全 文 ：第 28 卷 第 2 期 河南大学学报(医学版) Vol.28　No.2
2009 年 5 月 Journal o f Henan University (Medical Science) May.2009
软蒺藜中总黄酮的含量测定及其提取工艺的优化
赵排风
(灵宝市食品药品检验所 , 河南 灵宝 472500)
摘　要:目的:测定软蒺藜中总黄酮的含量并优选提取工艺。方法:采用紫外分光光度法测定软蒺藜中总黄酮的含
量 ,并利用正交实验设计法对影响软蒺藜提取效果的因素进行了研究。结果:测得软蒺藜中总黄酮的含量为
0.44%, 得到最佳醇提工艺条件是:提取温度 80 ℃,提取时间 2 h ,乙醇浓度 75%。结论:首次从软蒺藜中提取出总
黄酮 ,且该方法操作简便 , 结果准确 ,实验结果令人满意。
关键词:软蒺藜;总黄酮;比色测定法;正交实验
中图分类号:TQ460.6　　　文献标识码:A 文章编号:1672-7606(2009)02-0115-03
　收稿日期:2009-01-17
　作者简介:赵排风(1967-), 女 ,河南灵宝人 , 副主任药师 ,从事食品药品检验工作。
Study on determination and extraction oftotal flavonoids in seeds of
Atriplex centralasiatica
ZHAO Pai-feng
(Institute for Food &Drug Control of Lingbao Lingbao , Henan 472500 ,China)
Abstract:Objective:　To determine and select the best pr ocess of e xtr action o f the to tal flav onoid in seeds o f
A triple x centrala siatica.Methods:　The total flavonoid in the seeds o f A t riplex centralasiatica was determined by
UV and the o r thogonal design was used as guide in the pro ce ss of ex traction of seeds o f A triplex centra lasiatica.
Results:　The contents of to tal flavono id in the seeds o f A triplex centralasiatica wa s 0.41%, the optimum condition
for the ext raction of the to tal flav onoid in seeds of A triplex centra lasiatica wa s 100ml 75% alcoho l , 2 hour s fo r three
times unde r tempe rature of 80 ℃.Conclusion:　The to tal flav onoid in seeds o f A triple x cent ralasia tica is ex tracted
for the first time , and the method is simple and the outcomes o f the experiments are satisfacto ry.
Key words:Atriplex centralasia tica;Clo rime try;Othogonal design
　　软 蒺 藜为 藜 科 植物 中 亚滨 藜 Atrip lex
centralasiat ica L.的干燥种子[ 1] ,产于荒野和平原荒
漠 ,我国的吉林 、辽宁 、内蒙古 、河北 、山西 、宁夏 、甘
肃 、青海和西藏也有分布 。中医认为该药味苦 、平 ,具
有祛风 、活血 、清肝明目的功效 ,可用于治疗结膜炎 、
头痛 、皮肤搔痒 、肿毒 、乳汁不通[ 2] 。药理实验表明 ,
软蒺藜具有一定的抗血栓 、镇痛活性[ 3] 。其主要化学
成分为黄酮 ,被认为是主要的活性成分之一 ,但除了
关于软蒺藜中 3种黄酮苷元含量的报道[ 4] ,以及张扬
等人从该植物中分离得到六个化合物外[ 5] ,未见其他
关于软蒺藜化学成分的含量测定的报道 。我们首次
从软蒺藜中提取总黄酮 ,测定其含量 ,同时对其提取
工艺进行了优化 。
1　仪器 、试剂及样品
1.1　仪器
UV-9100型分光光度计(日本岛津)。
1.2　试剂及样品
所有试剂均为分析纯 ,对照品芦丁购自中国药品
生物制品检定所 ,软蒺藜样品购自安徽亳州 ,并经沈
阳药科大学中药学院路金才副教授鉴定为中亚滨藜
的干燥成熟果实。
2　方法和结果
2.1　测定方法依据和最大吸收波长的选择
以芦丁为对照品测定软蒺藜中总黄酮的含量 ,其
DOI :10.15991/j.cnki.41-1361/r.2009.02.007
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黄酮母核所含的自由基 ,在适当介质条件下能与金属
铝离子形成络合物而显色 ,并在可见区获得稳定的特
征吸收峰。显色后对照品和供试品溶液均在 510 nm
处有最大吸收 ,因此测定波长选择 510 nm 。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取在 120 ℃减压干燥至恒重的芦丁对照
品 20 mg ,置 100 m l容量瓶中 ,加甲醇约 50 ml ,超声
使其溶解 ,放冷 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,即得(每毫
升中含芦丁 0.2 mg)。
2.3　标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 0.0 ml , 1.0 ml , 2.0 ml ,
3.0 ml ,4.0 ml ,5.0 ml ,分别置 10 ml量瓶中各加体
系分数为 60%乙醇至 5 ml ,加 50 g/ L 亚硝酸钠溶液
0.3 ml ,摇匀 ,放置 6 min , 加 100 g/ L 硝酸铝溶液
0.3 ml ,摇匀 ,放置 6 min ,加氢氧化钠溶液 4 ml ,再
加体积分数为 60%乙醇至刻度 ,摇匀 ,放置 15 m in ,
以相应的试剂为空白 ,照分光光度法(中国药典 2005
年版一部附录 VA)在 510 nm 波长处测定吸光度。
以吸收度 A 为纵坐标 ,浓度 C为横坐标 ,绘制标准曲
线。其标准曲线方程为 C=10.131A +0.002 r =
0.9993。
2.4　提取条件的选择
2.4.1　回流法　取软蒺藜 5 g ,精密称定 ,加 75%乙
醇 100 ml ,加热回流提取 2 h ,共 3 次 ,合并滤液 ,浓
缩 ,定容到 100 ml容量瓶中 ,精密吸取 25 m l定容到
50 ml容量瓶中 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液作为供试品溶
液。
2.4.2　超声法　同 2.4.1项加入 75%乙醇 100 ml ,
超声处理 30 min ,共 3 次 ,合并滤液 ,浓缩 ,定容到
100 ml容量瓶中 ,精密吸取 25 ml定容到 50 ml量瓶
中 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液作为供试品溶液。
2.4.3　浸渍法　同 2.4.1 项加入体积分数为 75%
乙醇 100 ml ,室温浸渍 24 h ,浓缩定容到 100 m l容量
瓶中 ,精密吸取 25 m l定容到 50 ml量瓶中 ,摇匀 ,滤
过 ,取续滤液作为供试品溶液 。
上述 3 种供试品溶液 ,按照样品的测定操作 ,测
定各自的吸收度。结果表明 ,回流法吸收度值最大 ,
因此选择回流法提取 。结果如表 1。
　　表 1　不同提取方法的比较
　　Table 1　The extr act rates of different methods
提取方法 得率(%)
回流 0.45
超声 0.28
浸渍 0.19
2.5　回流法提取工艺的考察
选择温度 、回流时间 、乙醇浓度作为考察的三个
因素 ,每个因素选择三个水平 ,编制因素水平表 ,见表
2 ,采用 L 9(33)正交表进行实验 ,以软蒺藜总黄酮含
量为考察指标 ,结果如表 3。
表 2　软蒺藜提取工艺的因素水平
Table 2　Orthogonal table of the ex tract condition
因素 A(温度℃) B(回流时间 t/min) C(乙醇浓度/ %)
1 70 1.5 65
2 80 2.0 75
3 90 2.5 85
表 3　软蒺藜提取条件正交试验及结果
Table 3　Orthogonal e xperiment and results o f the ext ract
condition
序号 A B C 得率(%)
1 1 1 1 0.35
2 1 2 2 0.33
3 1 3 3 0.28
4 2 1 3 0.29
5 2 2 1 0.57
6 2 3 2 0.41
7 3 1 2 0.53
8 3 2 3 0.27
9 3 3 1 0.44
∑(1) 0.96 1.17 1.36
∑(2) 1.27 1.17 1.27
∑(3) 1.24 1.13 0.84
k(1) 0.320 0.390 0.453
k(2) 0.423 0.390 0.423
k(3) 0.413 0.377 0.280
R 0.103 0.013 0.173
由表 3得 ,影响因素依次为 C>A>B ,影响最大
的是乙醇浓度(P <0.05),但考虑到随着醇浓度越
少 ,溶剂极性大 ,杂质提取的多 ,而温度回流时间在考
察范围内影响比较小。综合考虑 ,确定各因素的最佳
水平组合为 A 2B2C2 。
2.6　供试品溶液的制备
取软蒺藜 5 g ,加入 100 m l体积分数为 75%乙醇
水溶液 ,回流提取 2 h ,共 3 次 ,合并滤液 ,浓缩 ,定容
到100 m l容量瓶中 ,精密吸取25 m l定容到 50 m l量
瓶中 ,作为供试品溶液。
2.7　样品的测定
精密吸取供试品溶液 2 ml置 10 ml量瓶中 ,按
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照标准曲线制备项下的方法 ,自“各加体系分数为
60%乙醇至 5 m l”起依法测定吸收度 ,计算软蒺藜总
黄酮的含量 ,结果如表 4。
表 4　软蒺藜中总黄酮含量
Table 4　To tal flavones of A triplex centr alasiatica
批次 称重(g) 黄酮含量(%) 平均值(%) RSD(%)
1 5.003 0.426
2 5.011 0.463 0.443 4.23
3 5.009 0.439
2.8　精密度试验
精密吸取对照品溶液 3 m l ,同一供试品溶液 2
ml ,各 5份 ,同标准曲线和样品测定的操作 ,测定吸
收度 ,结果表明 ,对照品吸收度的 RSD =0.78%(n=
5),供试品吸收度的 RSD=1.37%(n=5),说明精密
度良好。
2.9　稳定性试验
精密吸取供试品溶液 2ml 同样品测定的操作 ,
在 0 、15 、30 、45 、60 min 测定其吸收度 ,结果表明 ,供
试品溶液吸收度的 RSD =1.54%(n=5),说明供试
品溶液在 60 min 内基本稳定 。
2.10　重复性试验
取同一样品 3份 ,按照样品的测定进行实验 ,测
定每份样品的总黄酮含量。结果表明 ,平均含量为
0.42%,RSD=1.13%(n=5),说明本法的重复性良
好。
2.11　回收率试验
取已知总黄酮含量的软蒺藜 5 g ,加入芦丁对照
品一定量 ,高中低三个浓度 ,每个浓度 2份 ,同样品测
定的操作 ,测定吸收度并计算回收率。结果表明 , 6
次测定的平均加样回收率为 96.3%, RSD =1.12%
(n=6)。说明该测定方法测得的结果准确 。
3　讨论
3.1　黄酮化合物广泛存在于植物界 ,生理活性多样 ,
该植物中黄酮类成分的含量是主要皂苷类成分含量
的 1.5倍左右[ 5] ,所以应对其加以研究利用 ,有很大
开发价值 。
3.2　我们首次对软蒺藜中总黄酮进行含量测定 ,并
采用正交设计实验对其提取工艺进行了选择和优化 ,
结果显示 ,温度 80 ℃,用体积分数为 75%乙醇回流
提取 2 h 时总黄酮含量最高 。本测定法测定软蒺藜
中总黄酮含量 ,结果准确 ,重现性好 ,操作简单 ,可作
为软蒺藜的含量测定方法。
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[责任编辑　段金卯]