全 文 ：Science and Technology of Food Industry 研究与探讨
2014年第14期
青刺尖茶抑菌作用的初步研究
刘 刚1，2，方 玉1，杨 妍1，张晓喻1，2，*，黎 霞1，杨 雪1
（1.四川师范大学生命科学学院，四川成都 610101；
2.四川师范大学植物资源应用与开发研究所，四川成都 610101）
摘 要：目的：研究青刺尖茶的水提物和醇提物的抑菌作用。方法：采用滤纸片扩散法和试管二倍稀释法对金黄色葡
萄球菌和大肠杆菌进行体外抑菌实验，测定抑菌圈直径、最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），比较研究水提
物和醇提物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果，并初步研究pH、温度对青刺尖茶提取物抑菌作用的影响。结
果：青刺尖茶水提液对两种菌都有不同程度的抑制作用，对大肠杆菌的抑制作用明显大于对金黄色葡萄球菌，醇提液
对大肠杆菌有显著抑制作用。青刺尖茶水提液的抑菌最适pH5～6，对热稳定。结论：青刺尖茶水提液对大肠杆菌具有
很强的抑菌效力，水提液的抑菌作用明显优于醇提液。
关键词：青刺尖茶，提取物，抑菌作用
Basic study on antimicrobial actions of Prinsepia utilis tea
LIU Gang1，2，FANG Yu1，YANG Yan1，ZHANG Xiao-yu1，2，*，LI Xia1，YANG Xue1
（1.College of Life Sciences，Sichuan Normal University，Chengdu 610101，China；
2.Institute of Phytochemistry，Sichuan Normal University，Chengdu 610101，China）
Abstract：Objective：To investigate the antimicrobial actions about the water extract and the alcohol extract of
Prinsepia utilis tea. Methods：The tube 2-fold dilution method and Kirby-Baueer Disc Diffusionto were used to
test the inhibitory of the two extract for S.aureus and E. coli. To compare the two extract’s antimicrobial effect
against the E. coli and S. aureus，the antibacterial circle diameter，minimum inhibitory concentration（MIC） and
minimal bactericidal concentration（MBC） were measured. The influence of pH and temperature on Prinsepia
utilis tea bacteriostatic action were further studied. Results：The water extract of P. utilis tea had antimicrobial
effect on both S. aureus and E. coli，specifically，its antimicrobial effect was more apparently on the E. coli than
the S. aureus，while the ethanol extract of P. utilis tea only had bacteriostatic effect on E. coli. The optimum
bacteriostatic pH for water extract was 5 to 6. Conclusion：The water extract of Prinsepia utilis tea had the
strongest antimicrobial actions on E. coli. Compared with the alcohol extract，the water extract had relatively
stronger antibacterial effect.
Key words：Prinsepia utilis tea；extract；antimicrobial acions
中图分类号：TS218 文献标识码：A 文 章 编 号：1002-0306（2014）14-0114-05
doi：10.13386/j.issn1002-0306.2014.14.016
收稿日期：2013－10－28 * 通讯联系人
作者简介：刘刚（1968-），男，副教授，主要从事植物成分分离、功能方
面的研究。
基金项目：四川师范大学“土壤污染原位修复与绿色食品药品开发”创
新团队项目（14yb29）；攀枝花市科技局项目（2014CY-C-1）。
青刺尖（Prinsepia utilis Royle）属蔷薇科扁核木
属的落叶灌木，别名炮筒果、牛奶捶、梅花刺等[1]，雌
雄同株，冬季开花，夏季结果，分布于云贵川、西藏等
地[2-3]。其根、茎、叶和果实均可入药，在川滇的纳西
族、白族、彝族、摩梭人等民族中有上千年的应用历
史。《贵州草药》和《中药大词典》记载：青刺尖茎叶主
治痈疽毒疮，风火牙痛，枪伤，骨折，蛇咬伤；根主治
虚咳，久咳，积食，风湿关节炎；果主治目翳多泪，消
化不良等[4-5]。
近年对青刺尖进行了大量研究，发现它具有很
高的药用价值[6]、营养价值[7]、经济价值和生态价值[8]，
其茎叶有抗炎功能[9]、抗脂质过氧化、抗紫外线损伤
和改善微循环等作用，其果油有很高的营养价值[10]，
有耐缺氧[11]、抗脑缺氧[12]、调节血脂等[13]功能。对青刺
尖茎、叶和果实的抑菌作用的研究均有文献报道，张
荣先等[14]对青刺尖果实、根、茎与叶4部位水提液的
抑菌效果进行研究，结果表明果实和根均有不同程
度的抑菌作用，果实提取液的明显比根好。朱正良
等[15]对青刺果提取液的抑菌进行了对比研究，结果表
明青刺果提取液有更强的抑菌效力，抑菌浓度较低，
热稳定性更好。贾琳等[16]比较青刺果油与普洱茶的
抗菌效果，发现青刺果油、普洱茶水混合物对食品腐
败菌有明显的抑菌作用。李福杏等[17]进行青刺果种
籽粕的石油醚提取物对3种细菌的体外抑菌活性研
究，结果表明提取物对3种常见致病细菌均有不同程
度的抑菌或者杀菌作用。蒲中慧等[18]用柱层析法对
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研究与探讨
2014年第14期
Vol . 35 , No . 14 , 2014
青刺果种籽粕粉乙酸乙酯提取物进行体外抑菌作用
研究，结果表明提取物及柱层析组分均有不同程度
的抑菌或杀菌作用。
综上，青刺尖是一种很有开发前景的民族药用
植物，其根、茎、叶和果实均具有明显的抑菌效果，但
目前，以绿茶制作工艺制备的青刺尖茶的功能研究
尚未见报道，对青刺尖茶水抑菌作用的研究也未见
报道。本文首次以青刺尖茶为材料，采用滤纸片扩散
法和试管二倍稀释法，对金黄色葡萄球菌和大肠杆
菌进行体外抑菌实验，比较抑菌效力，为进一步开发
功能性青刺尖茶奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
青刺尖茶 产自盐源县左所乡，成都某公司；大
肠杆菌和金黄色葡萄球菌 四川大学生命科学学
院；普通琼脂营养培养基 北京陆桥技术有限责任
公司；肉汤培养基 杭州微生物试剂有限公司；乙
醇、氨苄青霉素 成都市长征化玻有限公司；其他所
用试剂 均为分析纯。
R-1005型旋转蒸发仪、SHB-B95型循环水式多
用真空泵 郑州长城科工贸有限公司；LDZX-50KB
型立体压力蒸汽灭菌锅 上海申安医疗器械厂；
ESJ205-4型电子分析天平 沈阳龙腾电子称量仪器
有限公司；DZF-6050型真空干燥箱、DHP-9082型电
热恒温培养箱 上海一恒科学仪器有限公司；SW-
CJ-2F型超净工作台 苏净集团苏州安泰空气技术
有限公司；DHG-9240型电热鼓风干燥箱 上海精宏
实验设备有限公司；HH.W21型恒温水浴锅 北京中
兴伟业仪器有限公司；回流冷凝装置，打孔器，定性
滤纸等。
1.2 实验方法
1.2.1 青刺尖茶提取物的制备
1.2.1.1 青刺尖茶水提物的制备 称取青刺尖茶50g
加入1000mL沸水，60℃回流提取2次，每次1h，过滤，
合并滤液，浓缩至50mL（含药量相当于1g/mL），冷藏
备用。
1.2.1.2 青刺尖茶醇提物的制备 称取青刺尖茶50g
加入1000mL 70%乙醇，60℃回流提取2次，每次1h，
过滤，合并滤液，浓缩至50mL（含药量相当于1g/mL，
即1mL含1g原料），冷藏备用。
1.2.2 青刺尖茶提取物体外抑菌实验
1.2.2.1 药敏纸片的制备 用打孔器制备直径为6mm
的圆形滤纸片，121℃灭菌20min，烘干放入不同的提
取液中浸泡12h，取出后放至无菌平皿中，烘干，低温
备用。
1.2.2.2 菌悬液的制备 斜面活化金黄色葡萄球菌
和大肠杆菌，37℃恒温培养24h，用接种环挑取单个
菌落分别接种于新鲜液体肉汤培养基中，无菌水稀
释菌悬液至所需浓度，平板计数法测定两种菌的活
菌数（CFU）。
1.2.2.3 抑菌活性的测定 采用滤纸片扩散法，参考
陈丽凤等的方法[19]，取直径90mm无菌平皿，制备好普
通琼脂培养平板。用灭菌的棉签分别蘸取上述两种
细菌均匀涂布于琼脂平板表面，待平板水分干燥后，
用无菌镊子夹取药敏纸片贴在平板上，每个平板贴4
张，以无菌水作空白对照组，氨苄青霉素作阳性对照
组，每种提取物设置3个平行，扩散15min，37℃恒温
培养24h，测定抑菌圈直径。根据有无抑菌圈及抑菌
圈直径大小判定提取物抑菌效果，实验重复3次。
1.2.2.4 最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）
的测定 采用试管二倍稀释法，取12支无菌试管，每
管加2.00mL灭菌普通肉汤培养基，于第1支试管中加
入提取物2.00mL，混匀后吸取2.00mL至第2管，混匀
后吸取2.00mL至第3管，如此连续稀释至第10管，混
匀后弃去2.00mL；第11管为不加提取物作为空白对
照，观察细菌生长情况，第12管加入提取物2.00mL，
混匀弃去2.00mL，不加细菌，观察受试提取物是否有
污染。编号1～11的试管中加入菌液0.1mL（金黄色葡
萄球菌、大肠杆菌均稀释成105cfu/mL），混匀后37℃
恒温培养24h后观察结果。与第11管、第12管对比，不
发生混浊变化的最高药物稀释倍数为该药物的MIC
值，实验重复3次。将所有清晰无菌生长的试管培养
液接种于营养琼脂平板培养24h，以菌落数不超过5
个的最低药物浓度为该药物的MBC值。
1.2.2.5 pH和温度对青刺尖茶抑菌作用的影响 将
青刺尖茶提取液的pH分别调为4、5、7和8，以未处理
过的提取液（pH为6）为空白对照，采用滤纸片扩散法
测定抑菌圈直径。每处理3个平行，实验重复3次。将
青刺尖茶提取液在30、60、80、121℃水浴条件，热处
理20min，以未处理过的提取液为空白对照，采用滤
纸片扩散法测定抑菌圈直径。每处理3个平行，实验
重复3次。
1.3 统计与分析
用SPSS 13.0软件进行统计分析[20]。
2 结果与分析
2.1 抑菌活性的测定
在普通营养琼脂上，采用滤纸片扩散法，研究青
刺尖茶水提物和醇提物分别对大肠杆菌和金黄色葡
萄球菌的抑菌作用，结果见表1。
从表1可知，青刺尖茶提取物对两种供试菌都有
不同程度的抑制作用，其中青刺尖茶水提液对大肠杆
菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为：（18.00±
0.817）、（10.75±0.500）mm，分别达到高敏和中敏的抑
菌效果，表明青刺尖茶水提液对大肠杆菌的抑制作用
明显高于对金黄色葡萄球菌的抑制作用；青刺尖茶醇
提液对大肠杆菌的抑菌圈直径为（8.75±0.500）mm，
抑菌效果表现为低敏，对金黄色葡萄球菌的抑菌效
果（6.75±1.708）mm，显著低于对大肠杆菌的作用，结
果表明，青刺尖茶水提物对大肠杆菌具有较强的抑
制活性。
空白组的抑菌圈直径为0.00，表明培养未受外来
污染的影响，无菌操作严格可控，实验准确可信。实
验结果统计分析表明，与空白组（无菌水组）比较，青
刺尖茶两种提取物的p＜0.01，差异极显著，青刺尖茶
水提液和醇提液的抑菌效果明显，均有显著抑菌效
果；与阳性对照氨苄青霉素组比较，提取物的抑菌圈
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2014年第14期
图1 pH对青刺尖茶抑菌作用的影响
Fig.1 The influence of pH on Prinsepia utilis tea
pH
4 5 6 7 8
30
28
26
24
22
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
抑
菌
圈
直
径
（
m
m）
水提液对大肠杆菌的抑制作用
水提液对金黄色葡萄球菌的抑制作用
醇提液对大肠杆菌的抑制作用
醇提液对金黄色葡萄球菌的抑制作用
项目
青刺尖水提液 青刺尖醇提液 阳性对照
大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌
MBC（mg/mL） 3.91** 15.63**△△ 31.25**※※ 250**△△※※ ≤0.02 ≤0.2
表3 青刺尖茶提取物对两种细菌的最低杀菌浓度（MBC）
Table 3 The minimal concentration of Prinsepia utilis tea extract on two kinds of bacteria
注：与阳性组比较，**p＜0.01，差异极显著；与大肠杆菌组比较，△△p＜0.01，差异极显著；与水提液比较，※※p＜0.01，差异极显著。
均较小，p＜0.01，差异极显著。表明：青刺尖茶提取物
具有的抑菌效果显著比阳性组的氨苄青霉素弱很
多，但明显比空白组强。与大肠杆菌组比较，金黄色
葡萄球菌组的p＜0.01，说明：青刺尖茶两种提取物
对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑制效果具有极显
著的差异。青刺尖茶水提液的抑菌效果明显高于醇
提液。
2.2 最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）的
测定
采用试管二倍稀释法，研究青刺尖茶提取物的
MIC和MBC，实验结果，见表2和表3。
青刺尖茶提取物对两种细菌的最低抑菌浓度
（MIC）有显著差异，其中，水提物对金黄色葡萄球菌
为15.63mg/mL，而对大肠杆菌为3.91mg/mL；醇提
物对金黄色葡萄球菌为125mg/mL，而对大肠杆菌为
31.25mg/mL。
青刺尖茶水提物对大肠杆菌的MIC和MBC最小，
均为3.91mg/mL，表明其对大肠杆菌具有较强的抑菌
活性，与阳性组比较，差异极显著（p＜0.01），抑菌效
果均小于阳性组，与滤纸片扩散法得出的结果一致。
青刺尖茶醇提液对大肠杆菌的MIC和MBC均为
31.25mg/mL，与水提液组比较，青刺尖茶醇提液对金
黄色葡萄球菌的MIC为125mg/mL，MBC为250mg/mL，
差异极显著（p＜0.01），表明青刺尖茶醇提液对大肠
杆菌的抑菌效果较水提物弱很多。青刺尖茶抑菌的
主要功效性成分很可能存在于其水提物部分，其在
70%醇溶剂中具有部分溶解性。
2.3 pH和温度对抑菌作用的影响
初步考察了pH和温度对青刺尖茶提取物抑制大
肠杆菌、金黄色葡萄球菌的影响，见图1和图2。对于
其他因素对青刺尖茶两种提取液抑菌作用的影响，
有待进一步深入的研究。
从图1可知，青刺尖茶两种提取液对细菌的抑制
作用，在pH为5～6时达到最大，与前后的pH比较，
差异显著（p＜0.05），在过酸或过碱的条件，都会影响
抑菌效果，因此，青刺尖茶的最适抑菌pH为5～6。从
项目
抑菌圈直径（mm）
金黄色葡萄球菌 大肠杆菌
无菌水 -（0.00） -（0.00）
青刺尖茶水提液 ++（10.75±0.500）## **△△ +++（18.00±0.817）## **
青刺尖茶醇提液 +（6.75±1.708）## **△△※※ +（8.75±0.500）## **※※
氨苄青霉素 ++++（23.50±0.577）##△△※※ ++++（28.0±1.414）##※※
表1 青刺尖茶提取物对两种细菌的抑菌圈直径
Table 1 The bacteriostatic circle diameter of Prinsepia utilis tea extract on two kinds of bacteria
注：“－”抑菌圈直径小于6mm，判定无抑菌作用；“+”抑菌圈直径6～10mm，为低敏；“++”抑菌圈直径10～15mm，为中敏；“+++”抑菌
圈直径15～20mm，为高敏；“++++”抑菌圈直径超过20mm，为极敏。与空白组比较，##p＜0.01，差异极显著；与阳性组比较，**p＜
0.01，差异极显著；与大肠杆菌组比较，△△p＜0.01，差异极显著；与水提液组比较，※※p＜0.01，差异极显著。
试管号
提取物浓度
（mg/mL）
青刺尖茶水提物 青刺尖茶醇提物
金黄色
葡萄球菌
大肠
杆菌
金黄色
葡萄球菌
大肠
杆菌
1 500 － － － －
2 250 － － － －
3 125 － － -（MIC） －
4 62.5 － － ++ －
5 31.25 － － ++ -（MIC）
6 15.63 -（MIC） － +++ ++
7 7.82 + － +++ ++
8 3.91 ++ -（MIC） +++ ++
9 1.96 +++ ++ +++ +++
10 0.98 +++ +++ +++ +++
表2 青刺尖茶提取物对两种细菌的最低抑菌浓度（MIC）
Table 2 The minimal inhibitory concentration of Prinsepia
utilis tea extract on two kinds of bacteria
注：“－”表示溶液清澈，无菌生长；“+”表示有少量细菌生长；
“++”表示有较多细菌生长；“+++”表示溶液浑浊，细菌正常生
长，无抑菌作用。
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研究与探讨
2014年第14期
Vol . 35 , No . 14 , 2014
图2可知，温度对青刺尖茶两种提取液的抑菌效果的
影响不大，均不显著（p＞0.05），从30~120℃抑菌曲线
趋于水平，此表明，青刺尖茶两种提取液的热稳定性
较强。
3 结论
本实验研究为利用青刺尖茶开发功能性饮品或
口服液提供了理论基础，丰富了新型天然功效性保
健饮品的种类，研究为后续探讨该茶的抑菌成分做
了一定理论铺垫，同时为开发天然植物抑菌剂及抑
菌产品提供了新的植物资源。大肠杆菌（革兰阴性
菌）和金黄色葡萄球菌（革兰阳性菌）是2类常见的食
品源性的病原微生物，以抑菌圈直径、MIC和MBC为
评价指标，采用滤纸片扩散法和试管二倍稀释法，研
究青刺尖茶两种提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球
菌的抑制效果，并对pH和温度对抑菌的影响做了考
察，可得出以下结论：
3.1 青刺尖茶两种提取物均有一定的抑菌功效。与
空白对照组比较，青刺尖茶两种提取物的抑菌效果
显著的强；而与氨苄青霉素比较，两种提取物的抑菌
圈均显著较小。
3.2 青刺尖茶两种提取物对两种细菌的抑菌效果
显著不同。统计分析表明，对两种菌的抑菌效果，其
水提液与醇提液比较有显著性差异，水提液的抑菌
效果明显高于醇提液。此结果说明，青刺尖茶的主要
抑菌功效成分很可能存在于水提液中，为水溶性抑
菌活性成分，在70%乙醇溶液中只有部分溶解性。青
刺尖茶水提液对大肠杆菌的抑菌效果达到高敏，对
金黄色葡萄球菌的抑菌效果为中敏，而其醇提液对
大肠杆菌的抑菌效果为低敏，对金黄色葡萄球菌抑
菌作用不显著。青刺尖茶两种提取物对大肠杆菌的
抑菌效果，均明显高于对金黄色葡萄球菌的抑制效
果。此实验结果提示，青刺尖茶提取物水溶部分对革
兰氏阴性菌具有较强的抑制作用，而醇溶部分对革
兰氏阳性菌抑制作用不显著。
3.3 青刺尖茶水提液抑菌作用在低浓度能达到效
果，对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC（MBC）分别
为：3.91、15.63mg/mL，此值较小，表明青刺尖茶水提
液具有较强的抑菌功能。
3.4 青刺尖茶提取物抑菌的最适pH范围为5～6，其
对热稳定。选取主要影响细菌生长的pH和温度因素，
对抑菌效果进行初步研究，结果表明，过酸过碱均影
响其抑菌的效果，青刺尖茶提取物在pH5～6时有很
强的抑菌作用，在30～120℃稳定性较好，此为最佳抑
菌参数（MIC、活性pH范围、最适抑菌温度等）的探索
提供了理论的支持，同时为后续开发功能青刺尖茶
饮或口服液，做了一定的理论铺垫。
综上所述，青刺尖茶的两种提取物均具有不同
程度的抑菌效果，抑菌作用明显，由强到弱依次
为：水提液抑制大肠杆菌＞水提液抑制金黄色葡萄
球菌＞醇提液抑制大肠杆菌＞醇提液抑制金黄色葡
萄球菌。青刺尖茶水提液抑制大肠杆菌的MIC为：
3.91mg/mL。青刺尖茶抑菌的最适pH范围为5～6，对
热稳定。
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图2 温度对青刺尖茶抑菌作用的影响
Fig.2 The influence of temperature on Prinsepia utilis tea
温度（℃）
20 40 60 80 100 120
30
28
26
24
22
20
18
16
14
12
10
8
6
4
2
抑
菌
圈
直
径
（
m
m）
水提液对大肠杆菌的抑制作用
水提液对金黄色葡萄球菌的抑制作用
醇提液对大肠杆菌的抑制作用
醇提液对金黄色葡萄球菌的抑制作用
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图11 单次能量400J闪照处理对谷氨酸脱羧酶活性的影响
Fig.11 Effect of single energy 400J on GAD activity
发芽时间（h）
5 10 15 20 25
12
10
8
6
4
2
0
GA
D活
性
（
U（
10
0g
）
-1 ）
CK
100次
200次
300次
400次
500次
照500次处理时，GAD受到抑制。
单次能量500J不同闪照次数处理条件下，随着
发芽过程的进行，谷氨酸脱羧酶活性均呈上升趋势，
闪照500次处理，上升趋势不明显。与对照组相比，闪
照400、500次时，谷氨酸脱羧酶最终酶活低于对照
组。说明高能量高次数的脉冲闪照处理会降低发芽
糙米GAD活性。
3 结论
3.1 单次能量高于300J，会抑制发芽糙米内源酶活
性。糙米浸泡后进行适宜的脉冲强光处理，可以提
高其内源酶的活性。不同工序利用脉冲强光处理
对发芽糙米酶活影响依次为：浸泡后＞发芽12h＞浸
泡前。
3.2 对α-淀粉酶的影响：单次能量400J，闪照300
次，发芽25h时，α-淀粉酶活力达到12.38mg（g·min）-1，
酶活是无处理组的2.87倍。
3.3 对蛋白酶的影响：单次能量400J，闪照300次，发
芽25h，蛋白酶活性达到最大值，蛋白酶活力达到
102.36mg（g·min）-1，是无处理组1.3倍。
3.4 对谷氨酸脱羧酶的影响：单次能量400J，闪照300
次，发芽25h，GAD活性达到最大值10.83mg（g·min）-1，
是无处理组的2.16倍。
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图12 单次能量500J闪照处理对谷氨酸脱羧酶活性的影响
Fig.12 Effect of single energy 500J on GAD activity
发芽时间（h）
5 10 15 20 25
10
8
6
4
2
0
GA
D活
性
（
U（
10
0g
）
-1 ）
CK
100次
200次
300次
400次
500次
（上接第117页）
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