全 文 :收稿日期:2009-07-11; 修订日期:2010-06-30
作者简介:侯小涛(1969-),女(汉族),广西桂林人 ,现任广西中医学院副
教授 ,硕士学位 ,主要从事中药质量控制及新药开发研究工作.
醉鱼草不同部位提取物对实验性创面愈合
作用的实验研究
侯小涛 ,周丽霞 ,吴燕华
(广西中医学院 ,广西 南宁 530001)
摘要:目的 观察醉鱼草不同部位提取物对动物实验性烧伤创面愈合的影响 。方法 采用醉鱼草不同部位的水提取物和
醇提取物配以油包水型基质做成药膏 ,对家兔Ⅱ°烧伤模型进行皮肤刺激性实验和治疗实验 , 其中皮肤刺激性实验以红
斑 、水肿及轻度焦痂作为参考指标;治疗实验以结痂率 、愈合率 、结痂时间和愈合时间作为参考指标 ,分别观察其愈合情
况。结果 醉鱼草不同部位的水提取物 、醇提取物及基质对家兔皮肤均无刺激性(F﹤ 0.5);醉鱼草茎水提取物和醇提取
物配制的药膏对Ⅱ°烧伤家兔创面愈合表现出明显的效果(P﹤ 0.05)。而叶的水提取物和醇提取物配制的药膏无明显
效果。结论 醉鱼草茎提取物对Ⅱ°烧伤家兔表现出一定的促进创面愈合的作用。
关键词:醉鱼草; 水提取物; 醇提取物; 创面愈合
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.118
中图分类号:R285.5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2010)09-2379-02
烧伤一般是指由于热力如沸水 (水 、油 、汤)、炽热金属 (液
体或固体)、火焰 、蒸气和高温气体等所致的体表组织损害;轻者
皮肤肿胀 , 起水泡 ,疼痛;重者皮肤烧焦 , 甚至血管 、神经 、肌腱等
同时受损;呼吸道也可烧伤。严重烧伤后发生失控性炎症反应 ,
大量炎症介质的生成和释放在烧伤早期脏器损伤中扮演了重要
角色 [ 1] 。炎性介质持续或过多地释放可引起全身多种炎性效
应 、细胞活化及凝血系统和补体系统激活 , 这种失控的炎症反应
可以损伤血管内皮和远隔器官 [ 2] 。而且烧伤引起的剧烈疼痛和
皮肤渗出等因素能导致休克 , 晚期出现感染 、败血症 ,危及生命。
因此 , 烧烫伤的治疗应首先缓解皮肤症状 , 促进皮肤愈合。
近年来中草药外治烧伤取得了较大的进展 ,许多外用中药的
效果更为突出。治疗烧伤的外用剂型有膏剂 、油剂 、酊剂 、糊剂 、
粉剂等多种形式 [ 3 , 4] 。醉鱼草 BuddlejalindleyanaFort.为马钱科
醉鱼草属植物 , 药用全草。 《本草纲目》中有记载 , 常用于治疗烧
烫伤 、皮肤瘙痒 、湿疹 、皮炎 、牛皮癣 、痒疮 、疥疮 、漆疮等疾病 [ 5] 。
醉鱼草主要含有柳杉二醇(Ⅰ )、桃叶珊瑚苷(Ⅱ)、半乳糖醇
(Ⅲ)、胡萝卜苷(Ⅳ)[ 6] 、香草醛(vanlinⅠ )、香草酸(vanlin
Ⅱ)、洋丁香酚苷(acteosideⅢ)、异洋丁香酚苷(acteosideⅣ)等成
分 , 化学成分的类型较多 , 并具有抗炎 、杀死钉螺 、增强免疫等活
性 [ 7~ 9] 。醉鱼草为一种对烧伤具有确切疗效的特色瑶药 , 在民间
具有广泛的药用价值 ,但对其治疗烧伤 、消除疤痕的机理未见报
道。本研究初步构建家兔的烧伤模型 , 通过动物实验 , 初步考察
了醉鱼草不同部位提取物对实验性创面的愈合作用 ,为进一步确
定其有效成分 , 开发治疗烧伤的新药提供研究基础。
1 材料与仪器
1.1 动物 家兔(新西兰大耳兔), ♀♂兼取 , 体质量 1.9 ~ 2.3
kg/只 , 购于中医学院动物中心。
1.2 药品与试剂 美宝湿润烫伤膏(汕头市美宝制药有限公司 ,
产品批号:20050205。);脱毛剂(10%硫化钠 中国南江区宣治化
工厂生产 批号 031106);麻醉剂(戊巴比妥钠 上海国药集团化学
试剂有限公司生产者批号 WS20050411);95%乙醇(上海试一化
学试剂有限公司 批号 0060829GB-679-80);无水乙醇(广西师
范学院化学试剂厂生产 批号:050619);纯水:(优普系列超纯水
机制取);单硬脂酸甘油脂:(广东 汕头市西陇化工厂 批号:
050422-2);Span80 (上海申宇医药化工有限公司 批号:
050306m);甘油:(浙江凤凰化工股份有限公司生产 批号 020008
南昌白云医药化工有限公司分装 分装批号:030103);蓖麻油:
(南名华鑫化工有限公司);生理盐水 (自制)。醉鱼草叶水提取
浸膏;醉鱼草叶醇提取浸膏;醉鱼草茎水提取浸膏;醉鱼草茎醇提
取浸膏 。
1.3 仪器 优普系列超纯水机(成都超纯水科技有限公司 型号:
upk-11-20编号:06080361);旋转蒸发仪 (上海亚荣生生化仪器
厂 型号:RE-52AA);中药打粉机 (浙江温岭市奥力药材器械厂
型号:AK400A);电热恒温水浴锅 (北京意成科技有限公司 型号:
DGSY-11);电炉 (天津市泰斯特仪器有限公司);天平 (上海精
科天平 型号:HC-TP11-1);剪刀、手术刀片 、兔台 、棉球等。
2 方法
2.1 浸膏的提取
2.1.1 水提浸膏的提取 分别取叶 200 g和茎 600 g加入 10倍
左右的纯水 , 煎煮 40 min, 冷却 , 过滤。 滤渣再加水适量煎煮 3
次 , 过滤 ,合并所得滤液浓缩制得浸膏分别为 134.1 g和 61.3 g,
得膏率分别为 67.1%和 15.3%, 冰箱 4℃保存。
2.1.2 醇提浸膏的提取 分别取叶 1 000g和茎 600g加入 10倍
的 95%乙醇 ,水浴回流 2 h冷却 , 过滤 , 滤液备用 , 滤渣再加乙醇
适量回流 3次 , 每次 1.5h, 合并所得滤液 , 浓缩制得浸膏分别为
261.5g和 66.36 g, 得膏率分别为 26.2%和 11.1%, 冰箱 4℃保
存。
2.2 基质的选配 见表 1。根据用于皮肤药膏基质的要求:安
全 , 对皮肤无刺激性 , 有一定的湿度 ,有较好的附着性等进行基质
的选配实验。结果表明 ,试验方案 5所配制的基质细腻油滑 , 且
水洗即可洗干净 ,符合皮肤外用条件 , 是比较理想的基质 ,故按照
方案 5将醉鱼草不同部位提取物配制成药膏进行动物实验。
表 1 基质选配方案
实验
方案
蓖麻油 /
g
硬脂酸 /
g
单硬脂酸
甘油脂 /g
冰片 /
g
甘油 /
g
尼泊尔金 /
g
Span80/
g
纯水 /
ml
样品 /
g
1 2.0 1.2 0.4 0.02 1.0 0.005 0.5 5.0 0.5
2 2.0 1.2 0.4 0.02 1.0 0.005 0.4 5.0 0.5
3 2.0 2.5 2.0 0.02 0.5 0.005 0.5 2.0 1.5
4 2.0 1.5 1.0 0.02 1.0 0.005 1.0 4.0 1.5
5 2.0 1.5 0.5 0.02 1.5 0.005 1.0 4.0 1.5
2.3 皮肤刺激性实验
2.3.1 动物分组 取家兔 9 只 , 体质量 2.20 ~ 2.50 kg, 随机编
号 , 每只从脊椎两侧上下各取两部位共分为 4个部位 , 共 36个部
位。按随机平均把 36个部位分为 6个组:空白对照组 、基质组 、
醉鱼草叶水提物组 、醉鱼草叶醇提物组 、醉鱼草茎水提物组 、醉鱼
草茎醇提物组。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9 时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期
2.3.2 动物造模及实验方法 在动物背部两侧用 10%硫化钠脱
毛 , 去毛面积两侧各为 2㎝ ×2㎝;分别取一定量的醉鱼草叶水
提物 , 醉鱼草叶醇提物 ,醉鱼草茎水提物 ,醉鱼草茎醇提物作为给
药组 , 基质和生理盐水作为对照组。按组涂药 , 给药 24 h后 ,用
温水洗去残留药物 , 分别在去除药物后第 1, 24, 48小时观察给药
部位有无红斑及水肿 ,按表 2,表 3评分 ,并评价刺激强度。结果
见表 4。
2.4 烧伤实验
2.4.1 动物分组 取家兔 12只 ,雌 8只雄 4只 , 体质量 1.95 ~ 2.
20 kg, 随机编号 , 每只从脊椎两侧上下各取两部位共分为 4个部
位 , 共 48个部位。按随机平均把 48个部位分为 6个组:空白对
照组 , 阳性药美宝组 ,醉鱼草叶水提物药膏组 ,醉鱼草叶醇提物药
膏组 , 醉鱼草茎水提物药膏组 , 醉鱼草茎醇提物药膏组。
2.4.2 动物造模 先在臀部剪毛 5 cm×5 cm, 然后用 10%硫化
钠脱毛。次日 , 用戊巴比妥钠将家兔麻醉 , 75%乙醇消毒脱毛皮
肤 , 用红笔标一个 3cm×3cm的正方形 ,并用手术刀在中央划一
个 1 cm×1 cm的小正方形 , 以划伤真皮出血丝为宜。取 2 ml
95%乙醇注入 2.0g棉球中铺平于 3 cm×3cm的正方形 ,点火燃
烧 1.5 min, 以烧出水泡圆圈为佳。
2.4.3 动物试验 烧伤 2 h后 ,按组将药品分别均匀涂在伤口
上 , 每天两次 。每天上午清洗伤口并纪录伤口情况 , 连续 20
d。以愈合时间及愈合面积为指标 , 评价药物对创面愈合的影
响 , 结果见表 5。并在第 7天 , 第 14天计算脱痂率和愈合率 ,
结果见表 6。
脱痂率(%)=脱痂面积 /创面初始面积 ×100%
愈合率(%)=愈合面积 /创面初始面积 ×100%
3 结果
3.1 皮肤刺激性实验分值评价方法 见表 2 ~ 3。
表 2 皮肤刺激反应级数
级数 评值标准
0 无红斑无水肿
1 轻微红斑(勉强可见),轻微水肿(勉强可见)
2 中度红斑轻微水肿(隆起轮廓清楚)
3 重度红斑中度水肿(隆起约 1mm)
4
重度红斑及轻度焦痂形成严重水肿 , (隆起超过 1 mm,并超出
敷药面积)
表 3 反应级数评价
级数 评值标准
F≤ 0.5 无刺激性
0.5﹤ F≤ 2.0 轻度刺激性
2.0﹤ F≤ 6.0 中度刺激性
F> 6.0 重度刺激性
3.2 实验结果
3.2.1 皮肤刺激性实验结果 除 24 h后四号家兔 1号(空白组)
部位和 4号(叶水提物组)部位有勉强可见的红斑外其他各部位
都无红斑无水肿。见表 4。
表 4 皮肤刺激性实验结果
组别 1h 24h 48h
基质 0 0 0
空白 0 0.17 0
叶水提物 0 0.17 0
茎水提物 0 0 0
叶醇体物 0 0 0
茎醇提物 0 0 0
n=6
实验表明醉鱼草叶水提物 , 醉鱼草叶醇提物 , 醉鱼草茎水提
物 , 醉鱼草茎醇提物及选用的基质对家兔皮肤均无刺激性(F﹤
0.5)。
3.2.2 烧伤实验结果 醉鱼草不同部位提取物对Ⅱ°烧伤创面愈
合时间的影响。见表 5。
表 5 醉鱼草不同部位提取物对Ⅱ°烧伤创面愈合时间的影响
( x±s)
组别 给药剂量(g/部位) 脱痂时间 /d 愈合时间 /d
阳性 2.0 12.40±0.8 19.60±1.2
空白 2.0 15.30±0.5(1) 22.20±0.6(1)
叶水提物 2.0 14.50±0.5(1) 21.30±0.2(1)
茎水提物 2.0 11.60±0.2(2) 18.40±0.6(2)
叶醇体物 2.0 14.60±0.6(1) 21.00±0.3(1)
茎醇提物 2.0 10.50±.05(2) 18.40±0.9(2)
阳性组与空白组比较 , (1)P﹤ 0.05;醉鱼草各组与空白组比较 ,
(2)P﹤ 0.05;n=8
醉鱼草茎水提物和醇提物组与阳性药组在脱痂时间和愈合
时间上相当 ,与空白组有显著性差异(P﹤ 0.05)。
醉鱼草不同部位提取物对Ⅱ°烧伤创面愈合的影响见表 6。
表 6 不同部位提取物对Ⅱ°烧伤模型
给药后创面面积与愈合率的影响( x±s) %
组别 脱痂率
7 d 14d
愈合率
7d 14d
阳性 46.35±12.78 91.56±15.52 45.35±18.25 99.86±6.78
空白 19.58±10.28 58.36±14.45 22.56±12.05 47.65±14.20
水提叶 45.32±11.78 88.58±16.50(1) 40.45±10.18(1)88.30±10.98
水提茎 46.42±10.88(2) 90.25±16.31(2) 43.87±9.95 95.25±9.58
醇提叶 44.35±10.55(1) 70.23±11.11 33.21±12.23(1)75.32±10.32
醇提茎 47.25±12.32(2) 92.00±14.45(2) 47.31±10.22(2)98.36±11.65(2)
阳性组与空白组比较 , (1)P﹤ 0.05;醉鱼草各组与空白组比较 , (2)P﹤ 0.05;
n=8
实验表明:醉鱼草叶水提物药膏组 , 醉鱼草叶醇提物药膏组 ,
醉鱼草茎水提物药膏组 ,醉鱼草茎醇提物药膏组和空白对照组相
比较(P﹤ 0.05), 能迅速形成药痂 , 使水肿消退 , 明显促进创面
愈合 , 疗效与阳性药组相当。其中醉鱼草茎水提物药膏组 , 醉鱼
草茎醇提物药膏组脱痂率和愈合率更佳。
4 讨论
深Ⅱ°烧伤为真皮损伤 ,如果严重感染或烧伤程度加深 ,则愈
合后遗留瘢痕组织。因此必须积极地减轻组织损伤消除创面。
创面的愈合情况是评价药效的客观指标。
醉鱼草各组和空白对照组相比较 , 形成药痂速度快 , 使水肿
迅速消退 , 并明显促进创面愈合;醉鱼草各组和美宝湿润烧伤膏
对照组相比较 ,各组愈合时间 、脱痂时间相似。提示醉鱼草茎提
取物对深Ⅱ°烧伤创面的愈合有一定的促进作用。
实验结果表明:醉鱼草不同部位提取物对烧伤创面没有刺激
性 , 不同部位提取物药膏对家兔Ⅱ度烧伤创面愈合均有效果 , 其
中醉鱼草茎水提物和醇提物效果更佳。
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