全 文 ：收稿日期:2005-07-05;　修订日期:2005-12-21
作者简介:程　华(1978-),男(汉族),湖北应城人 ,现为华中科技大学生
命科学与技术学院在读博士 ,主要从事植物次生代谢与分子生物学方面
的研究工作.
*通讯作者简介:余龙江 (1966-), 男(汉族),湖北黄梅人 , 现任华中科技
大学生命科学与技术学院教授 ,博士学位 ,主要从事资源生物学与技术等
方面的研究工作.
分光光度法测定岩黄连不同部位总生物碱的含量
程　华 , 余龙江* , 胡琼月 , 尹　科 , 敖明章 ,张永忠
(华中科技大学生命科学与技术学院 ,湖北 武汉　 430074)
摘要:目的 建立一种简单快速的方法来测定岩黄连总生物碱含量 ,为岩黄连质量控制提供依据。方法 采用氯仿超声提
取岩黄连不同部位样品 ,依据酸性染料比色法的原理 , 以盐酸小檗碱为对照 ,溴甲酚绿为指示剂 ,在 416 nm波长下比色测
定样品中总生物碱含量。结果 吸光度值与生物碱含量线性关系良好(r=0. 999 1);回收率为 101. 91%, RSD 为 1. 75%;
测定结果在 3 h内稳定 , RSD为 1. 09%;岩黄连根部生物碱含量最高 ,达到 48. 77 m g /g,叶和夹果其次 , 花和茎中最低。结
论 该测定方法简便可靠 ,可用于岩黄连质量控制;部位不同总生物碱含量也不同。
关键词:岩黄连;　总生物碱;　分光光度法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)03-0364-02
Determ ination of Tota lA lkaloids in D ifferent Parts ofCoryda lis sax ico la Bunting by Spec-
trophotography
CHENG H ua, YU Long-jiang* , HU Q iong-yue, YIN K e, AO M ing-zhang, ZHANG Yong-zhong
(College of L ife Science＆Technology, HuazhongUniversity of Science＆ Technology, Wuhan 430074;China)
Abstract:Objective An effec tivem ethod w as estab lished in o rde r to de term ine the to tal alka loids from diffe rent pa rts o fCoryda-
lis sax icola Bunting. Methods Using ultrasonic c leane r, the tota l a lka lo ids w ere ex trac ted from the samp le s and tested at 416 nm
w ith the spectroscopy by the m eans of acid dye m e thod. R esu lts The calibration curve of be rbe rine w ere linea r (r=0. 999 1),
and the recovery ratew as pe rfec t(101. 91%). The results o fm easurem en twe re consistent in 3 hours. The conten t o f a lka lo ids in
roo ts wa s the highe st, w ith 48. 77 m g /g, fo llowed by leaves /fruits and flowe rs /stem s. Conc lusion Thism e thod is sim ple and e f-
fective, and the contents o f to tal a lkalo ids w ere d iffe rent am ong differen t par ts ofC. sax icola.
Key words:Coryda lis sax icola Bunting;　To tal a lkalo ids;　Spectroscopy
　　岩黄连 Corydalis saxicola Bunting,紫堇科紫堇属植物 [ 1～ 3] ,多
年生草本。具有显著的抗菌 、消炎 、镇痛和强安定作用 ,是桂西北
山区常用于消炎止痛 、排毒 , 治疗急慢性肝炎和肝硬化等疾病的
一种中草药 [ 2 ～3] 。其有效成分是脱氢卡维丁 (岩黄连碱 )、小檗
碱等多种生物碱 [ 4] , 生物碱含量高低直接影响药材的质量和疗
效。岩黄连植物分布局限于石灰岩山区 , 属石山特有种 [ 3] 。现
在资源极少 , 野生状态下只生长在桂西北的凤山等县及贵州 、云
南南部的石灰岩地区阴湿的岩洞口。目前已制成岩黄连总生物
碱的注射液和片剂 , 用于临床 , 成为当前主治肝炎特别是乙型肝
炎 、肝硬化 、肝癌等的特效药品 [ 1] 。 目前 , 国内外对岩黄连的研
究主要集中在岩黄连总生物碱的成分分析 [ 4] 、引种栽培 [ 2 ～ 5]和临
床药效 [ 6～ 9]的研究 ,而对岩黄连总生物碱的测定方法及不同部位
有效成分含量差异的研究未见报道 , 这对于控制岩黄连质量 、合
理采收 、确保疗效具有重要意义。本文主要建立了岩黄连总生物
碱含量测定方法 , 并对不同组织部位的生物碱含量进行测定 ,为
岩黄连品质分析提供参考。
1　仪器与试剂
UV-240型分光光度计(日本岛津), PH S-2C酸度计(上海梅
特勒 -托利多仪器有限公司), KQ-100DB超声波清洗器(浙江昆
山市超声仪器有限公司), AE100S型分析天平(上海梅特勒 -托
利多仪器有限公司),旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。
岩黄连成熟植株采自广西南宁市马山县;盐酸小檗碱 (美国
S igm a公司), 其他试剂均为国产分析纯;溴甲酚绿指示液:精密
称取溴甲酚绿 125 mg,用 0. 2 m o l /L NaOH 12. 50 m l溶解后 , 加入
邻苯二甲酸氢钾 2. 55 g, 加少量蒸馏水溶解后 ,转移至 250 m l容
量瓶中 ,摇匀备用;0. 1%溴代麝香草酚蓝指示液。
2　方法与结果
2. 1　样品供试液的制备 取已干燥至恒重的样品 ,研磨过 80目
筛 , 精密称取 0. 500 g, 加氨水 0. 5 m l, 氯仿 10 m l,超声提取 1 h,
过滤 , 残渣以 10 m l氯仿分 3次洗涤 , 合并滤液 , 利用旋转蒸发仪
60℃下回收氯仿至干 , 取氯仿 10 m l溶解 , 然后取 1 m l溶解液于
10 m l容量瓶 , 用氯仿稀释至刻度 , 作为样品供试液。 取 0. 5 m l
供试液 ,加柠檬酸 -柠檬酸钠缓冲液(pH =5. 4)5. 0 m l, 溴甲酚
绿指示液 2 m l,置分液漏斗中 , 再加氯仿 9. 5 m l, 充分振摇 ,静置
1 h, 分取氯仿层 ,加无水 Na2 SO 4脱水后 , 测定吸光度值。同法以
蒸馏水制备空白对照液。
2. 2　波长扫描 以氯仿为对照 , 将标准对照品溶液 、样品供试液
和空白对照液在 350 ～ 700 nm波长范围内进行扫描。结果显示
前两者在(416±1)nm均有最大吸收值 , 且吸收峰相同 , 而空白
对照液在 416 nm几乎没有吸收 , 故本实验选择 416 nm为测定波
长见图 。
2. 3　稳定性实验 待测样品供试液在室温下 416 nm测定吸收
值 , 测后放置 4℃冰箱 , 1次 /h。结果 3 h内测定结果稳定 , RSD
为 1. 09%。
2. 4　标准曲线 精密称取在 105℃干燥至恒重的盐酸小檗碱对
照品 0. 030 g,置于 100m l容量瓶中 ,加蒸馏水至刻度 ,摇匀 , 得到
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 3期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 3　
300μg /m l对照品溶液。 精密量取对照品溶液 0, 0. 1, 0. 2, 0. 4,
0. 6, 0. 8 m l, 补水至 1 m l。加入 5 m l柠檬酸 -柠檬酸钠缓冲液
(pH =5. 4), 再加入溴甲酚绿指示液 2. 0 m l, 摇匀 ,精密加入氯仿
10. 0 m l, 充分振摇 , 静置 1 h, 分取氯仿层 , 加无水 N a2 SO 4脱水
后 , 于 416 nm下测定吸光度值。以取样量为横坐标 , 吸光度值为
纵坐标 , 计算得回归方程 Y =0. 039 3X-0. 013 8, r=0. 999 1(n =
5),盐酸小檗碱在 0 ～ 24. 00 μg /m l范围内与吸光度值呈良好的
线性关系。结果见图 2。
图 1　波长扫描图
图 2　盐酸小檗碱标准曲线
2. 5　精密度实验 取 5份标准对照液 0. 2 m l,照 2. 1测定方法制
备标准品供试液和空白对照液 ,在 416 nm 波长处测定吸光度值 ,
RSD为 0. 36%, 表明精密度较好。
2. 6　加样回收实验 相同岩黄连根部样品 3份 , 精密称取 0. 500
g, 加入浓度为 300 μg /m l盐酸小檗碱对照品溶液 1 m l, 按 2. 1制
备供试液和空白对照液 , 在 416 nm 波长测定。平均回收率为
101. 91%, RSD为 1. 75%。
2. 7　样品总生物碱的测定 取黄连植株不同组织部位(根 、茎 、
叶 、花 、果)样品 ,按 2. 1的方法制备样品供试液和空白对照液 , 在
416 nm 波长处分别测定吸光度并计算总生物碱相对含量。从表
1可以看出 ,岩黄连植株不同部位生物碱含量并不相同 , 根部生
物碱含量最高 , 与其他部位生物碱含量差异显著 (P <0. 05), 达
到 48. 77 mg /g(DW);叶和果中生物碱含量无显著性差异
(P >0. 05), 约占根部生物碱含量的 3 /5;最低的是茎和花
(P >0. 05)中的生物碱含量 , 分别为 21. 47 m g /g和 22. 64 mg /g,
达到根部生物碱含量的 40%左右。
表 1　岩黄连不同部位的总生物碱含量
编号 部位 样品量 m /g 吸光度 总生物碱 C /mg g-1
1 根 0. 500 3 0. 267 48. 77a
2 茎 0. 500 2 0. 187 21. 47c
3 叶 0. 500 6 0. 328 36. 46b
4 花 0. 500 2 0. 198 22. 64c
5 果 0. 500 3 0. 284 31. 80b
　　采用 Tukey检验 ,相同字母表示没有显著性差异(P>0. 05);n=3
3　讨论
在一定 pH介质中 , 生物碱类与氢离子成盐 , 一些酸性染料
在此条件下可与上述盐离子定量地结合成有色的络合物而被有
机溶剂定量地提取出来 , 从而可以进行总生物碱的定量测
定 [ 10 ～ 14] 。本实验中以盐酸小檗碱作为参比物质 , 在 pH =5. 4的
柠檬酸 -柠檬酸钠缓冲液条件下 , 与溴甲酚绿显色 ,得到岩黄连
不同部位中的总生物碱的相对含量。实验中我们对不同指示液
和缓冲液的测定结果进行比较 ,发现溴甲酚绿指示液较 0. 1%溴
代麝香草酚兰指示液显色稳定;以溴甲酚绿为指示液时 , pH 5. 4
的柠檬酸 -柠檬酸钠缓冲液所测结果在 3 h内最稳定 , 而 pH 4. 4
和 pH 6. 4的柠檬酸 -柠檬酸钠缓冲液所测结果稳定性较差 , pH
5. 4的醋酸 -醋酸钠缓冲液所测结果稳定性最差。该法灵敏度
高 , 重现性好 ,操作简便快速 , 同时 ,适于较少量样品的检测。 与
重量法 、滴定法相比克服了重复多次萃取易造成误差的缺点 , 与
液相色谱法相比 ,又具有操作简单 , 耗时少的优点。
从总生物碱的测定结果来看 ,生物碱在岩黄连植株不同部位
的分布存在明显差异 ,以根部最高 , 叶和果其次 ,花和茎最低 。结
果表明地下部分的生物碱含量最高 ,地上部分也含有较高的生物
碱含量 。由于岩黄连主要生长在岩溶地区 , 资源稀少 , 可以考虑
采摘地上部分入药以节约资源和防止水土流失。该结果为岩黄
连品质分析和进一步规范采收奠定基础。
参考文献:
[ 1 ] 　何金祥. 岩黄连茎基腐病的分离鉴定及防治 [ J] .广西植物 , 2003,
23(5):473.
[ 2 ] 　蒋水元 , 胡兴华 , 赵瑞峰. 岩黄连引种栽培研究 [ J] . 广西植物 ,
2002, 22(5):469.
[ 3 ] 　文和群 ,许兆然 , J. V illa-Lobos. 中国南部石灰岩稀有濒危植物名录
[ J] . 广西植物 , 1993, 13(2):110.
[ 4 ] 　柯珉珉 ,张宪德 ,吴练中 , 等. 岩黄连有效成分的研究 [ J] .植物学
报 , 1982, 24(3):289.
[ 5 ] 　陈祖强.广西栽培与野生岩黄连的质量比较研究 [ J] .广西植物 ,
1993, 13(2):188.
[ 6 ] 　苏国权 ,王保才 ,刘素芬 , 等. 岩黄连注射液治疗慢性乙型肝炎近
期疗效观察 [ J] . 中华现代中西医杂志 , 2004, 2(2):117.
[ 7 ] 　太永日 ,尹明实 ,朴红心 ,等. 岩黄连治疗肾综合征出血热 60例观
察 [ J] .中华实用中西医杂志 , 2004, 17(18):2746.
[ 8 ] 　谢沛珊 ,李爱媛. 中草药抗肿瘤筛选的实验研究 [ J] .时珍国药研
究 , 1996, 7(1):19.
[ 9 ] 　袁卫平 ,洪坚善 ,等. 岩黄连对肝癌介入化疗栓塞后肝损害的治疗
[ J] .广西医科大学学报, 2002, 19(2):257.
[ 10]　曾建红 ,彭正松 ,宋经元 ,等.半夏总生物碱含量的动态变化 [ J] .中
药材 , 2004, 27(7):471.
[ 11]　于　超 ,张　明 ,等. 紫外分光光度法测定不同产地半夏中总生物
碱的含量 [ J] .时珍国医国药 , 2002, 13(2):73.
[ 12]　王　伟 ,谭晓梅.荷叶总生物碱含量测定方法的研究 [ J] . 中药材 ,
2004, 27(1):50.
[ 13]　李惠芬 ,卢继新.五种不同产地天仙子总生物碱的含量分析 [ J] .中
草药 , 1999, 30(8):582.
[ 14]　黄建明 ,郭济贤 ,孙明明 , 等. 草乌中生物碱含量测定方法的研究
[ J] . 中药材 , 2002, 25(12):878.
365
LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 3 时珍国医国药 2006年第 17卷第 3期