全 文 ：大叶冬青苦丁茶多糖提取、纯化与抗氧化活性研究
赵天湖 ,范嘉龙 ,闫　冬 ,徐人杰 ,郎昌野 ,孙　怡 ,曾晓雄*
(南京农业大学食品科技学院 ,江苏南京 210095)
摘　要: 大叶冬青苦丁茶经 85%乙醇溶液脱脂、热水提取、 S-8大孔树脂脱色、醇沉、干燥 ,得到大叶冬青苦丁茶粗多糖。 粗
ILPS经 DEAE-52纤维素阴离子交换层析柱分离 ,得到 4个多糖组分 ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3和 ILPS-4。采用化学法分别测
定了粗多糖及其纯化组分的体外清除自由基 ( DPPH·自由基 , O2-·自由基 ,· OH自由基 )能力、还原能力以及螯合金属离子
能力。 结果表明 ,大叶冬青苦丁茶多糖具有较强的体外抗氧化活性 ,并且抗氧化能力与多糖浓度之间存在良好的相关性。
关键词: 大叶冬青苦丁茶 ;多糖 ;提取 ;纯化 ;抗氧化活性
中图分类号: R284. 1　　　　文献标识码: A
文章编号: 1001-5280( 2011) 01-0056-05　　　　 DOI: 10. 3969 /j. issn. 1001-5280. 2011. 01. 17
Extraction , Purificat ion and Antioxidant Act ivity in Vitro of Polysac -
charides from Kudingcha Made from Ilex latifolia Thunb
ZHAO Tian-hu ,FAN Jia -long ,YAN Dong ,XU Ren-jie ,
LANG Chang -ye ,SUN Yi ,ZENGXiao -xiong*
( Co llege o f Food Science and Technolog y, Nanjing Ag ricultural Univ ersity, Nanjing , Jiang shu 210095, China )
Abstract: Kudingcha made from Ilex lati f olia Thunb w as defa tted with 85% ethano l, and then ex tracted with hot w ater ,
deco lo red by S-8 mac ropo rous resin, precipita ted by ethanol, and dried to affo rd crude polysaccha ride ( ILPS) . Four
purified polysaccha rides, ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3 and ILPS-4, w er e gained fr om crude ILPS by DEAE-52 anion-exchange
ch roma tog raphy. Fur thermo re , th e antio xidant activities in v itro o f the crude ILPS and its purified f ractions w ere evalua ted
by de termina tions o f scaveng ing activ ities on 1, 1-diphenyl-2-picry lhydr azyl ( DPPH· ) free radicals, supero xide anion
radicals ( O2
-· ) , hydro xyl radicals (· O H) , fer ric reducing-antiox idant powe r ( FRAP) and chela ting capacity to Fe2+ . The
results indicated that ILPS exhibited strong antio xidant activity , and the antioxidant activ ity wa s significantly co r rela ted
with its concentra tion.
Key words: Kudingcha made from Ilex lati f olia Thunb; Po ly saccharide; Ex traction; Purification; Antiox idant activ ity
　　大叶冬青苦丁茶是我国民间传统的“代用茶”品
种 ,系由大叶冬青 ( Ilex lat i f olia Thunb )叶加工而
成。据报道 ,大叶冬青苦丁茶富含多酚类、萜类、氨基
酸、皂苷和多糖等生物活性成分 ,具有清热解毒、杀菌
消炎、健胃消积、止咳化痰、生津止渴、提神醒脑、明目
益智和抗辐射、抗衰老、活血脉、调节血脂等功效 [1～ 3 ]。
以往对苦丁茶生物活性成分的研究主要集中在三萜类
化合物、皂苷类化合物、多酚化合物以及挥发性成分的
分析等方面 [4～ 8 ]。近几年来 , Sun、何玲玲等对苦丁茶冬
青叶多糖的提取、纯化、体外抗氧化活性等进行了初步
　　收稿日期: 2010-10-16
作者简介:赵天湖 ( 1988- ) ,女 ,生物工程专业。 * 通讯作
者 , Email: zengxx@ njau. edu. cn。
基金项目: 国家大学生创新性实验计划项目 ( 091030727)。
研究 [ 9～ 13] ,但未见有关大叶冬青苦丁茶多糖的研究报
道。本文采取热水提取与醇沉制备大叶冬青苦丁茶多
糖 ,利用层析技术对其进行分离纯化 ,并对大叶冬青苦
丁茶粗多糖及其纯化组分的体外抗氧化活性进行评
价 ,旨在为我国特有药用植物的深层次开发利用研究
提供理论基础。
1　材料与方法
1. 1　材料、试剂与仪器
大叶冬青苦丁茶由浙江大学茶学系 (浙江杭州 )提
供。
1, 1-二苯基苦基苯肼 ( DPPH)、菲咯嗪、氯化硝基
四氮唑蓝 ( N BT)、吩嗪硫酸甲酯 ( PM S)、还原型辅酶
Ⅰ ( N ADH)、三吡啶吖嗪 ( TPTZ) ,美国 Sigma公司 ;
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DEAE-52纤维素 , Whatman公司 ;邻二氮菲、磷酸氢
二钠、磷酸二氢钠、过氧化氢、硫酸亚铁、氯化铁、氯化
亚铁、苯酚、浓硫酸、氯化钠、无水乙醇、氢氧化钠等试
剂均为国产分析纯。
AY-120电子精密天平 ,日本 Shimadzu公司 ;
Heido lph Labo rota 4000真空旋转 蒸发仪 ,德 国
Heido lph; 722可见分光光度计 ,上海菁华科技仪器有
限公司 ; Alpha1-2型冷冻干燥机 ,英国 LABCONCO
公司 ; HL-2B数显恒流泵、 BS-100A自动部份收集器 ,
上海沪西分析仪器厂。
1. 2　方法
1. 2. 1　多糖提取
大叶冬青苦丁茶多糖的提取参照何玲玲等 [10 ]报
道的方法并稍作改动。将大叶冬青苦丁茶磨碎 ,过 80
目筛。 称取一定量大叶冬青苦丁茶粉样 ,用 15倍体积
的 85%乙醇 80℃回流提取 2次 ,每次 1 h ,以除去大部分
脂类和多酚类物质。残渣用 20倍体积的去离子水进行
热提取 3次 ,水浴温度 90℃ ,每次提取时间 3 h。提取液
离心 ,合并 3次上清液 ,置旋转蒸发仪 50℃减压浓缩至
初始体积的 1 /4,再用 S-8大孔树脂脱色 [ 14]。脱色液用
sevage法脱蛋白3次 ,加 3倍体积无水乙醇搅拌 ,过夜 ,
离心 ,沉淀物经干燥后即为大叶冬青苦丁茶粗多糖 (粗
ILPS)。
1. 2. 2　粗多糖的纯化
粗 ILPS用水溶解 ,溶液上 DEAE-52离子交换柱 ,
并用去离子水、 0. 1、 0. 3和 0. 5 mo l /L NaCl溶液依次
梯度洗脱 ,流速 1. 0 mL /min,分步收集 ( 10 min /管 ) ,
每梯度 20管。用苯酚 -硫酸法检测洗脱液中多糖的含
量。根据洗脱曲线的主峰位合并收集液 , 50℃旋转蒸发
浓缩 ,去离子水透析 48 h以去除 NaCl及小分子杂质 ,
最后将透析液冷冻干燥 ,得大叶冬青苦丁茶纯化多糖
( ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3和 ILPS-4)。
1. 2. 3　体外抗氧化活性的测定
( 1)清除 DPPH·自由基活性测定。DPPH·清除能
力测定参考文献 [15]的方法。取不同浓度的多糖样品
溶液 1. 0 mL于试管中 ,分别加入 0. 3 mL DPPH·溶液
(无水乙醇配制 , 0. 4 mmo l /L) ,再加入 2. 0 m L水。 混
匀反应体系 , 30 min后于分光光度计 517 nm处测定吸
光值。以水代替样品溶液、无水乙醇代替 DPPH·溶液 ,
作空白实验调零用。清除效果依下面公式计算:
清除率 (% )= A0 - ( A1 - A2 )
A0
× 100
其中: A0为对照实验 (水代替样品溶液 )的吸光
值 ; A1为样品实验的吸光值 ; A2为样品干扰实验 (无水
乙醇代替 DPPH·溶液 )的吸光值。
( 2)清除超氧阴离子自由基 ( O2 -· )活性测定。 O2 -·
清除能力的测定参照文献 [16 ]的方法进行 ,并作适当
修改。取不同浓度的多糖样品溶液 1. 0 mL于试管中 ,
分别加入 1. 0 mL NBT溶液 ( 156μmol /L )、 1. 0 mL
N ADH溶液 ( 468μmol /L )和 1. 0 mL PM S溶液 ( 60
μmo l /L)。混匀反应体系 , 25℃水浴 5 min,于分光光度
计 560 nm处测吸光值。 NBT溶液、 NADH溶液和
PM S溶液都以 0. 1 M pH7. 4磷酸盐缓冲液配制。以水
代替样品溶液、 0. 1 M pH7. 4磷酸盐缓冲液代替 N BT
溶液 ,作空白实验调零用。 清除效果依下面公式计算:
清除率 (% )= A0 - ( A1 - A2 )
A0
× 100
其中: A0为对照实验 (水代替样品溶液 )的吸光
值 ; A1为样品实验的吸光值 ; A2为样品干扰实验 ( 0. 1
M pH7. 4磷酸盐缓冲液代替 NBT溶液 )的吸光值。
( 3)清除羟基自由基 (· OH)活性测定。 苦丁茶多
糖对· OH的清除能力测定参考文献 [11 ]的方法 ,并作
适当修改。 在反应体系中分别加入 1 mL邻二氮菲 ( 5
mmol /L) , 2 mL PBS缓冲液 ( 0. 2 mo l /L, pH7. 4) ,充
分混匀后 ,加入 1 mL FeSO4溶液 ( 7. 5 mmol /L) ,立即
混匀 ,再向反应体系中加入不同浓度的多糖溶液 1
m L,混匀。 另设阴性对照管和正常管 ,不加多糖溶液。
再分别加入 1 mL0. 01%的 H2O2溶液 ,正常管不加
H2O2溶液 ,以等体积蒸馏水补充体积。在 37℃水浴中
反应 30 min,测定 A536。 清除能力依下面公式计算:
清除率 (% )= A2 - A1
A0 - A1
× 100
其中: A0正常管吸光值: 1 mL邻二氮菲+ 2 mL
PBS+ 1 mL FeSO4+ 2 mL H2O; A1阴性对照管吸光
值: 1 mL邻二氮菲+ 2 mL PBS+ 1 mL FeSO4+ 1 mL
H2O+ 1 mL H2O2 ; A2样品管吸光值: 1 mL邻二氮菲
+ 2 mL PBS+ 1 mL FeSO4+ 1 mL样品溶液+ 1 mL
H2O2。
( 4)螯合金属离子能力测定。 大叶冬青苦丁茶粗
多糖及其纯化组分螯合金属离子能力的测定参照
Yang等 [ 17]的方法进行。 取不同浓度的多糖溶液 1. 0
m L于试管中 ,分别加入 0. 05 mL氯化亚铁溶液 ( 2. 0
mmol /L)、 0. 2 mL菲咯嗪溶液 ( 5. 0 mmol /L )和 2. 25
m L水。混匀反应体系 , 10 min后于分光光度计 562 nm
处测吸光值。以水代替多糖溶液和氯化亚铁溶液 ,作空
白实验调零用。螯合能力依下面公式计算:
螯合率 (% )= A0 - ( A1 - A2 )
A2
× 100
其中: A0为对照实验 (水代替多糖溶液 )的吸光
572011年 第 25卷 第 1期　　　　　　　　　　　　　　　作 物 研 究　　　　　　　　　　　　　　　
值 ; A1为样品实验的吸光值 ; A2为样品干扰实验 (水代
替氯化亚铁溶液 )的吸光值。
( 5) 总还原力测定。 采用铁还原 /抗氧化能力
( Fer ric reducing /antiox idant pow er, FRAP) 分 析
法 [18 ]测定大叶冬青苦丁茶粗多糖及其纯化组分的总
还原能力。
FeSO4 标准曲线的绘制: 依次取一系列浓度
FeSO4溶液 1. 0 mL于不同试管中 ,再分别加入 5. 0
m L FRAP试剂。 混匀反应体系 , 37℃水浴 10 min,于
分光光度计 593 nm处测吸光值。以 FeSO4的浓度为横
坐标 ,吸光值为纵坐标 ,绘制 FeSO4标准曲线。
样品抗氧化活性的测定: 配制适当浓度的多糖溶
液 ,取多糖溶液 1. 0 mL,加 FRAP试剂 5. 0 mL。混匀反
应体系 , 37℃水浴 10 min,于分光光度计 593 nm处测
吸光值 A1。以水代替多糖样液 ,作空白实验调零用。
以水代替 FeCl3溶液作为样品干扰管 ,测量 A2。
抗氧化能力的 FRAP值以每毫克样品达到同样吸
光度 ( A1 - A2 )所需 FeSO4的摩尔数表示。
2　结果与分析
2. 1　大叶冬青苦丁茶多糖的提取与纯化
30 g大叶冬青苦丁茶样经提取后 ,得到粗 ILPS
1. 877 g ,得率为 6. 26% 。
利用 DEAE- 52层析柱对大叶冬青苦丁茶粗多
糖进行分离 ,结果见图 1。从图中可以看出 ,粗 ILPS经
DEAE- 52层析柱分离后得到 4个主要组分 ,分别是
水洗脱的组分 ILPS-1, 0. 1 mo l /L NaCl溶液洗脱的组
分 ILPS-2, 0. 3 mol /L NaCl溶液洗脱的组分 ILPS-3
和 0. 5 mol /L NaCl溶液洗脱的组分 ILPS-4。
图 1　大叶冬青苦丁茶粗多糖经DEAE-52色谱柱的梯度洗脱曲线
Fig . 1　Stepwise elution curve of crude ILPS on
　DEAE-52chromatography column
2. 2　粗 ILPS及其纯化组分的体外抗氧化活性
2. 2. 1　大叶冬青苦丁茶多糖清除 DPPH·自由基活性
DPPH
·自由基是一种较稳定的自由基 ,已被广泛
应用于抗氧化剂清除自由基活性的评价中 [19 ]。图 2反
映的是大叶冬青苦丁茶多糖及其纯化组分清除
DPPH·自由基的活性。 从图中可以看出 ,在试验浓度
范围内 ,大叶冬青苦丁茶多糖具有一定的清除 DPPH·
自由基的能力 ,其清除活性与多糖浓度呈正相关。其中
粗 ILPS, ILPS-1, ILPS-2具有较强的清除 DPPH·自由
基能力 ; ILPS-3和 ILPS-4在试验浓度范围内清除能
力相对较弱。在质量浓度为 1 000μg /mL时 ,粗 ILPS,
ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3与 ILPS-4对 DPPH·自由基的
清除率依次为 80. 21% , 65. 28% , 59. 03% , 37. 50%与
4. 67% 。
图 2　大叶冬青苦丁茶粗多糖及其纯化
　 组分清除DPPH·自由基活性
Fig . 2　The scavenging acti viti es of crude ILPS and
　　　i ts puri fi ed fractions on DPPH· free radical
2. 2. 2　大叶冬青苦丁茶多糖清除超氧阴离子自由基
( O2
-· )活性
O2
-· 是生物体内主要的活性氧自由基 ,由其引发
的体内脂质过氧化是机体衰老、心血管病及肿瘤发生
的重要原因 [20 ]。 O2-·清除率是反应药物抗氧化作用的
重要指标。
图 3是不同浓度下粗 ILPS及其纯化组分清除 O2 -·
的活性。从图中可以看出 ,粗 ILPS清除 O2-·的能力比
纯化组分强 ,接近阳性对照 Vc的水平 ;而 ILPS-1和
ILPS-3清除 O2-·的活性较弱。质量浓度在 250～ 1 000
μg /mL范围内时 ,粗 ILPS, ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3和
ILPS-4清除 O2-·的活性与多糖浓度呈正相关 ;当多糖
质量浓度大于 1 000μg /m L时 ,随着多糖浓度的升高 ,
清除 O2 -· 的活性增加较为缓慢。在质量浓度为 4 000
μg /mL时 ,粗 ILPS, ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3和 ILPS-4
清除 O2-·的活性分别是 87. 30% , 35. 87% , 62. 57% ,
19. 46%和 73. 99% 。结果表明 ,大叶冬青苦丁茶多糖具
有清除 O2 -·的活性 ,其中粗 ILPS, ILPS-4和 ILPS-2组
58 CROP RESEARCH　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2011, 25( 1)
分显示出较强的清除 O2-·活性。
图 3　大叶冬青苦丁茶粗多糖及其纯化组分清除O 2-·活性
Fig . 3　Scavenging activi ty of crude ILPS and
its puri fied fractions on O 2
-·　
2. 2. 3　大叶冬青苦丁茶多糖清除羟自由基 (· OH)活
性
邻二氮菲 - Fe2+氧化还原指示剂的颜色变化可敏
锐地反映溶液氧化还原状态的改变 ,通过 Fenton反应
产生的· OH是一种强氧化剂 ,邻二氮菲与· OH相互
作用并产生有色物质 ,该物质在 536 nm下有最大吸
收 [21 ]。· OH在体内可以造成细胞损伤 ,从而会引起许
多病理变化 ,故· OH清除率是反映药物抗氧化作用的
重要指标。
　　大叶冬青苦丁茶多糖对· OH的清除作用见图 4。
图 4　大叶冬青苦丁茶粗多糖及其纯化组分清除·OH活性
Fig . 4　Scavenging activi ty of crude ILPS and its
　　purified fractions on hydroxyl radicals
　　从图 4可以看出 ,苦丁茶多糖对· OH具有一定的
清除作用 ,且随着多糖浓度的增加 ,清除率上升。在质
量浓度为 4 000μg /mL时 ,粗 ILPS, ILPS-1, ILPS-2,
ILPS-3和 ILPS-4的清除率分别为 78. 86% , 60. 04% ,
60. 27% , 9. 42%和 0. 64%。同阳性对照物 V c相比 ,粗
ILPS在 4 000μg /mL时清除率与其接近 ,说明粗 ILPS
具有较强的清除· OH的能力。
2. 2. 4　大叶冬青苦丁茶多糖螯合金属离子能力
在体内 ,过渡金属离子起催化脂质过氧化过程的
作用 ,从而导致多种疾病。 在过渡金属离子中 , Fe2+ 因
其具有高的反应活性被认为是最重要的脂质过氧化促
进剂。因此 ,对金属离子 Fe2+ 的螯合能力被认为是评价
药品抗氧化能力的方法之一。
图 5反映的是大叶冬青苦丁茶粗多糖及其纯化组
分螯合 Fe2+的能力。从图中可以看出 , Fe2+ 能够被大叶
冬青苦丁茶多糖以剂量依赖方式所螯合。 在 0～ 2 000
μg /mL质量浓度范围内 ,大叶冬青苦丁茶多糖表现出
较好的螯合金属离子的能力 ,其螯合能力的大小顺序
依次是 ILPS-4> 粗 ILPS> ILPS-1> ILPS-2> ILPS-3。
大叶冬青苦丁茶粗多糖及其纯化组分在低浓度范围
内 ,螯合金属离子能力随浓度变化较明显 ,而在高浓度
范围内变化较平稳。在质量浓度为 2 000μg /mL时 ,粗
ILPS, ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3和 ILPS-4的螯合率分
别为 66. 15% , 46. 70% , 11. 27% , 4. 71%和 76. 29%。
图 5　大叶冬青苦丁茶粗多糖及其纯化组分螯合金属离子能力
Fig . 5　Metal ion chelating acti vities of crude ILPS
and its purified fractions　　　　　
2. 2. 5　大叶冬青苦丁茶多糖的总还原力
大叶冬青苦丁茶中的抗氧化物质 ,可将 Fe3+ -
T PT Z复合物还原成深蓝色的 Fe2+ - TPTZ复合物 ,
该蓝色复合物在 593 nm处有最大吸收值。因此可根据
吸光值的大小计算样品抗氧化活性的强弱 [18 ]。
本研究中 , FRAP值 (以每 mg样品达到同样吸光
度所需 FeSO4的 mo l数表示 )被用来评价大叶冬青苦
丁茶多糖 (粗 ILPS, ILPS-1, ILPS-2, ILPS-3和 ILPS-
4)的抗氧化能力。FRAP值越高 ,表明抗氧化物质还原
的 Fe2+ 越多 ,即抗氧化物质的抗氧化活性越强。 FRAP
法的 FeSO4标准曲线线性回归方程为 y = 0. 0036x +
592011年 第 25卷 第 1期　　　　　　　　　　　　　　　作 物 研 究　　　　　　　　　　　　　　　
0. 0530,回归系数 R2 = 1. 0000。粗 ILPS, ILPS-1,
ILPS-2, ILPS-3和 ILPS-4的 FRAP值分别是 307. 5,
47. 2, 37. 5, 11. 8和 41. 4 mol /mg,即大叶冬青苦丁茶
多糖对 FRAP的总抗氧化活性顺序为粗 ILPS> ILPS-
1> ILPS-4> ILPS-2> ILPS-3。
3　结论与讨论
大叶冬青苦丁茶粗多糖及其纯化多糖组分对
DPPH
·
, O2
-·和· OH都有一定的清除作用 ,具有较强
的还原能力与螯合金属离子能力。从实验结果中可以
看出 ,在 DPPH· , O2-·和· OH清除能力与总还原力测
定中 ,大叶冬青苦丁茶粗多糖的抗氧化活性明显高于
纯化组分的活性。 这可能是由于分离纯化等操作去除
了与多糖结合的成分 ,如蛋白、多酚等 ,而这些成分的
存在可能会提高样品的抗氧化活性 ,同时多种多糖的
相互作用也有可能提高其抗氧化活性 ,具体机理有待
于进一步的研究。在螯合金属离子能力测定中 , ILPS-
4的螯合金属离子能力高于粗 ILPS与其它纯化组分 ,
并且其具有较强的清除 O2-·的能力。因此 ,大叶冬青苦
丁茶多糖的结构与其抗氧化能力的关系有待于进一步
的研究。
综上所述 ,大叶冬青苦丁茶多糖具有较强的体外
抗氧化活性 ,大叶冬青苦丁茶多糖应是大叶冬青苦丁
茶的主要功能成分。系统地研究其生物活性有利于有
效、全面利用大叶冬青苦丁茶资源。
参考文献:
[ 1]　庄辉发 .大叶冬青苦丁茶的研究现状与发展前景 [ J].热
带农业科学 , 2009, 29( 8): 51- 54.
[ 2]　刘祖生 .苦丁茶化学成分研究 [ J].浙江农业大学学报 ,
1992, 18( 5): 66- 69.
[ 3]　潘慧娟 ,廖志银 ,应奇才 ,等 .苦丁茶大叶冬青的降脂作用
研究 [ J].茶叶科学 , 2004, 24( 1): 49- 52.
[ 4]　欧阳明安 ,苏军华 ,刘玉青 ,等 .苦丁茶冬青化学成分的结
构研究 [ J].天然产物研究与开发 , 1997, 9( 3): 19- 23.
[ 5]　毛莉娟 ,刘学文 ,冉　旭 .苦丁茶中黄酮的提取工艺 [ J].
食品技术 , 2002, ( 11): 18- 24.
[ 6 ]　 Liu L, Sun Y , Laura T , et al. Dete rmination of
polyphenolic content and antiox idant activ ity of
Kudingcha made from I le x kudingcha C. J. Tseng [ J].
Food Chemist ry , 2009, 112: 35- 41.
[ 7]　何　炜 ,屠幼英 ,胡丹竹 ,等 .浙江省大叶冬青苦丁茶化学
成分的分析 [ J].浙江农业科学 , 2006, ( 1): 44- 46.
[ 8 ]　牟利辉 .江西婺源大叶冬青苦丁茶治疗高血压的临床疗
效对比观察 [ J].现代诊断与治疗 , 2005, 16( 4): 223.
[ 9]　 Sun Y , Hu Z, Zhang D, et a l. Ex trac tion and antiox idant
activ ities o f po lysacha rides f rom Kudingcha made from
I lex kudingcha C. J. T seng [ J ]. Gly cobio lo gy , 2009, 19:
1307- 1308.
[ 10 ]　何玲玲 ,王　新 .苦丁茶冬青叶多糖的提取与鉴定 [ J].
沈阳化工学院学报 , 2006, 20( 1): 12- 15.
[ 11 ]　王　新 ,何玲玲 ,刘　彬 .苦丁茶冬青叶多糖的分离纯化
及其对羟自由基的清除作用 [ J].食品科学 , 2008, 29
( 6): 37- 40.
[12]　吴晓鹏 ,王一飞 ,刘秋英 ,等 .苦丁茶多糖抗氧化活性研
究 [ J].食品与发酵工业 , 2008, 34( 2): 34- 36.
[ 13 ]　何玲玲 ,陈尚东 ,兰丽艳 .苦丁茶冬青叶多糖的组成分析
[ J].沈阳化工学院学报 , 2007, 21( 1): 68- 70.
[ 14 ]　 Liu J, Luo JG, Sun Y, et al. A simple method fo r the
simultaneous deco lo ra tion and depro teiniza tion o f c rude
levan ex tra ct f rom Paenibacillus pol ym yxa E JS-3 by
mac ropo rous resin [ J]. Bio resource Techno lo g y, 2010,
101: 6077- 6083.
[ 15 ]　林恋竹 ,赵谋明 .反应时间对 DPPH·法、 ABT S+·法评价
抗氧化性结果的影响 [ J].食品科学 , 2010, 31( 5): 63-
67.
[ 16 ]　 Li X , Zhou A, Han Y. Anti-oxida tion and anti-
micro or ganism activities o f purification polysaccha ride
f rom Lygodium japonicum in v itro [ J]. Ca rbohydrate
Polym ers, 2006, 66( 1): 34- 42.
[ 17 ]　 Yang XB, Gao XD, Han F, e t a l. Sulfation of a
po ly saccharide pr oduced by a ma rine filamentous
fungus Phoma herbarum YS4108 alters its antiox idant
pr oper ties in vitr o [ J]. Biochimica e t Biophy sica Ac ta-
General Subjects, 2005, 1725( 1): 120- 127.
[ 18 ]　 Benzie IFF, St rain JJ. The ferric reducing ability of
plasma as a measure of “ antiox idant pow er”: the FRAP
assay [ J]. Anal Biochem, 1996, 239: 70- 76.
[ 19 ]　 Hu F, Lu R, Huang B, et a l. Free radical scavenging
ac tiv ity of ex tracts prepared from fr esh leaves of
selected Chinese medicina l plants [ J]. Fitote rapia, 2004,
75( 1): 14- 23.
[ 20 ]　 Taso R, Deng ZY. Sepera tion pro cedures fo r na turally
o ccur ring antio xidant phy tochemicals [ J ]. Journal
Chroma to g raphy B, 2004, 812: 85- 99.
[ 21]　金鸣蔡 ,亚　欣 ,李金荣 ,等 .邻二氮菲 - Fe2+ 氧化法检
测 H2O2 / Fe2+ 产生的羟自由基 [ J].生物化学与生物物理
进展 , 1996, 23( 6): 553- 555.
60 CROP RESEARCH　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 2011, 25( 1)