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收稿日期:2003-07-15
鸡肝散总黄酮提取物对大鼠实验性心肌缺血的保护作用
作者简介:楼洪刚(1974-),男 ,浙江东阳人 ,主管药师 ,硕士 ,主要从事心血管药理学研究。 Tel(571)87783665 , E-mail:louhg@sohu.com
楼洪刚1 ,何俏军2 ,吴洪海2 ,楼宜嘉2(1.浙江大学医学院附属第二医院 ,浙江　杭州 310009;2.浙江大学药学院药理学与毒理学研究
室 ,浙江　杭州 310031)
摘要:目的　研究鸡肝散总黄酮提取物(total flavone ex tract of Elsholtz ia blanda , TFEEB)抗急性心肌缺血作用及其机制 。方
法　采用雄性大鼠 iv 垂体后叶素(pituitrinum , pit)引发急性心肌缺血模型 ,以 Ⅱ导心电图 、血清 CK , Ca2+, NO 含量 , 心肌匀浆
Ca2+, NO , MDA含量等为指标 , 综合评价 TFEEB连续 ig 给药 5d 后 , 对 pit诱发大鼠急性心肌缺血的作用及其机制。结果　
TFEEB 200 mg/ kg 可显著降低 iv pit后心律失常的发生率 、对抗心电图 T 波的抬高和心率的减慢(P <0.05), TFEEB 100 ,
150 和 200 mg/kg均可显著降低血清CK 和心肌匀浆 MDA , Ca2+的水平(P<0.05或 P<0.01), 升高血清 NO , Ca2+和心肌匀
浆 NO 水平(P<0.05或 P<0.01)。结论　TFEEB 对大鼠心肌缺血有一定的保护作用 ,其机制与 TFEEB 防止心肌钙超载 、
增加心肌组织 NO 含量和抗脂质过氧化有关。
关键词:鸡肝散;心肌缺血;总黄酮;NO;垂体后叶素
中图分类号:R285.6　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2004)04-0265-04
The protective effect of total flavone extract of Elsholtzia blanda on experimental myocardial ischemia in rats
LOU Hong-gang1 , HE Qiao-jun2 , WU Hong-hai2 , LOU Yi-jia2(1.The Second Af f liated Hospital College of Medical
Sciences of Zhejiang University , Hangzhou 310009 , China;2.Department of Pharmacology and Tox icology , College of Pharma-
cy , Zhejiang University , Hangzhou 310031 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the protective effect and mechanism of total flavone extract of Elsholtzia blanda (TFEEB)on
acute myocardial ischemia.METHOD　Rats were given TFEEB for 5 d by ig .Rat acute myocardial ischemia models were prepared
by iv pituitrinum(pit)in the 5th day.Degree of ischmia was assessed by T amplitude o f lead Ⅱ dynamic ECG and hear t rate.The
mechanism of anti-myocardial ischemia was investigated by the level of creative phosphokinase(CK), calcium(Ca2+), nitric oxide
(NO)in serum and Ca2+, NO , malondialdehyde(MDA)in myocardial tissue.RESULTS　At the dose of 200 mg/kg , TFEEB could
markedly reduce the occur rence of arrhythmia , reverse the elevated T amplitude of ECG and slow heart rate induced by pit(P<0.
05).The serum level of CK and myocardial Ca2+ , MDA w ere decreased and Ca2+in serum , the level of NO in serum and myocardial
tissue w ere significantly increased in the TFEEB group(P<0.05 or P <0.01).CONCLUSION　The results suggest that the pro-
tective effect of TFEEB to myocardial ischemia in rats is related to prevent calcium overload , increase the level of NO in myocardial
tissue and inhibit lipid peroxidation.
KEY WORDS:Elsholtz ia blanda;to tal flavone;myocardial ischemia;nitric ox ide;pituitrinum
　　鸡肝散为唇形科香薷属植物四方蒿 Elsholtzia blanda
(Benth.)Benth.的全草。据《中华药海》[ 1] 、《云南中药资源名
录》[ 2] 等记载 , 本品性凉 、味苦微辛 , 入肝 、肺二经 ,具清肝明
目 、清热解表 、消炎止痛等效 ,云南等民间用于治疗夜盲症。
在治疗的过程中 ,发现该植物黄酮提取物对改善心血管疾患
症状也有一定的作用。 本研究采用尾静脉 iv 垂体后叶素
(pituitrinum , pit)诱发大鼠急性心肌缺血的动物模型 ,观察鸡
肝散总黄酮提取物(total flavone ex tract of Elsholtz ia blanda ,
TFEEB)对急性心肌缺血的保护作用 , 并探讨其作用机制 , 为
认证 TFEEB治疗心血管疾病提供依据。
·265·中国现代应用药学杂志 2004年 8月第 21卷第 4期　　　　　　　　　　　　　　　Chin JMAP , 2004 August , Vol.21 No.4
DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2004.04.003
1　实验材料
1.1　实验动物
Sprage-Daw ley大鼠 ♂体重(220±20)g , 由浙江省实验
动物中心提供(动物质量合格证号:浙实动单项准第 2001001
号 2001 年合格)。
1.2　实验仪器
Medlab5.5 生物信号采集系统:南京美易公司产品 。
1.3　实验药品 、试剂
鸡肝散 , 产于云南元阳县 , 由云南金殿制药厂提供 , 经
本院中药与天然药物研究室鉴定为 Elsholtzia blanda
(Benth.)Benth.。 TFEEB ,由本院中药与天然药物研究室制
备 ,批号 220502 , 浅黄色粉末 ,总黄酮含量为 92.5%, 临用前
加 0.5%CMC 溶液研磨成所需浓度的混悬液;心血康胶囊
(Capsule xinxuekang , XXK), 成都地奥制药集团有限公司产
品 ,批号 0202027 , 每粒胶囊含甾体总皂苷 100 mg。 临用前
取内容物加 0.5%CMC 溶液研磨成所需浓度的混悬液;pit:
上海第一生化药业公司上海生物化学制药厂 ,批号 010120 , 6
U/ mL , 临用前稀释成 0.375 U/ mL;NO 测定试剂盒(硝酸还
原酶法):浙江温州伊利康生物技术有限公司 ,批号 020513。
2　实验方法
2.1　实验分组及造模方法[ 3]
大鼠共 85 只 ,随机分为5 组 , 每组 17 只 , TFEEB 低 、中 、
高剂量组分别 ig TFEEB 提取物 100 , 150 , 200mg/kg(以总黄
酮含量计 ,其中高剂量为大鼠最大耐受量的 1/ 10), 另设溶剂
对照组 ig 4 m L/kg 0.5%CMC 溶液 ,阳性对照组 ig XXK 150
mg/kg(以甾体总皂苷计)。上述各组大鼠均 ig给药 5d , d5 ig
后 40 min , ip 2 g/ kg 乌拉坦麻醉 ,由 Medlab5.5 生物信号采
集系统连续描记一段Ⅱ导心电图 , ig 后 60 min 尾静脉 iv pit
0.75 U/ kg ,恒速 10 s内推完 ,连续记录心电图 10 min。分别
测定 iv前和 iv后 30 s , 3 , 5 , 10min 时心电图变化 , 心电图测
量以 PR 段为基线 , 每个时点测 5 个心动周期 , 取其平均值 ,
比较组间 T 波振幅和心率的变化率[ 3 , 4] ,同时观察整个过程
中心律失常发生的动物例数 , 计算心律失常发生的百分率 ,
作统计学分析。
2.2　血清 CK , Ca2+和 NO 的检测
上述大鼠断头取血 , 2500 r/ min ,离心 10 min ,分离血清 ,
采用 Olympus Au-2700 全自动生化分析仪测定血清 CK ,
Ca2+, 采用硝酸还原酶法测定 NO含量。
2.3　心肌匀浆 Ca2+,M DA 和 NO的检测
上述大鼠取心 ,用 4℃生理盐水冲洗干净残留血液 , 分离
左心室称重 ,加 9 倍重量 4 ℃生理盐水制成 10%心肌匀浆 ,
以 TBA 法测定匀浆 MDA 含量 , 考马斯亮蓝法测定蛋白含
量 ,另取一部分匀浆 , 4 ℃, 13000 r/ min , 离心 10 min ,得上清
测定 Ca2+和 NO ,方法同血清样品测定法。
2.4　统计学方法
T 波振幅和心率的的变化率比较采用秩和检验[ 5] ,心律
失常发生的百分率用χ2 检验 , 其它指标的检验采用组间 t
检验。
3　结果
3.1　TFEEB对 pit诱发大鼠心律失常的影响
大鼠 iv pit后 , 心律失常发生在 30s ～ 2min 之间 , 多表现
为室性早搏 、房室传导阻滞和窦性心律不齐[ 3 , 4] 。溶剂对照
组心律失常率高达 82.4%,而且多表现为较严重的房室传导
阻滞和窦性心律不齐 , 持续 20s ～ 5min 不等;TFEEB 各剂量
组心律失常多表现为一过性室性早搏 ,持续时间多为 10s ～
30s ,均有对抗心律失常的作用 , 呈剂量依赖性 , 以高剂量组
为显著(P< 0.01), 低剂量组 、中剂量组与高剂量组间比较
也有显著性差异(P<0.05)。表 1。
表 1　JGS 对 pit诱发大鼠心律失常的影响(n=15～ 17)
Tab 1　Effects of TFEEB on arrhythmia induced by pituitrinum
in rats(n=15～ 17)
Group Dose(mg/ kg) Rate of arrhythmia(%)
0.5%CMC - 82.4(14)
TFEEB 100 75.0(12)3)
TFEEB 150 68.8(11)3)
TFEEB 200 33.3(5)2)
XXK 150 68.8(11)
注:与溶剂组比较:2)P< 0.01;与高剂量组比较:3)P< 0.05
Note:2)P< 0.01 vs 0.5%CMC;3)P< 0.05 vs TFEEB 200 mg/ kg
3.2　TFEEB对 pit诱发大鼠急性心肌缺血 T 波振幅和心率
的影响
各组大鼠 iv pit后 , T 波均出现典型的改变:第一期 , 5 ～
30s , T 波显著高耸;第二期 , 30s 至数分钟 , T 波降低 、平坦或
倒置 ,时有心律失常发生。大鼠 iv pit 后心率显著减慢。
TFEEB 高剂量组能显著对抗 30s 时点 T 波抬高并促进心率
的恢复(P<0.05), 低剂量和中剂量组也有此趋势 , 但与溶剂
对照组比较无显著性差异(P>0.05)。表 2 , 3。
表 2　JGS 对 pit诱发大鼠心肌缺血心电图 T 波的影响(n =16 , x±s)
Tab 2　Effects of TFEEB on T amplitude of ECG in pituitrinum-induced myocardial ischemia rats(n=16 , x±s)
Group
Dose
(mg/kg)
Before iv pit
(mV)
T he T amplitude of ECG af te r iv pit(mV)
0.5m in Chang% 3min Chang% 5min Chang% 10min Chang%
0.5%CM C - 0.188±0.042 0.224±0.090 45.1±32.1 0.161±0.060 -14.4±24.6 0.149±0.059 -20.9±25.0 0.142±0.056 -24.0±24.6
TFEEB 100 0.206±0.034 0.217±0.082 43.2±30.5 0.188±0.051 -7.1±21.3 0.172±0.046 -14.6±22.8 0.172±0.035 -14.6±16.0
TFEEB 150 0.204±0.037 0.216±0.078 34.8±27.8 0.158±0.074 -22.0±30.1 0.154±0.072 -23.7±30.0 0.155±0.064 -23.8±29.2
TFEEB 200 0.202±0.048 0.248±0.069 27.3±20.41) 0.158±0.097 -30.1±39.2 0.146±0.084 -36.4±35.3 0.160±0.058 -31.0±21.6
XXK 150 0.235±0.040 0.214±0.108 45.7±22.7 0.202±0.035 -0.2±18.71)0.184±0.032 -8.8±18.9 0.174±0.030 -13.7±15.91)
注:与溶剂组比较:1)P<0.05
N ote:1)P< 0.05 vs 0.5%CMC
·266· Chin JMAP , 2004 August , Vol.21 No.4　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2004年 8月第 21卷第 4期
表 3　JGS 对 pit诱发大鼠心肌缺血心率的影响(n=16 , x±s)
Tab 3　Effects of TFEEB on hear t rate in pituitrinum-induced myocardial ischemia rats(n=16 , x±s)
Group
Dose
(mg/kg)
Before iv pit
(bea ts/ min)
Heart rate af te r iv pit(beats/min)
0.5m in Chang% 3min Chang% 5min Chang% 10min Chang%
0.5%CM C - 375±62.8 283±48.5 -23.6±10.6 256±36.4 -30.0±15.2 253±28.9 -30.8±14.3 270±30.6 -26.5±12.4
TFEEB 100 406±83.9 292±63.7 -27.3±10.9 277±30.8 -29.7±13.0 266±32.9 -32.2±15.9 282±33.0 -27.6±17.7
TFEEB 150 401±77.8 312±35.5 -20.0±15.4 278±30.9 -27.9±18.4 263±37.4 -31.4±20.0 270±24.4 -30.2±15.7
TFEEB 200 344±95.8 274±57.2 -16.7±17.7 274±44.3 -14.1±19.61) 268±38.3 -17.4±19.21) 267±40.8 -19.1±14.1
XXK 150 386±86.2 270±53.4 -27.4±16.7 271±49.4 -26.8±17.8 261±48.3 -29.6±16.9 282±40.0 -23.6±17.8
注:与溶剂组比较:1)P<0.05
N ote:1)P< 0.05 vs 0.5%CMC
3.3　TFEEB 对血清 CK , NO , Ca2+和心肌匀浆 Ca2+, NO ,
M DA 的影响
大鼠 iv pit后诱发心肌缺血性损伤 , 心肌 CK 大量释放
入血 ,心肌细胞钙超载并产生大量自由基 , 加重了心肌损伤。
TFEEB 低 、中 、高剂量组均能显著降低血清 CK 水平 ,升高血
清钙水平 ,降低心肌组织钙含量 , 减轻心肌细胞钙超载 ,减少
心肌脂质过氧化产物 MDA的产量(P <0.05 或 P <0.01),
从而有效地保护了心肌缺血性损伤。 TFEEB 低 、中 、高剂量
组均能显著升高心肌匀浆 NO 水平 , TFEEB 中 、高剂量组显
著升高血清 NO 水平(P <0.05 或 P<0.01), NO 作为血管
内皮舒张因子 ,有利于冠脉的舒张 , 增加冠脉流量 , 对心肌缺
血性损伤起重要保护作用。表 4。
表 4　JGS 对 pit诱发大鼠心肌损伤血清 CK , NO , Ca2+和心肌匀浆 MDA , NO , Ca2+的影响(n =10 , x±s)
Tab 4　Effects of TFEEB on CK , NO and Calcium content in serum and MDA , NO and Calcium content in myocardium in pitu-
itrinum-induced myocardial lesion rats(n=10 , x±s)
Group Dose(mg/ kg) In serum Content in myocardium
CK(U/ L) NO(μmol/ L) Ca2+(mmol/ L) Ca2+(μmol/ g) NO(μmol/ g) MDA(mmol/ g)
0.5%CMC - 3299±750.7 73.45±6.31 2.28±0.049 16.64±2.35 7.19±1.16 0.179±0.023
TFEEB 100 2492±1078.51) 76.29±6.59 2.33±0.0931) 14.60±2.271) 8.49±1.801) 0.155±0.0311)
TFEEB 150 2491±1093.61) 81.65±11.641) 2.34±0.111) 13.91±3.481) 8.53±1.831) 0.153±0.022＊
TFEEB 200 2646±719.81) 82.58±11.621) 2.37±0.132) 12.95±3.642) 9.02±1.522) 0.156±0.0221)
XXK 150 2849±580.91) 77.95±11.36 2.34±0.0782) 13.83±2.641) 8.95±2.271) 0.163±0.03
与溶剂组比较:1)P< 0.05 , 2)P< 0.01
1)P< 0.05 , 2)P< 0.01 vs 0.5%CMC
4　讨论
生物黄酮类化合物具有广泛的药理作用[ 6 , 7] , 具有扩张
血管的作用 ,能够改善心血管平滑肌的收缩舒张功能 , 临床
上广泛用于预防和治疗心肌缺血疾病。此外 ,它能够阻断 β
受体 , 在亚细胞水平上对线粒体产生正性影响 , 抑制心脏磷
酸二酯酶的活性 ,具有变时 、变性调节心肌收缩的作用 ,可用
于治疗心律失常 、心绞痛 、心肌梗死等症。近年来 ,生物黄酮
类化合物因其不良反应少 、疗效好 , 对心血管疾病的预防和
治疗作用正越来越受到人们的重视[ 8 ～ 10] 。
鸡肝散主要产于我国西南部温暖地区 , 资源十分丰
富[ 1] ,当地哈尼族 、拉祜族人民主要用于治疗眼睛疾患 ,关于
其用于治疗心血管疾患却鲜有记载。经分析证明 , 鸡肝散的
主要活性成方是含多个酚羟基的生物黄酮类化合物。本研
究从生物黄酮类化合物的药理作用出发 , 采用现代药理学实
验方法来认证 TFEEB 对心肌缺血的作用。 结果表明 ,
TFEEB 能有效地对抗 iv pit后 T 波的抬高和心率的减慢 , 呈
剂量依赖性 , 以高剂量为显著 , 降低大鼠血清 CK 和心肌
M DA 的水平 ,并能有效地防止心肌钙超载 ,升高血清和心肌
组织的 NO 水平 , 促进冠脉的舒张 , 增加冠脉流量。 提示
TFEEB 对实验性心肌缺血具有良好的保护作用 , 为利用 、开
发中草药资源提供了新的思路。
急性心肌缺血损伤的机制与自由基损伤和钙超载密切
相关[ 3 , 11] 。心肌缺血时 , 一方面 ,缺血区白细胞大量浸润 , 激
活中性粒细胞 , 产生氧自由基;另一方面 , 在心肌缺血期 , 因
酸中毒 ,致 Na+-H+, Na+-Ca2+交换增多 , 细胞内游离钙浓度
增加和缺血引起的细胞膜受损伤 ,引起大量细胞外钙内流致
胞内钙超载 ,钙可激活一系列钙依赖性蛋白酶 , 催化产生大
量氧自由基 ,而氧自由基引起的膜脂质过氧化反应 , 可使膜
对钙离子的通透性增加 , 进一步加剧细胞内钙聚集 , 形成恶
性循环;另外 , Ca2+超载激化了细胞膜上的磷脂酶 A 2 , 引起
膜磷脂分解而导致膜损伤 , 同时其分解产物抑制线粒体内
ATP的合成 , 使缺血心肌的能量匮乏 , 加重损伤;心肌细胞的
一系列病理改变 ,造成心肌细胞的正常功能紊乱 , 甚至死亡。
TFEEB 能显著抑制由 pit所致的心肌细胞 Ca2+含量的增加 ,
稳定细胞内的 Ca2+平衡 ,推测为 TFEEB抗心肌缺血的重要
机制之一。 TFEEB 的主要成方是含有多个酚羟基的黄酮类
化合物 ,具有很强的抗氧化作用 , 能有效地清除体内的自由
基 ,抑制脂质过氧化产物 M DA 的形成 ,有效地保护了心肌缺
血损伤。
在心血管系统中 , NO 的主要作用是舒张血管 、降低血
压 、维持血管基本张力;抑制血小板的黏附 、聚集 ,防止血栓
的形成;维持心输出量 , 并具有细胞保护的作用[ 12 ～ 14] 。本研
·267·中国现代应用药学杂志 2004年 8月第 21卷第 4期　　　　　　　　　　　　　　　Chin JMAP , 2004 August , Vol.21 No.4
究表明 , TFEEB 高 、中 、低剂量组均能有效地升高血清和心
肌匀浆 NO 的水平 ,对抗心肌缺血损伤。
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收稿日期:2003-01-01
葛根素对心肌缺血再灌注损伤的保护作用
卢金萍 ,任江华 ,姚述远(武汉大学中南医院心内科湖北　武汉 430071)
摘要:目的　探讨葛根素对心肌缺血再灌注损伤的保护作用 ,并初步探讨其作用机制。方法　19 只家兔随机分为 3 组:①假
手术组(S 组 , n =6):开胸 , 左冠状动脉前降支(LAD)只穿线不结扎 ,旷置 20min ,再观察 6h;②缺血/再灌注组(IR组 , n =7);
③葛根素治疗组(P 组 , n=6):两组均开胸结扎兔 LAD20min ,然后松扎 6h。以电镜下心肌超微结构 、心率 、再灌注心律失常 、
左室功能 、右室血清 SOD活性和 MDA 的含量及心肌组织中 SOD , MDA , ATP 水平为观察指标。结果　3 组心率均呈进行性
下降趋势 ,其中 IR组下降幅度最大。 P 组左室内压力上升和下降速率及左室内压峰值均显著高于 IR组(P<0.01), 血清及
心肌组织中 SOD活性和心肌组织中 ATP含量显著高于 IR组(P <0.01),而 MDA 含量明显低于 IR组(P<0.01), 再灌注心
律失常发生率低于 IR组(P<0.01), P 组心肌超微结构损害较轻。与 S 组比较 , P 组上述各指标均无显著差异(P >0.05)。
结论　葛根素可促进心肌缺血/再灌注损伤心功能的恢复 ,其作用机制可能与清除氧自由基 、改善心肌能量代谢等有关。
关键词:心肌再灌注损伤;葛根素;心室功能;氧自由基;三磷酸腺苷
中图分类号:R986　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2004)04-0268-04
Protective effect of puerarin on myocardial ischemia and reperfusion injury
LU Jing-ping , REN Jiang-hua , YAO Shu-yuan(Department of Cardiology , Zhongnan Hospital of Wuhan University ,
Wuhan 430071 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To explo re the protective effect of puerarin on myocardial ischemia/ reperfusion injury(MIRI)and its
mechanism.METHOD　Ninteen rabbits w ere randomized into three g roups:①sham g roup(S g roup , n=6):No t ligate the left ante-
rior descending co ronary artery after exposing the hear t , ②Ischemia/ Reperfussion g roup(IR g roup , n=7), myocardial ischemia w as
induced by ligating the left anterio r descending coronary artery , the ligature was untied 20 minutes later , ③Puerarin group(P group ,
n =6):The I/ R rabbits were treated with puerarin .All the indexes(lef t ventricular function , heart rate , reperfusion ar rhy thmia ,
·268· Chin JMAP , 2004 August , Vol.21 No.4　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2004年 8月第 21卷第 4期