全 文 ： 2010, Vol. 31, No. 23 食品科学 ※基础研究22
苦丁茶冬青与大叶冬青苦丁茶提取物
体外抗氧化活性比较研究
张文芹，许文清，孙 怡，叶 红，曾晓雄 *
(南京农业大学食品科技学院，江苏 南京 210095)
摘 要：比较苦丁茶冬青苦丁茶和大叶冬青苦丁茶提取液中多酚、黄酮的含量及体外抗氧化能力，结果表明：多
酚含量高的苦丁茶冬青苦丁茶比黄酮含量高的大叶冬青苦丁茶具有较高的体外抗氧化能力；对 5种体外抗氧化活性
评价方法之间的相关性进行分析，表明各抗氧化方法间相关性良好(R2＞ 0.8478)，尤以DPPH自由基法与ABTS＋·
法的相关性最高(R2=0.9967)。
关键词：苦丁茶冬青苦丁茶；大叶冬青苦丁茶；多酚；黄酮；抗氧化
Comparative Evaluation of Antioxidant Activity in vitro of Aqueous Extracts from Ilex kudingcha C.J. Tseng and
Ilex latifolia Thunb Leaf Teas
ZHANG Wen-qin，XU Wen-qing，SUN Yi，YE Hong，ZENG Xiao-xiong*
(College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China)
Abstract ：The contents of polyphenols and flavonoids and the antioxidant activities in vitro of aqueous extracts from the leaf
teas of Ilex latifolia Thunb and Ilex kudingcha C.J. Tseng were determined. It was found that the aqueous extract from Ilex kudingcha
C.J. Tseng had both higher polyphenol content and in vitro antixodiant performance than that from Ilex latifolia Thunb. The
correlation analysis among five antioxidant evaluation methods in vitro demonstrated that there was a good correlation among them
(R2 ＞0.8478), and the correlation between DPPH and ABTS+ free radical scavenging assays was the most significant (R2 = 0.9967).
Key words：Ilex kudingcha C.J. Tseng leaf tea；Ilex latifolia Thunb leaf tea；polyphenol；flavonoid；antioxidant activit
中图分类号： Q946.84 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2010)23-0022-05
收稿日期：2010-05-20
基金项目：国家“863”计划项目(2007AA10Z351)；南京农业大学高层次人才引进基金项目(804066)
作者简介：张文芹(1985—)，女，硕士研究生，研究方向为食品生物技术。E-mail：Zhangwenqin51@163.com
*通信作者：曾晓雄(1964—)，男，教授，博士，研究方向为食品生物技术。E-mail：zengxx@njau.edu.cn
苦丁茶是我国南部和东部地区人民饮用的一种代用
茶，富含多酚、黄酮、皂素、氨基酸等多种活性物
质，具有散风热、清头目、生津止渴、消食提神、
消炎、杀菌、止痒、减肥、降血压等多种药理功能[1- 4]。
有关苦丁茶的原植物一直存在争议，现已报道有 31种植
物在不同地区被称为苦丁茶[5]，其中最主要的 3种为冬
青科的苦丁茶冬青(Ilex kudingeha CJ Tseng)、大叶冬青
(Ilex latifolia Thunb)和枸骨(Ilex cornuta Lindl. Ex Paxt.)[6-7]，
并主产于海南、广东、广西、湖南、浙江等省。
多酚类化合物是高等植物中普遍存在的次级代谢产
物，具有广泛的生物活性。但是，有关苦丁茶多酚含
量以及抗氧化活性的研究较少[8]。实验以苦丁茶冬青树
叶加工而成的苦丁茶为原料，采用 Folin-Ciocalteu比色
法测定苦丁茶粗提物和各萃取物的多酚含量，并应用
DPPH自由基法、TEAC法和 FRAP法测定粗提物和各萃
取物的抗氧化活性，结果表明苦丁茶提取物具有较高的
多酚含量和较强的抗氧化能力。在此基础上，拟通过
测定大叶冬青苦丁茶与苦丁茶冬青苦丁茶的多酚与黄酮
含量、自由基清除能力 (包括清除 D P P H 自由基、
ABTS+·和·OH)及还原 Fe 3+为 Fe 2+的能力，比较两
种苦丁茶的抗氧化活性，旨在为苦丁茶的综合利用提供
参考。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
苦丁冬青苦丁茶(海南) 海南椰仙生物科技有限公司；
23※基础研究 食品科学 2010, Vol. 31, No. 23
大叶冬青苦丁茶(浙江) 浙江大学茶业科技开发公司。
Folin-Ciocalteu试剂、绿原酸(CHA)、DPPH(1,1-
diphenyl-2-picrylhydrazyl) 和 ABTS (2,2-azino-bis-(3-
ethylbenothiazolin-6-sulfonate) 美国 Sigma公司；TPTZ
(2,4,6-tris(2-pyridyl)-s-trizaine) Fluka公司；其余试剂均
为国产分析纯。
1.2 仪器与设备
SHZ-88型往复水浴恒温振荡器、HH-4数显恒温水
浴锅 江苏国华电器有限公司；冷冻干燥机 美国
Labconco公司；722S可见分光光度计 上海菁华科技
仪器有限公司；BL-220H分析天平 日本岛津公司。
1.3 方法
1.3.1 苦丁茶粗提物的制备
准确称取粉碎过筛的苦丁茶样，用沸水以料液 1:10
(m/V)比于 95℃水浴中提取 30min，5000× g离心 10min，
取上清液，剩余残渣重复以上操作，合并上清液，经
浓缩、冷冻干燥得苦丁茶粗提物。称取一定量粗提物，
用水溶解，即为分析用样品液。
1.3.2 多酚含量的测定
多酚含量测定采用 Folin-Ciocalteu法[9]。取 0.5mL样
品液(适当稀释)与 1.0mL Folin-Ciocalteu试剂混匀，静置
5min，加入 2.0mL饱和Na2CO3溶液，30℃水浴反应 1h，
冷却，测定 747nm波长处吸光度。样品中多酚含量以
CHA(绿原酸)当量表示。
1.3.3 黄酮含量的测定
黄酮含量的测定采用AlCl3法[10]。称取 5mg芦丁加
入 10mL 30%乙醇，配成 0.5mg/mL的母液，依次稀释
成质量浓度为 0.1、0.08、0.05、0.04、0.02mg/mL的
标准液, 测定 430nm波长处吸光度。以芦丁质量浓度为
横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线。
取 1.0mL样品液(适当稀释)与 1mL 30g/100mL AlCl3
乙醇溶液混匀，室温反应 10min，测定 430nm波长处吸
光度。样品中黄酮含量以芦丁的当量表示。
1.3.4 抗氧化能力评价
1.3.4.1 ABTS+·清除能力的测定
参照Stratil等[11]的方法(TEAC法)。取3.9mL ABTS+·
溶液与 0.1mL样品液混合、摇匀，37℃水浴反应并计
时，以磷酸盐缓冲液调零，测定反应液在第 10min时
734nm波长处的吸光度(Ai)，同时测定 3.9mL ABTS+·溶
液与0.1mL的磷酸盐缓冲液的吸光度(Ac)和3.9mL的磷酸
盐缓冲液与 0 . 1 m L 的样品液的吸光度( A j )。样品对
ABTS+·的清除率按照式(1)计算。

Ai－Aj
清除率/%＝(1－————)×100 (1)

Ac
1.3.4.2 DPPH自由基清除能力的测定
参照 Leong等[12]的方法。将DPPH自由基的无水乙
醇溶液 3mL1× 10-4 mol/L与 0.1mL不同质量浓度的样品
溶液混合，摇匀，室温、暗室反应 30min。以无水乙
醇调零，测 517nm波长处吸光度(A1)，同时测定 0.1mL
样液与 3.0mL无水乙醇混合液的吸光度(A2)和 0.1mL无水
乙醇与 3.0mL DPPH自由基醇溶液混合液的吸光度(A0)。
样品对 DPPH自由基的清除率按照式(2)计算。

A1－ A2
清除率 /%＝(1－————)×100 (2)

A0
1.3.4.3 ·OH 清除能力的测定
参照曾晓玲[13]、金鸣等[14]的方法。依次加入 2.0mL
0.15mol/L磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)、1.0mL 7.5×10mol/L
邻二氮菲、1.0mL 7.5× 10mol/L FeSO4、1.0mL样品液，
立即混匀后，加入 1.0mL 0.01% H2O2，混匀，37℃水浴
反应 60min，测定 536nm波长处的吸光度(A样)。以 1.0mL
的蒸馏水代替样品液，迅速混匀后加入 1.0mL 0.01%
H2O2，待反应结束测其吸光度(A损)。以 2.0mL的蒸馏水
代替样品液与 0.01% H2O 2，迅速混匀，待反应结束测
其吸光度(A 未损)。样品对·OH清除能力按照式(3)计算。

A样－A损
清除率/%= —————×100 (3)

A损－A未损
1.3.4.4 还原能力的测定
方法 1：参照 Benzie 等[15 ]的方法(FRAP法)。取
0.2mL样品溶液加入3.0mL FRAP试剂(由300mmol/L醋酸
盐缓冲液 300mL、10 mmol/L TPTZ溶液30mL、20mmol/L
FeCl3·6H2O溶液 30mL组成)，混匀后 37℃反应 10min，
测定 593nm波长处吸光度的变化，以 1mmol/L FeSO4为
对照。样品抗氧化能力(FRAP值)以达到同样吸光度所需
的 FeSO4的毫摩尔数表示。
方法 2：参考Oyaizu[16]的方法。取 0.4mL样品液(适
当稀释)，加入 0.4mL 0.2mol/L 磷酸缓冲液(pH 6.6) 及
0.4mL 1g/100mL K3Fe(CN)6，混合均匀，于 50℃下反应
20min ，再加入 0.4mL 的 10 g/100mL三氯乙酸，混合后
5000× g离心 10min。取上清液 1.0mL，加入 1.0mL蒸
馏水和 0.2mL 0.1g/100mL的三氯化铁溶液，混合均匀，
室温下反应 10min，测定其 700nm波长处的吸光度。实
验以抗坏血酸为对照。
2 结果与分析
2.1 大叶冬青苦丁茶与苦丁茶冬青苦丁茶的多酚与黄酮
含量
苦丁茶冬青苦丁茶、大叶冬青苦丁茶提取液的多酚
含量分别为 131.91、120.93mg绿原酸 /g(以干质量计)，
2010, Vol. 31, No. 23 食品科学 ※基础研究24
黄酮含量分别为 13.91、16.74mg芦丁 /g(以干质量计)。
苦丁茶冬青苦丁茶与大叶冬青苦丁茶多酚及黄酮含量有
明显的差别，苦丁茶冬青苦丁茶多酚含量高于大叶冬青
苦丁茶，而黄酮含量却低于大叶冬青苦丁茶。
2.2 大叶冬青苦丁茶与苦丁茶冬青苦丁茶的抗氧化能力
分析
DPPH自由基是一种合成的有机自由基，常用来研
究酚类抗氧化剂的构效关系，是近年来受到国内外普遍
重视的一种分析抗氧化活性的方法[19-21]。由图 1B可知，
苦丁茶冬青苦丁茶对DPPH自由基的清除率高于大叶冬
青苦丁茶。提取液的 IC 50值见表 1，苦丁冬青苦丁茶提
取液的 IC50为234.6μg/mL，大叶冬青苦丁茶提取液的 IC50
为 262.1μg/mL。
2.2.3 ·OH 的清除能力
·OH被公认是生物系统中最具活性的活性氧，能导
致生物体内DNA、蛋白质和脂质氧化损伤。两种苦丁茶
提取液的 IC50见表 1，苦丁茶冬青苦丁茶提取液的 IC50为
32.8μg/mL，大叶冬青苦丁茶提取液的 IC50为56.1μg/mL。
由图 1C 可知，苦丁茶冬青苦丁茶对·OH 的清除能力
高于大叶冬青苦丁茶。
2.2.4 还原能力
FRAP法的原理是基于具有抗氧化活性的物质将Fe3+
还原成 Fe2+的能力，因 Fe2+与 TPTZ反应呈现出明显的
蓝色，并在 593nm波长处有最大吸收峰[23 ]，通过吸光
度的大小判断待测物抗氧化能力的强弱。研究结果表明
苦丁茶冬青苦丁茶提取液与大叶冬青苦丁茶提取液的
FRAP值分别为 4.95、4.88mmol FeSO4/g(以干质量计)，
两者没有明显差异(表 1)。
IC50/(μg/mL)
样品
DPPH自由基 A B T S +· ·O H
FRAP 值 / 还原力/
(mmolFeSO 4/g) (mgVC/g)
大叶冬青苦丁茶 262.1 133.09 56.1 4.88 162.9
苦丁茶冬青苦丁茶 234.6 124.28 32.8 4.95 207.2
表 1 苦丁茶粗提物的抗氧化能力测定结果
Table 1 Antioxidant activities of crude extract of kudingcha
此外本研究还利用 Fe3+-Fe2+氧化还原体系测定苦丁
茶粗提取物的还原能力，该方法可以评估试样是否为良
好的电子供体[24]。Fe3+被抗氧化物质还原成为 Fe2+，吸
光度越大，表明还原能力越强。结果如表 1 所示，苦
丁茶冬青苦丁茶的还原能力为 207.2mgVC/g，而大叶冬
青苦丁茶的为 162.9mgVC/g。由此可见苦丁茶冬青苦丁
茶还原力大于大叶冬青苦丁茶，表明苦丁茶冬青苦丁茶
具有更好的抗氧化能力。
通过应用 5种方法综合测定大叶冬青苦丁茶及苦丁
茶冬青苦丁茶的体外抗氧化能力，结果表明(表 1)，苦
丁茶冬青苦丁茶体外抗氧化能力各指标均高于大叶冬青
苦丁茶，说明苦丁茶冬青苦丁茶既有较高的自由基清除
能力又有较强的还原 Fe3+成为 Fe2+能力。
2.3 相关性分析
2.3.1 多酚和黄酮含量与各抗氧化方法的相关性分析
图 1 大叶冬青苦丁茶与苦丁冬青苦丁茶的清除自由基能力的比较
Fig.1 Comparisons of scavenging activities of kudingchas made from
Ilex latifolia Thunb and Ilex kudingcha C.J. Tseng
70
60
50
40
30
20
10
0
苦丁茶冬青苦丁茶
大叶冬青苦丁茶
A
B
T
S
+
·
清
除
率
/%
质量浓度 /(mg/mL)
0.05 0.1.0 0.15 0.20 0.25 0.30
A
80
70
60
50
40
30
20
10
0
苦丁茶冬青苦丁茶
大叶冬青苦丁茶
D
PP
H
自
由
基
清
除
率
/%
质量浓度 /(mg/mL)
0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
B
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
苦丁茶冬青苦丁茶
大叶冬青苦丁茶·
O
H
清
除
率
/%
质量浓度 /(mg/mL)
0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07
C
0.00
0.0
2.2.1 ABTS+·的清除能力
TEAC法常被用于总抗氧化能力的测定[17-18]。利用
该法测定大叶冬青苦丁茶与苦丁茶冬青苦丁茶提取液的
抗氧化能力，结果发现苦丁茶冬青苦丁茶提取液的清除
能力比大叶冬青苦丁茶提取液的稍强(图 1A)，苦丁茶冬
青苦丁茶提取液的 IC50(清除率达50%时所需要的浓度)为
124.3μg/mL，大叶冬青苦丁茶提取液的 IC50为133.1μg/mL
(表 1)。IC 50越低，样品的抗氧化能力越强，这也说明
苦丁茶冬青苦丁茶提取液的清除能力比大叶冬青苦丁茶
提取液的稍强。
2.2.2 DPPH自由基的清除能力
25※基础研究 食品科学 2010, Vol. 31, No. 23
通过对多酚含量和黄酮含量与各抗氧化性评价方法
的相关性分析可以得出多酚与各方法的相关性较黄酮高
(表 2)。由此推测多酚可能是苦丁茶中主要的抗氧化成
分，抗氧化能力与多酚含量具有相同的趋势，这与之
前的报道结果一致[8 ,25]。通过比较各相关性因子可以看
出苦丁茶冬青苦丁茶中多酚含量与 D P P H 自由基、
ABTS+·以及·OH清除能力的相关性明显高于大叶冬
青苦丁茶，而铁离子还原抗氧化剂能力与总还原力则是
与大叶冬青苦丁茶中多酚含量的相关性较高。DPPH自
由基清除能力、铁离子还原抗氧化剂能力以及总还原力
与大叶冬青苦丁茶中黄酮含量的相关性比苦丁茶冬青苦
丁茶高，而 A B T S +·、·O H 清除能力与大叶冬青苦
丁茶黄酮含量的相关性比苦丁茶冬青苦丁茶低。
2.3.2 抗氧化评价方法之间相关性分析
通过对各抗氧化评价方法进行两两相关性分析可以
得出各种评价方法在本实验中相关性均较好(R2＞ 0.8478)。
由表 2可以看出，苦丁茶冬青苦丁茶中相关性最高的两
种方法为 FRAP法与DPPH自由基法，相关性因子 R2为
0.9780；相关性最低的两种方法为总还原力测定法与·OH
清除能力测定法，相关因子 R2为 0.8832。大叶冬青苦
丁茶中相关性最高的两种方法为 TEAC法与 DPPH法，
相关性因子 R2为 0.9967；相关性最低的两种方法为总还
原力测定法与·OH清除能力测定法，相关因子R2为0.8478。
因此，无论是苦丁茶冬青苦丁茶还是大叶冬青苦丁茶，
相关性最低的两种方法均是总还原力测定与·OH 清除
能力测定法，这可能与两种方法的测定原理有关。
实验结果表明抗氧化活性较高的样品同时含有较高
的多酚含量，由此可以初步判定多酚为苦丁茶提取液抗
氧化能力的主要物质来源。而且综合各种抗氧化方法及
相关性可以看出，苦丁茶冬青苦丁茶的抗氧化性比大叶
冬青苦丁茶的抗氧化性强，这可能与苦丁茶冬青苦丁茶
中多酚含量高相关。
本实验对于苦丁茶水提取液的抗氧化能力评价采用
了两套不同的评价体系。评价体系之一为评价样品对自
由基的清除能力，在这一评价体系中选用了对DPPH自
相关因子
ABTS+·IC50 DPPH自由基 IC50 ·OH IC50 FRAP值 总还原力
苦丁 大叶 苦丁 大叶 苦丁 大叶　 苦丁 大叶 苦丁 大叶
多酚含量 0.9906 0.9847 0.9923 0.9882 0.9376 0.9353 0.9741 0.9987 0.9000 0.9676
黄酮含量 0.9896 0.9656 0.9225 0.9677 0.8286 0.7487 0.8974 0.9233 0.8232 0.9496
总还原力 0.9125 0.9903 0.9512 0.9911 0.8832 0.8478 0.9444 0.9779
FRAP值 0.9460 0.9895 0.9780 0.9891 0.9530 0.9361
·OH IC50 0.8887 0.8834 0.9687 0.8799
DPPH自由基 IC50 0.9666 0.9967
表 2 相关性分析
Table 2 Analysis of correlation coefficients
由基、ABTS+·及·OH的清除能力作为评价方法。评
价体系之二为评价样品的还原能力，采用测定铁离子还
原抗氧化剂的能力、总还原力两种不同的测定方法。之
所以选用两种不同的评价体系是因为这两套不同的体系
可以共同并较为准确的反映样品的抗氧化能力。在不同
的体系内部选用不同的方法主要是为了弥补单种独立评
价方法的不足，以防方法的局限性导致实验数据的片面
性。由分析结果来看体系内部各方法之间相关性非常显
著，而自由基清除能力评价体系与还原能力评价体系两
体系之间相关性相对较低。研究结果充分说明了选取不
同体系对样品抗氧化能力同时进行评价的必要性。
3 结 论
本研究比较苦丁茶冬青苦丁茶和大叶冬青苦丁茶提
取液中多酚、黄酮的含量及体外抗氧化能力，结果表
明两种苦丁茶均具有较好的体外抗氧化活性；相对而
言，多酚含量高的苦丁茶冬青苦丁茶比黄酮含量高的大
叶冬青苦丁茶具有较高的体外抗氧化能力。因此，富
含多酚类物质和良好抗氧化活性的苦丁茶冬青苦丁茶和
大叶冬青苦丁茶具有广阔的开发应用前景。
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