 、杂质 、中国药典杂质检查进展 、辅料的
性能和功能及其与 QC的关系 、中国药用辅料的现状与质量控制 、溶出度试验及国内外溶出度结果判定的比较等。
国内外专家与参会代表还就共同关心的问题进行了面对面的深入探讨 ,专家们结合在药品检测技术研究和应用方
面取得的经验 ,从不同的层面解答了大家在工作中遇到的实际问题。
另外 ,此次研讨会期间中美双方对合作谅解备忘录执行计划的执行情况进行了广泛交流 , 进一步落实了下一步的合
作内容 ,并计划明年四月再一次交流相关计划的进展情况。
本届研讨会得到了媒体高度关注。广州电视台分别对李云龙和美国药典会首席执行官罗杰.威廉姆斯先生进行采
访并做了专题报道。 CCTV、健康报和中国医药报的记者也为会议进行了相关的新闻报道。
(药品检验处供稿)
—1876— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2009, 29(11)