全 文 ：— 47 —现代中药研究与实践2009年第23卷第4期Research and Practice of Chinese Medicines
酶法提取岩黄连总生物碱的研究
李倩霞 1，赵 青 1，蒋 林 1，杨得坡 1，陈建萍 2，王冬梅 1*
（1. 中山大学药学院，广东 广州 510006 ；2. 香港大学中医药学院，香港）
摘要：目的 研究植物提取酶在提取岩黄连总生物碱中的应用。方法 岩黄连药材经酶处理后用乙醇
回流提取总生物碱，通过正交实验优化酶处理工艺参数。结果 酶解反应的最佳工艺条件为：温度 45℃、
酶反应时间 16 h、pH 5.0、酶用量 0.9％。结论 药材经酶处理后再用乙醇回流提取，对总生物碱的提取率
比传统的直接乙醇回流提取法的提取率提高约 24%，适用于岩黄连总生物碱的辅助提取。
关键词 :岩黄连；总生物碱；植物提取酶；正交实验
中图分类号：R284.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2009)04-0047-03
Extraction of Total Alkaloids from Corydalis saxicola Bunting by Enzymatic Method
LI Qian-xia1，ZHAO Qing1, JIANG Lin1, YANG De-po1, CHEN Jian-ping2, WANG Dong-mei
（1. Pharmacy College, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510006, China ；2. School of Chinese Medicine,
University of Hong Kong, Hong Kong, China）
Abstract: Objection To study the extraction of total alkaloids from Corydalis saxicola Bunting by
enzymatic method. Methods C. saxicola was treated by enzyme before refluxed with 60% ethanol aqueous
solution, and the parameters of enzymatic hydrolysis was optimized by an orthogonal experiment. Results The
optimum enzymatic hydrolysis conditions were determined as follows: temperature was 45 ℃ , reaction time
was 16 h, pH value of the buffer solution was 5.0 and 0.9% of enzyme amount . Conclusion The yield of total
alkaloids extracted from C. saxicola with pretreatment by enzymatic hydrolysis increased about 24% than that
of without enzymatic hydrolysis pretreatment. Enzymatic hydrolysis could be applied as an assistant for the
extraction of total alkoids from C. saxicola.
Key words: Corydalis saxicola Bunting; total alkaloids; hydrolysis enzyme; orthogonal experiment
收稿日期：2008-11-13
基金项目：广西壮族自治区农业厅资助课题《广西道地药材GAP研究》
(2004—2007)；2006年度广东省教育部产学研结合项目。
作者简介：李倩霞(1983-)，女，在读硕士研究生，研究方向：中草药化学
成分及新制剂研发。
*通讯作者：王冬梅，Tel／Fax: 020-39943042；E-mai: lsswdm@mail.sysu.edu.
cn
岩黄连是罂粟科紫堇属多年生草本植物石生黄
堇 Corydalis saxicola Bunting 全草，味苦类似黄连，
因生长于石缝和岩石间得名岩黄连 [1]。具有显著的
抗菌、消炎、镇痛和安定等作用，是桂西北山区常
用消炎止痛、排毒、治疗急慢性肝炎和肝硬化等疾
病的一种中草药 [2,3]。目前从岩黄连分离鉴定出的化
合物大多数为生物碱类，以岩黄连总生物碱为有效
成分的注射液，已工业化生产，并广泛应用于临床
治疗。如何优化岩黄连总生物碱提取工艺，提高有
效成分提取率，具有重要的意义。20 世纪 90 年代
中期以后，酶法广泛应用于中药提取，马桔云 [4] 等
将纤维素酶用于黄连提取小檗碱的试验中，小檗碱
的收率有显著提高。本文将对酶法应用于岩黄连总
生物碱的提取进行研究，为酶法的工业化应用提供
一定依据。
1 仪器与材料
Waters 600E 型高效液相色谱仪（Waters 公司，
美国）；Waters 2996 二极管阵列检测器（Waters 公
司，美国）；Waters 717 plus 自动进样器（Waters 公
司，美国) ；Empower色谱工作站软件（Waters公司，
美国）；TU-1810 紫外可见分光光度计（北京普析通
用仪器有限责任公司）；DELTA320 型 pH 计（梅特
勒－托利多）。
岩黄连全草（广西河丰药业有限责任公司提
供），粉碎，过60目筛后备用；脱氢卡维汀（自
制，纯度>98%）；植物提取酶（南宁东恒华道生物
科技有限公司）；其它试剂均为分析纯。
2 实验方法
2.1 岩黄连总生物碱的提取
2.1.1 乙醇回流提取法 称取 2 g 的岩黄连全草粉
末，加入 60％乙醇 100 mL, 回流提取 1.5 h，冷却后
转移至 250 mL 容量瓶中，并用 60% 乙醇定容至刻
DOI:10.13728/j.1673-6427.2009.04.022
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度，即得岩黄连总生物碱提取液。
2.1.2 酶水解后乙醇回流提取法 称取 2 g 的岩黄
连全草粉末，加入 40 mL 0.1 mol/L 柠檬酸缓冲液，
充分混匀后，再加入一定量的植物提取酶，置于恒
温水浴摇床中，160 r/min 下振摇反应一定时间。反
应结束后，加入无水乙醇 60 mL, 回流提取 1.5 h，
冷却后转移至 250 mL 容量瓶中，并用 60% 乙醇定
容至刻度，即得岩黄连总生物碱提取液。
2.1.3 正交实验对酶解反应条件的优化 影响酶法
提取岩黄连总生物碱的主要因素有酶解温度、酶解
液 pH 值、酶解时间和酶量等。经过预实验的单因
素考察后，为了进一步优化提取工艺，采用了正交
设计，以找到优选的酶解条件。因素水平见表 1。
2.2 提取液中总生物碱的含量测定
2.2.1 标准曲线的绘制 精密称取脱氢卡维汀对照
品 5.22 mg 置 50 mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀作为对照品储备液。精密吸对照品储备
液 0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 mL 分 别 置 于 10
mL 容量瓶中，摇匀，在 346 nm 处测定吸收度。回
归方程为 ：Y =52.574 X+0.029 8， r = 0.997 9（X，
mg/mL），该方法在 4.04~14.39 μg/ml 浓度范围内的
线性关系良好。
2.2.2 含量测定 精密吸取一定量的岩黄连提取
液，稀释 50 倍后，在 346 nm 波长处测定吸光度，
记录吸光值，代入线性方程，求出提取液中总生物
碱的含量（以脱氢卡维汀计），并计算出总生物碱的
得率（mg/g 药材）。
2.3 提取液的 HPLC 分析
分别取“ 2.1” 项下两种方法所得总生物碱提取
液 , 0.45 μm 滤膜滤过，取续滤液进样 20 μL，进行
HPLC 分析。
色谱条件 ：色谱柱为 Phenomenex Gemini-C18
色谱柱（250 mm × 4.6 mm，5 μm） ；流动相为乙腈－
0.02 mol•L-1 磷酸二氢钾溶液（25：75）；流速为 1.0
mL•min-1 ；检测波长为 346 nm。
表1 酶解反应因素水平表
Tab. 1 Factors and levels of enzymatic hydrolysis
因 素
水平 A B C D
温度/℃ pH 植物酶量/% 时间/h
1 45 4 0.3 8
2 50 4.5 0.6 12
3 55 5 0.9 16
3 实验结果与讨论
3.1 正交实验结果
根据表 1，选择 L9（34）正交实验表进行试验，
以岩黄连总生碱的得率为指标，结果见表 2、表 3。

根据表 3 实验结果的方差分析，对岩黄连总生
物碱提取率的影响程度为 ：酶解温度 > 酶解液 pH
值 > 酶解时间 > 酶量，正交实验优化所得条件为
A1B3C3D3，温度对总生物碱提取率影响最大，在 45
℃ 的反应组，总生物碱提取得率最高 ；pH 值 5.0 最
优 ；酶反应时间、所加酶量影响不大，各水平之间
没有显著性差异，相对而言，植物提取酶法提取岩
黄连总生物碱时重要影响因素为温度，需严格控制
酶反应过程温度，故将酶解岩黄连的工艺条件确定
为 ：温度 45℃、酶反应时间 16h、pH 5.0、酶用量
0.9％。
3.2 验证实验
选择工艺 A1B3C3D3 进行验证实验，结果见表 4。
表2 正交实验结果
Tab 2 Results of the orthogonal test
试验号 因 素 总生物碱得率(mg/g)
A B C D
1 1 1 1 1 44.27
2 1 2 2 2 47.66
3 1 3 3 3 48.44
4 2 1 2 3 41.16
5 2 2 3 1 43.59
6 2 3 1 2 42.47
7 3 1 3 2 39.71
8 3 2 1 3 41.80
9 3 3 2 1 39.44
均值1 46.79 41.73 42.85 42.43
均值2 42.41 44.35 42.75 43.28
均值3 40.32 43.45 43.91 43.80
极差 6.47 2.64 1.16 1.37
表3 方差分析
Tab 3 Results of variance analysis
因素
A
B
C
D
误差
偏差平方和
65.49
10.78
2.49
2.86
2.49
自由度
2
2
2
2
2
F比
26.28
4.33
1.00
1.15
F临界值
19
19
19
显著性
*
表4 验证实验结果
Tab.4 Results of validate test
实验号
1
2
3
总生物碱得率(mg/g)
48.21
48.19
48.56
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4 讨论
4.1 本文也对醋酸盐、柠檬酸盐、硫酸盐等缓冲液
进行比较，结果以使用柠檬酸盐作为酶解处理的缓
冲液时，岩黄连总生物碱的提取效率最高。
4.2 通过高效液相色谱图分析，加酶与不加酶提取
出的成分基本一致，说明酶解没有破坏岩黄连的成
分。因此植物提取酶可以用于岩黄连总生物碱的提
取。
4.3 用植物提取酶预处理能够减少细胞壁的束缚作
用，提高岩黄连总生物碱的常规乙醇提取效果，从
而降低生产成本，提高经济效益。在本研究所建立
的实验条件下 , 酶法提取工艺比传统乙醇回流提法
岩黄连总生物碱提取率提高约 24%。
参考文献
[1] 蒋伟哲. 岩黄连的研究进展, 江苏新医学院:中药大辞典（下册）[M].
上海：上海科学技术出版社 , 2001.1532.
[2] 蒋永元, 胡兴华, 赵瑞锋. 岩黄连引种栽培研究[J]. 广西植物, 2002,
22(5): 469.
[3] 文和群, 许兆然, J. Villa-Lobos, 等. 中国南部石灰岩稀有濒危植物名
录 [J]. 广西植物 , 1993, 13(2): 110.
[4] 马桔云, 赵晶岩, 姜 颖, 等. 纤维素酶在黄连提取工艺中的应用[J]. 中
草药 , 2000, 31(2): 103.
图1 未经酶水解（A）与经酶水解后（B）乙醇回流提取液的HPLC图谱
Fig. 1 HPLC chromatograms of the ethanol extracts of C. Saxicola without
enzymatic hydrolysis (A) and with enzymatic hydrolysis (B)
3.3 两种提取方法所得总生物碱提取物的比较
3.3.1 总生物碱提取率的比较 未经酶解直接乙醇
回流提取，岩黄连总生物碱的得率为 38.92 mg/g ；
经酶解处理后再用乙醇回流提取，岩黄连总生碱的
得率为 48.32 mg/g，提取率提高了 24%，可见酶解
处理有助于岩黄连总生物碱的溶出。
3.3.2 总生物碱 HPLC 图谱的比较 图 1 为两种提
取方法所得总生物碱提取液的 HPLC 图谱，两色谱
图中色谱峰的数目及相对峰面积组成基本一致，可
见酶解处理对提取物中的化学成分组成没有产生明
显影响。

《现代中药研究与实践》2009年下半年征订启事
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