全 文 ：　收稿日期:2009-03-20
作者简介:田　卉(1970-), 女 ,副教授 , 从事心血管药理学的研究;e-mail:thui02@yahoo.com.cn。
第 28卷　第 2期
2010年 4月
石河子大学学报(自然科学版)
Journal of Shihezi University(Natural Science) Vol.28　No.2Apr.2010
文章编号:1007-7383(2010)02-0207-04
沙枣叶水煎提取物体外抗氧化作用的研究
田　卉1 ,刘彦军1 ,刘　梅2 ,张　梅1 ,马建慧1
(1 石河子大学药学院/新疆特种植物药资源重点实验室 , 石河子 832002;
2 石河子大学医学院 ,石河子 832002)
摘要:本实验通过自发产生脂质过氧化及分别用自由基诱导剂 CCl4 、H2O 2 和 Fe2+-VitC 激发脂质过氧化 , 以丙二
醛(MDA)产生量作为脂质过氧化作用程度指标 ,观察沙枣叶水煎提取物对小鼠肝脂质过氧化的保护作用强弱。结
果显示沙枣叶水煎提取物可降低小鼠肝组织自发性 MDA 的生成 ,减轻 CCl4 、H 2O 2 、Fe2+-VitC 所诱导的肝脏脂质
过氧化反应 ,具有良好的抗脂质过氧化作用。
关键词:沙枣叶水煎提取物;脂质过氧化;丙二醛
中图分类号:R966　　　　文献标识码:A　　　　
Experimental Study on Anti-oxidant Effect of Extract
from Leave of Elaeagnus Angustifolia L.in Vitro
TIAN Hui1 , LIU Yanjun1 , LIU Mei2 , ZHANG Mei1 ,MA Jianhui1
(1 College o f Pharmacy , Shihezi Univer sity/ Key Labo rato ry o f M inistry of Education and P rovince fo r
Medicinal P lants Resources o f Xinjiang , Shihezi 832000 , China;
2 College o f Medicine , Shihezi Univ ersity , Shihezi 832000 , China)
Abstract:Lipoperoxidation model of rat live r w as generated in liver homogenates spontaneously and induced
by CCl4 、H 2O2 、Fe2+-VitC.Concentration of malondialdehyde w as measure.The resul ts show ed that the ex-
t racts f rom leave of Elaeagnus angustifolia L.inhibited the generat ion o f MDA in rat live homogenates
spontaneously formed and induced by CCl4 、H2O 2 and Fe2+-VitC.It al leviated injure f rom lipopero xidat ion.
The study indicated that ex tracts f rom leave o f Elaeagnus angust ifo lia L.is ef fective on the inhibit ion o f lip-
id peroxidation.
Key words:ex t racts f rom leave of Elaeagnus angustifolia L;lipopero xidat ion;malondialdehyde
　　沙枣(Elaeagnus angust ifo lia L .)属胡颓子科属
植物 ,亦称银柳 、香柳 、桂柳 ,主产于西北地区 。沙枣
具有抗旱 、耐盐的优良特性 ,是我国西北地区重要的
防风固沙和水土保持树种 ,同时沙枣的枝 、叶 、花 、果
都具有开发利用价值和较高的经济价值 ,也是重要
的中药材 ,被誉为沙荒 、盐碱地的“宝树”[ 1] 。已有研
究证实沙枣叶中含有多种微量元素和 VitC 、绿原
酸 、黄酮等多种成分[ 2] ,其抗氧化作用未见报道 。本
研究采用体外抗氧化实验法 ,观察其水煎提取物对
小鼠肝自发性脂质过氧化及分别由 CCl4 、H2O 2 和
Fe
2+-VitC 诱导小鼠肝脏脂质过氧化损伤的保护作
用 ,旨在为沙枣叶的开发和利用提供一些有益的参
数 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　动物
昆明种小白鼠 ,体重(20±2)g ,由石河子大学实
验动物中心提供。
DOI :10.13880/j.cnki.65-1174/n.2010.02.022
1.1.2　实验材料与仪器
沙枣叶 ,沙枣(Elaeagnus angustifolia L.)的叶 ,
于 10 月在新疆石河子采摘 , 阴干;硫代巴比妥酸
(TBA)、三氯乙酸(TCA)、抗坏血酸均由中国医药
上海化学试剂公司生产;其余为国产分析纯试剂。
Model-680酶标仪;MA-110 型万分之一天平:
上海第二天平仪器厂生产;Xw80A 涡旋混合器;H .
H .S电热恒温水浴锅 、TDL-5000台式冷冻离心机:
上海安亭科学仪器厂生产;EU 8613-V 12 型超低
温冰箱:美国 HARRIS 公司生产;玻璃匀浆器等 。
1.2　方法
1.2.1　对小鼠肝自发性脂质过氧化的影响
小鼠禁食 12h后处死 ,取肝 ,在 0 ～ 4℃下用生
理盐水制成 5%肝匀浆 。
实验分为正常对照组(肝匀浆和蒸馏水)、阳性
对照组(肝匀浆和 VitC)和 5 个剂量的沙枣叶水煎
提取物组(肝匀浆和各剂量的沙枣叶水煎提取物)。
先在各管中分别加入肝匀浆 1mL ,然后在 5 个
剂量组中分别加入浓度为 0.1 、0.5 、1.0 、2.0 、
4.0mg/mL水煎提取物 0.1mL ,对照组加入蒸馏水
0.1mL ,阳性对照组加 lmg/mL VitC 0.1mL 。将
各组 37℃水浴反应 60min(震荡),取出 ,将试管流水
冷却 ,向各试管加入 20%三氯醋酸(TCA)1mL ,
0.67%硫代巴比妥酸(TBA)1mL , 混匀 , 沸水浴
15min(震荡)取出 ,流水冷却。然后 3000r/min 离
心 ,取上清液在 532nm 处测吸收值 ,并按下式计算
抑制率:
抑制率(IR)=(对照组 MDA-水煎提取物组
MDA)/对照组 M DA 。
每组实验均设 5个平行管 ,实验重复 2次[ 3] 。
1.2.2　对 CCl4 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响
按 1.2.1中的方法制备 5%肝匀浆。
实验分为正常对照组(肝匀浆 、蒸馏水和
CCl4)、阳性对照组(肝匀浆 、VitC和 CCl4)和 5个剂
量的沙枣叶水煎提取物组(各剂量的沙枣叶水煎提
取物 、肝匀浆和 CCl4)。
先在各管中分别加入肝匀浆 1.0mL ,然后在 5
个剂量组中分别加入浓度为 0.1 、0.5 、1.0 、2.0 和
4.0mg/mL 水煎提取物 0.1mL ,对照组加入蒸馏水
0.1mL ,阳性对照组加 lmg/mL VitC 0.1mL。各组
在37℃水浴振荡反应30min。取出 ,流水冷却 ,向各
管中加入 CCl420μL , 继续温浴反应 30min , 取出 。
之后步骤同实验 1.2.1中的方法 ,在 532nm 处测吸
收值 ,计算抑制率[ 3] 。
1.2.3　对 H2O2 诱导小鼠肝脂质过氧化的影响
按 1.2.1中的方法制备 5%肝匀浆 。
实验分为正常对照组(肝匀浆 、蒸馏水和
H 2O 2)、阳性对照组(肝匀浆 VitC和 H2O2)和 5个
剂量的沙枣叶水煎提取物组(各剂量的沙枣叶水煎
提取物 、肝匀浆和 H2O 2)。
先在各管中加入 5%肝匀浆 1.0mL , 5 个剂量
的水煎提取物组中分别加入浓度为 0.1 、0.5 、1 、2和
4mg/mL 水煎提取物 0.1mL ,正常对照组加入同体
积蒸馏水 , 阳性对照组中加入 lmg/mL VitC 0.1
mL。各组 37℃水浴振荡反应 30min ,取出 ,流水冷
却 ,向各管中加入 1% H 2O 2 0.1mL ,继续温浴反应
30min取出。之后步骤同实验 1.2.1 , 最后在
532nm处测吸收值 ,计算抑制率[ 3] 。
1.2.4　对 Fe2+-VitC诱导小鼠肝脂质过氧化的影
响
按 1.2.1中的方法制备 5%肝匀浆 。
实验分为正常对照组(肝匀浆 、蒸馏水 、FeSO4
·7H 2O和 VitC)、阳性对照组(肝匀浆 、VitC , Fe-
SO4 ·7H 2O 和 VitC)和 5个剂量的沙枣叶水煎提
取物组(各剂量的沙枣叶水煎提取物 、肝匀浆 、Fe-
SO4 ·7H2O 和 VitC)。
在各管中加入 5%肝匀浆 1.0mL , 5 个剂量组
中分别加入浓度为 0.1 、0.5 、1.0 、2.0和 4.0mg/mL
沙枣叶水煎提取物 0.1mL ,正常对照组加入 0.1mL
蒸馏水 ,阳性对照组 0.1mL 的 1 mg/mLVitC 。再
向各管加入 50μL 抗坏血酸和 50μL FeSO 4 ·7H 2O
(终浓度分别为1mmo l/L 和 1mmol/ L)。各组 37℃
水浴振荡反应60min ,取出 。之后步骤同实验1.2.1
中的方法 ,在 532nm 处测吸收值 ,计算抑制率[ 3] 。
1.2.5　统计分析
用 SPSS10.0 进行处理 ,实验数据以 χ±S 表
示 ,多组间比较用方差分析 、两均数比较用 t检验。
2　结果
2.1　沙枣叶水煎提取物对小鼠肝自发性脂
质过氧化的影响
由表 1可见:在肝匀浆自发性脂质过氧化的实
验中 ,阳性对照组和沙枣叶水煎提取物各组与正常
对照组相比 ,含量均有一定的减少 ,除了沙枣叶水煎
提取物 2mg/mL 和 4mg/mL(P <0.05)外 ,其余各
组与对照组比较均无显著性差异 ,但是可见随着提
取物浓度的增高 ,其降低 MDA的作用逐渐增强 。
208 　　　　　　　　　　　　　　石河子大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　　第 28 卷　
表 1　沙枣叶水煎提取物对小鼠肝匀浆自发性
脂质过氧化的影响 χ±S , n=10
Tab.1 The effects of extracts from leave of Elaeagnus
angustifolia L.to liver homogenates
spontaneously χ±S , n=10
组别 剂量/ mg/ mL MDA/ nmol/ g
抑制率
/ %
正常对照组 1.075±0.008
阳性对照组(VitC) 1.0 1.052±0.009 2.1
沙枣叶水煎提取物 0.1 0.965±0.008 10.2
沙枣叶水煎提取物 0.5 0.910±0.003 15.3
沙枣叶水煎提取物 1.0 0.916±0.005 14.8
沙枣叶水煎提取物 2.0 0.897±0.010 ＊ 16.6
沙枣叶水煎提取物 4.0 0.869±0.002 ＊ 19.2
　　注:与正常对照组比较 , ＊者 P<0.05。
2.2　沙枣叶水煎提取物对 CCl4 诱导小鼠肝
脂质过氧化的影响
由表 2可见 ,与正常对照组比较 ,阳性对照组和
各提取物组 MDA 含量均有降低 ,阳性对照组显示
了良好的抗氧化作用(P<0.01),各提取物组随浓
度的升高 , 其作用逐渐增强 , 且提取物 1mg/mL 、
2mg/mL 和 4mg/mL 与对照组比较有统计学差异
(P<0.01)。
表 2　沙枣叶水煎提取物对 CCl4 诱导小鼠
肝脂质过氧化的影响 χ±S , n=10
Tab.2 The effects of extracts from leave of Elaeagnus
angustifolia L.to liver homogenates
induced by CCl4 χ±S , n=10
组别 剂量/ mg/ mL MDA/ nmol/ g
抑制率
/ %
正常对照组 1.137±0.002
阳性对照组(VitC) 1.0 0.829±0.006＊＊ 27.1
沙枣叶水煎提取物 0.1 1.126±0.009 0.9
沙枣叶水煎提取物 0.5 1.012±0.009 11.0
沙枣叶水煎提取物 1.0 0.868±0.006＊＊ 23.7
沙枣叶水煎提取物 2.0 0.838±0.002＊＊ 26.3
沙枣叶水煎提取物 4.0 0.721±0.001＊＊ 36.6
　　注:与正常对照组比较 , ＊＊者 P<0.01。
2.3　沙枣叶水煎提取物对 H2O2 诱导小鼠肝
脂质过氧化的影响
由表 3 可见 ,阳性对照组和提取物各组与正常
对照组比较 ,MDA 含量均有一定程度得降低 ,其中
提取物 2mg/mL 和 4mg/mL(P <0.01),阳性对照
组 、0.5mg/mL 和 1mg/mL(P<0.05),提取物高剂
量组的作用优于阳性对照组。
表 3　沙枣叶水煎提取物对 H2O2 诱导小鼠肝脂质
过氧化的影响 χ±S , n=10
Tab.3 The effects of extracts from leave of Elaeagnus
angustifolia L.to liver homogenates
induced by H2O2 χ±S , n=10
组别 剂量/mg/m L MDA/ nmo l/ g
抑制率
/ %
正常对照组 1.022±0.003
阳性对照组(VitC) 1.0 0.854±0.001＊ 16.4
沙枣叶水煎提取物 0.1 0.951±0.001 6.9
沙枣叶水煎提取物 0.5 0.876±0.006＊ 14.3
沙枣叶水煎提取物 1.0 0.822±0.005＊ 19.6
沙枣叶水煎提取物 2.0 0.763±0.002 ＊＊ 25.3
沙枣叶水煎提取物 4.0 0.741±0.004 ＊＊ 27.5
　　注:与正常对照组比较 , ＊者 P<0.05;＊＊者 P<0.01。
2.4　沙枣叶水煎提取物对 Fe2+-Vit C诱导
小鼠肝脂质过氧化的影响
由表 4可见 ,阳性对照组和各提取物组与正常
对照组相比 ,其 MDA的含量均有一定的下降 ,其中
阳性对照组下降的最为明显 ,但均无统计学意义 。
表 4　沙枣叶水煎提取物对 Fe2+-Vit C诱导小鼠肝脂质
过氧化的影响 χ±S , n=10
Tab.4 The effects of extracts from leave of Elaeagnus
angustifolia L.to liver homogenates induced
by Fe2+-Vit C χ±S , n=10
组别 剂量/mg/m L MDA/ nmo l/ g
抑制率
/ %
正常对照组 0.954±0.010
阳性对照组(VitC) 1.0 0.811±0.002＊ 15.0
沙枣叶水煎提取物 0.1 0.947±0.003 0.7
沙枣叶水煎提取物 0.5 0.872±0.003 8.6
沙枣叶水煎提取物 1.0 0.871±0.009 8.7
沙枣叶水煎提取物 2.0 0.843±0.004 11.6
沙枣叶水煎提取物 4.0 0.826±0.009＊ 13.4
　　注:与正常对照组比较 , ＊者 P<0.05。
3　讨论
丙二醛(MDA)是机体氧化系统和抗氧化系统
失去平衡时 ,产生的一种脂质过氧化物 ,可与磷脂 、
蛋白质 、核酸等形成稳定的不溶性代谢终产物 ,含量
异常增高会引起细胞损伤 ,其含量的高低可反映脂
质过氧化的程度[ 4 , 5] ,是反映脂质过氧化损伤的常
用指标 。CCl4 、H 2O 2 和Fe2+-VitC等自由基引发剂
均可激发脂质过氧化反应 ,明显增加 MDA 的生成
量 。VitC是高效的具有抗氧化作用的维生素 ,在鉴
定 、比较各种药物对自由基的清除能力时常以它作
209　第 2 期　　　　　　　　　　　　田　卉 ,等:沙枣叶水煎提取物体外抗氧化作用的研究　　　
为参照物[ 6] 。本实验结果显示:沙枣叶水煎提取物
可降低小鼠肝自发性脂质过氧化产物 MDA 的生
成 ,并对 CCl4 、H 2O 2 和 Fe2+-VitC 等自由基引发剂
诱导的肝脂质过氧化具有拮抗的作用 ,且在肝自发
性脂质过氧化和由 CCl4 、H2O2 自由基引发剂诱导
的肝脂质过氧化的实验中 ,沙枣叶水煎提取物高剂
量组的抗脂质过氧化的作用优于阳性对照VitC组 ,
说明提取物中含有抗脂质过氧化和清除自由基的有
效物质 ,具有良好的抗氧化作用 ,且随着剂量的增
加 ,其作用随之增强 ,具有剂量依赖性。
随着植物抗氧化研究的不断深入 ,越来越多与
植物体内抗氧化活性成分相关的化妆品 、保健品 、食
品和药品等表现出日益广阔的开发前景[ 7] 。本实验
研究为新疆广为种植的防风固沙的宝树沙枣叶的开
发和利用提供了实验依据 ,但其抗氧化的活性成分
还有待于进一步的研究。
参考文献:
[ 1] 辛艳伟.沙枣的开发和利用[ J] .安徽农业科学 , 2007 , 35
(2):399-400.
[ 2] 刘　清 ,黄海涛 ,刘　琼 , 等.原子吸收光谱法测定沙枣
叶中矿物元素[ J] .中国卫生检验杂志 , 2006 , 16(10):
1163-1164.
[ 3] 田　卉 ,刘彦军.石榴皮醇提物体外抗脂质过氧化作用
的研究[ J] .石河子大学学报(自然科学版), 2007 , 25
(4):475-477.
[ 4] Palanisamy A , So rinutllu P S.Beneficial effects of Mur-
ray a koenigii leave s on antio xidant defense sy stem and
ultr astructual changes of pancreatic cells in e xperimental
diabe te s in rats[ J] .Chenico-Biological Interactions 2007 ,
165(2):155-164.
[ 5] 郭　英 ,蔡秀成 ,陈秋丽 , 等.葡萄籽提取物的体外抗脂
质过氧化作用[ J] .卫生研究 , 2002 , 31(1):28-30.
[ 6] 高　湘 ,张振明 ,许爱霞 , 等.雪莲花醇提物对大鼠组织
和红细胞的抗氧化活性[ J] .中国药学杂志2005 , 40(14):
1062-1065.
[ 7] 赵国建 ,李桂峰 ,董周永 , 等.石榴籽中多酚的提取及其
抗氧化作用研究[ J] .西北植物学报 , 2008 , 28(12):
2532-2537.
210 　　　　　　　　　　　　　　石河子大学学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　　　　　第 28 卷