全 文 ：·加工炮制与养护·
蒲黄炒炭前后化学组分的变化及谱效相关性研究
陈佩东，孔祥鹏，李 芳，丁安伟
( 南京中医药大学药学院，江苏 南京 210046)
摘要 目的: 对蒲黄炒炭前后化学成分的变化与凝血酶活性的谱效相关性进行研究。方法: 采用 UPLC—
MASS比较蒲黄炒炭前后化学成分的变化，采用凝血酶活性测定法对炒炭前后主要变化的色谱峰成分进行活性测
定。结果:蒲黄炒炭前后化学组分发生了明显变化，其中黄酮类组分中苷类明显减少，凝血活性差异较大的主要为
槲皮素、异鼠李素。结论:蒲黄炒炭前后黄酮类化合物变化最为显著，这可能是蒲黄活血化瘀和蒲黄炭止血活性的
主要物质基础之一。
关键词 蒲黄;蒲黄炭;黄酮;凝血
中图分类号: R283. 1 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2012) 08-1221-04
Spectrum-active Relation Research on Typha angustifolia
before and after Carbonized
CHEN Pei-dong，KONG Xiang-peng，LI Fang，DING An-wei
( Nanjing university of traditional Chinese medicine，Nanjing 210046，China)
Abstract Objective: To study the components of Typha angustifolia change before and after carbonized and the correlation with
its effective. Methods: The chemical constitutions between the pollen and its carbonized product were compared by UPLC-MASS and
their thrombin activity was tested. Results: The change of components was significant especially the flavonoids. The content of fla-
vonoid glycoside was reduced obviously and the thrombin activity showed the main difference was quercetin and isorhamnetin. Conclu-
sion: The flavonoids in pollen typha may be the main factors in their thrombin activity.
Key words Typha angustifolia L. ; Carbonized Typha angustifolia L. ; Flavonoids; Thrombin
收稿日期: 2011-12-12
基金项目:国家行业专项( 20110700707)
作者简介:陈佩东( 1970-) ，男，博士，副教授，研究方向:中药化学; Tel: 13851948464，E-mail: chenpeidong1970@ 163. com。
蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲( 狭叶香蒲) Typha
angustifolia L. 、东方香蒲 Typha orientalis Presl 或同
属植物的干燥花粉，为重要的传统化瘀药物。具有
行血和破血的功效;蒲黄炭具有明显的止血作用，可
用于吐血、崩漏及其他多种出血病证，疗效确切。蒲
黄中主要化学成分有黄酮类〔1-3〕。近年来对蒲黄中
主要黄酮类成分的凝血作用也有研究〔4〕。本文采
用 UPLC-MASS技术和凝血酶活性测定对蒲黄炒炭
前后化学组分的变化及谱效相关性进行探讨。
1 材料与仪器
1. 1 药品与试剂 香蒲新苷 ( 11573-200301 ) ，异
鼠李素-3-O-新橙皮糖苷 ( 11571-200604 ) ，槲皮素
( 10081-200907) ，异鼠李素 ( 110860-200406 ) ，山萘
酚( 110861-200808) ，均购自中国药品生物制品检定
所。柚皮素( 自制，纯度检查﹥ 98% ) 。蒲黄药材购
自安徽井泉集团中药饮片有限公司，批号为
20091102，经本校鉴定教研室吴启南教授鉴定为狭
叶香蒲 Typha angustifolia L. 。
凝血酶时间测定试剂盒 ( TT，批号 STG40302-
29) 、凝血酶原时间测定试剂盒( PT，批号 STG20101-
41) 、活化部分凝血活酶时间( APTT，批号 ST20201-
39) ，均为北京世帝科学仪器公司产品。乙腈( 色谱
纯，德国 Merck公司) ;甲酸( 色谱纯，德国 Merck 公
司) 。
1. 2 仪器 Waters Acquity ultra-performanceTM
liquid chromatography system，FA1140N 电子天平 ( d
= 0. 1 mg，上海精密科学仪器有限公司) ，BP211D
电子天平( d = 0. 01 mg，德国赛多利斯) ，血小板聚
集凝血因子分析仪( 北京世帝科学仪器公司) ，离心
机( 上海安亭科学仪器厂) 。
1. 3 动物 雄性家兔，体重 2 ～ 2. 5 kg，由南京江
宁县青龙山动物繁殖厂提供，许可证号: SCXK( 浙)
2007-0008。
2 方法
2. 1 蒲黄炒炭前后化学组分变化研究
2. 1. 1 样品处理: 取生品适量，按 2010 版中国药
典一部蒲黄炭炮制方法制备蒲黄炭饮片。实验前取
蒲黄、蒲黄炭细粉 1 g，精密称定并分别放于 10 mL
·1221·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 8 期 2012 年 8 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2012.08.016
容量瓶内，加入 10 mL 甲醇，超声处理 30 min，甲醇
补足重量，0. 45 μm 微孔滤膜过滤，得供试液，进样
前经 0. 22 μm微孔滤膜过滤。
2. 1. 2 UPLC-MASS 条件: 色谱条件: Acquity BEH
C18色谱柱( 2. 1 mm ×100 mm，1. 7 μm) ，柱温30 ℃ ;
流动相 A 相为 0. 1%甲酸-水，流动相 C 相为乙腈;
梯度洗脱; 流速: 0. 2 mL /min; DAD 扫描: 190 ～ 400
nm。进样量: 2 μL。
质谱条件:Ⅰ: 电喷雾离子源，负离子模式扫描;
干燥气温度: 350 ℃，离子源温度: 110 ℃。干燥气
流速( N2 ) : 400 L /h，毛细管电压: 3 kV，锥孔电压: 30
V，质量扫描范围: m/z100 ～ 1500。Ⅱ: 电喷雾离子
源，正离子模式扫描; 干燥气温度: 350 ℃，离子源温
度: 110 ℃。干燥气流速 ( N2 ) : 400 L /h，毛细管电
压: 3 kV，锥孔电压: 30 V，质量扫描范围: m/z100 ～
1500。根据图谱结果，选择负离子扫描图分析。数
据工作站: MassLynx v 4. 1。
2. 1. 3 蒲黄、蒲黄炭 UPLC-MASS 指纹图研究: 通
过 UPLC-MASS技术，对蒲黄炒炭前后的化学组分峰
进行研究。其色谱图和总离子流图见图 1和图 2。
图 1 蒲黄( A)、蒲黄炭( B) 254 nm下色谱对照图
图 2 蒲黄( A)、蒲黄炭( B)负离子模式下总离子流图
通过对照品、色谱、紫外和质谱的分析，对蒲黄、
蒲黄炭色谱峰进行定性分析，并通过损失率比较炒
炭前后色谱峰含量的相对变化( 见表 1) 。
损失率( % ) =
Ar生 － Ar炭
Ar生 + Ar炭
× 100%
由表 1 可以看出，蒲黄中主要黄酮苷为香蒲新
苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷，炒炭后含量下降明
显，而苷元含量相对较高，柚皮素甚至还有所增加，
炒炭后尚产生琥珀酸等组分。我们选择其中主要
的黄酮苷和苷元研究了不同凝血阶段的凝血酶
活性。
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表 1 蒲黄、蒲黄炭色谱峰统计表
tR-MW Ar生 Ar炭 损失率% 色谱峰鉴定
2. 81-118 15759 － 100. 00 琥珀酸
4. 79-138 8464 7765 4. 31 对羟基苯甲酸
6. 00-122 3932 － 100. 00 苯甲酸
6. 22-756 13960 100. 00 槲皮素-3-O-( 2G-α-L-鼠李糖基) -芸香糖苷
6. 71-610 9878 100. 00 槲皮素-3-O-新橙皮糖苷
6. 77-740 8797 588 87. 47 山奈酚-3-O-( 2G-α-L-鼠李糖基) -芸香糖苷
6. 86-770 64447 747 97. 71 香蒲新苷
7. 35-594 24566 377 96. 98 山奈酚-3-O-新橙皮糖苷
7. 50-624 88703 1484 96. 71 异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷
8. 05-624 7086 473 87. 49 水仙苷
8. 28-448 3420 237 87. 04 山奈酚-3-O-葡萄糖苷
8. 51-478 1334 698 31. 30 异鼠李素-3-O-葡萄糖苷
9. 90-274 730 100. 00 阿夫儿茶精
11. 77-302 531 507 2. 31 槲皮素
14. 01-272 343 511 － 19. 67 柚皮素
14. 49-286 1450 1181 10. 22 山萘酚
15. 04-316 5602 4814 7. 57 异鼠李素
2. 2 蒲黄黄酮类化合物对不同凝血阶段凝血酶活
性的研究
2. 2. 1 供试液制备:参照 2010 版中国药典一部附
录配置 pH =7. 6 的磷酸盐缓冲盐溶液( PBS) ，取适
量制成 5%二甲基亚砜( DMSO) 溶液。
分别精密称取香蒲新苷 2. 464 mg，异鼠李素-
3-O-新橙皮糖苷 1. 997 mg，槲皮素 0. 966 mg，柚皮
素 0. 870 mg，山萘酚 0. 915 mg，异鼠李素 1. 011 mg，
用含 5%DMSO，pH为 7. 4 的 PBS 缓冲液定容至 10
mL，分别配成 1 600 μM的供试品溶液。
2. 2. 2 家兔血浆的制备: 家兔正常喂养 7 d，颈动
脉插管取血放入事先装有枸橼酸钠溶液( 3. 8% ) 的
试管中，以 2 500 r /min离心 15 min，分离血浆备用。
分别取供试品药液 10 μL与血浆 50 μL在测试杯中
混匀，按试剂盒的要求及操作步骤测定各组血浆凝
血酶原时间( PT) 、活化部分凝血活酶时间( APTT) 、
凝血酶时间( TT ) 。将上述方法平行 3 次。采用
SPSS11. 5 统计软件进行检验，实验数据以 珋x ± s 表
示。方差齐时选择 t 检验结果，方差不齐时选择校
正 t检验结果，以此比较空白组与各给药组之间的
显著性差异。
2. 2. 3 不同凝血阶段凝血酶活性的测定:见表 2、
表 3。
表 2 蒲黄黄酮单体对家兔体外血浆凝血酶原时间( PT)、凝血活酶
时间( APTT)和凝血酶时间( TT)的影响(珔x ± s，n =10)
组别 剂量 / ( μmol /L) PT /s APTT /s TT /s
空白 － 8. 32 ± 0. 26 26. 56 ± 1. 66 22. 87 ± 0. 61
香蒲新苷 100 6. 88 ± 0. 15▲▲ 38. 80 ± 2. 06▲▲ 16. 05 ± 0. 42▲▲
异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷 100 7. 08 ± 0. 24▲▲ 33. 2 ± 3. 75▲▲ 15. 95 ± 0. 21▲▲
槲皮素 100 7. 02 ± 0. 19▲▲ 27. 78 ± 1. 23 15. 98 ± 0. 22▲▲
异鼠李素 100 7. 40 ± 0. 41▲▲ 27. 25 ± 2. 84 16. 70 ± 0. 88▲▲
山萘酚 100 7. 38 ± 0. 36▲▲ 34. 58 ± 1. 39▲▲ 16. 70 ± 0. 33▲▲
柚皮素 100 6. 75 ± 0. 26▲▲ 32. 10 ± 2. 60▲▲ 16. 02 ± 0. 15▲▲
注:与空白组比较，▲▲P ＜ 0. 01
表 3 蒲黄中各成分对 PT、APTT、TT的抑制率
组别 损失率 /% ( 量 Ar) PT抑制率 /% APTT抑制率 /% TT抑制率 /%
香蒲新苷 97. 71( 63700) 17. 31▲▲ － 46. 08▲▲ 29. 82▲▲
异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷 96. 71( 87219) 14. 90▲▲ － 25. 00▲▲ 30. 26▲▲
槲皮素 2. 31( 24) 15. 62▲▲ － 4. 59 30. 13▲▲
异鼠李素 7. 57( 788) 11. 06▲▲ － 2. 60 26. 98▲▲
山萘酚 10. 22( 269) 11. 30▲▲ － 30. 19▲▲ 26. 98▲▲
柚皮素 － 19. 67( － 168) 18. 87▲▲ － 20. 86▲▲ 29. 95▲▲
注:与空白组比较，▲▲P ＜ 0. 01
·3221·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 8 期 2012 年 8 月
3 讨论
3. 1 香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮糖苷是蒲黄
中含量最高的 2 个黄酮苷，苷元都是异鼠李素，在蒲
黄炒炭的过程中，黄酮苷含量减少而苷元减少不明
显，这可能是蒲黄炒炭前后药性改变的物质基础。
3. 2 不同凝血阶段凝血酶活性研究表明，以上 6
个黄酮化合物都可缩短血浆凝血原时间和家兔体外
血浆凝血酶时间，同时香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新
橙皮糖苷、山萘酚、柚皮素均能显著延长家兔体外血
浆凝血活酶时间，可抑制血液凝固，对 APTT 有明显
差异的是槲皮素和异鼠李素。在凝血酶原酶形成阶
段，黄酮苷、黄酮苷元均能显著缩短 PT，而在对
APTT影响方面，黄酮苷表现出抑制凝血作用，而其
主要苷元却没有显著性影响，这可能是蒲黄主要有
活血化瘀作用，而炒炭后止血作用增强的物质基础。
3. 3 在炒炭过程中一些极性较大的小分子组分如
琥珀酸、苯甲酸等变化也较显著，这是否是蒲黄中化
学成分在高温下的降解产物，对蒲黄的作用有何影
响还有待进一步的考察。
参 考 文 献
［1］ Shode FO，Mahomed AS，Rogers CB. Typhaphthalide and
typharin，two phenolic compounds from Typha capensis
［J］. Phytochemistry，2002，61( 8) ，955-957.
［2］王实强，张水寒，杨永华 . 长苞香蒲花粉( 蒲黄) 黄酮类
成分的研究［J］.湖南中医学院学报，1999，19( 1) : 5-7.
［3］ 张淑敏，曲桂武，解飞霞，等 . 蒲黄化学成分的研究
［J］.中草药，2008，39( 3) : 350-352.
［4］刘斌，陆韵如 . 高效液相色谱法测定蒲黄不同炮制品中
两种黄酮苷的含量［J］. 中国中药杂志，1998，23 ( 7 ) :
402.
大黄不同炮制品醇提物解热作用及机制的比对研究
李 燕1，2，闫美娟3，隋 峰1，林 娜1* ，刘亮亮1，肖永庆1，李 丽1，马超英4
( 1. 中国中医科学院中药研究所，北京 100700; 2. 重庆莱美药业股份有限公司，重庆 401123; 3. 武警陕西
总队医院，陕西 西安 7100542; 4. 西南交通大学生命科学与工程学院，四川 成都 610031)
摘要 目的:比较 4 种大黄炮制品醇提物的解热作用并探讨其解热机制。方法:采用皮下注射 20%鲜酵母混
悬液( 15 ml /kg) 造大鼠发热模型，1 h 后灌胃给药，分别于给药后 2、4、6 h 测肛温，用 ELISA 法测定大鼠下丘脑中
PGE2 和 cAMP含量。结果: 生大黄和酒大黄在给药后各时间点都可以显著抑制大鼠体温上升，熟大黄和大黄炭在
给药后 1、2、4 h显著抑制大鼠体温上升，但抑制作用弱于生大黄和酒大黄;大黄各炮制品在发挥解热作用的同时能
减少下丘脑组织中 PGE2 和 cAMP的产生。结论: 生大黄和酒大黄解热作用强于熟大黄和大黄炭，其解热机制可能
与减少下丘脑组织中 PGE2 和 cAMP的产生使中枢体温调定点下调而达解热效应。
关键词 大黄;炮制品;解热作用; PGE2; cAMP
中图分类号: R283. 1 文献标识码: A 文章编号: 1001-4454( 2012) 08-1224-04
收稿日期: 2011-12-27
基金项目:国家自然科学基金重点项目( No. 30730111) ;国家自然科学基金青年科学基金项目( No. 30902004)
* 通讯作者: 林娜，Tel: 010-64011692，E-mail: linna888@ 163. com。
大黄药用历史悠久，已作为一个世界性药物载
入 19 个国家的药典。2010 版中国药典〔1〕记载的大
黄炮制饮片有生大黄、酒大黄、熟大黄、大黄炭。大
黄性味苦，微寒，经不同的炮制方法和辅料处理，其
有效成分发生不同程度的变化，其苦寒药性逐渐减
弱，功效和临床作用也随之变化。本文通过酵母发
热模型大鼠来比较 4 种炮制品解热作用的差异，并
探讨其解热机制，为揭示炮制改变大黄药性的科学
内涵变化规律提供更多的依据。
1 材料与方法
1. 1 试验药物 掌叶大黄 Rheum palmatum L. 的
根及根茎，按照 2010 版中国药典规定的炮制方法制
备成生大黄、酒大黄、熟大黄及大黄炭饮片，饮片粗
粉以 75%乙醇 15 倍量渗漉提取，低温加压回收溶
剂，得到 4 种大黄炮制品醇提物 ( 临用前用温水配
制成所需浓度) 。药品由中国中医科学院中药研究
所肖永庆研究员鉴定。
1. 2 动物 健康 SD大鼠，雄性，体重 150 ～ 170 g，
由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提
供( 许可证号 SCXK( 军) -2007-004) 。
·4221· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 35 卷第 8 期 2012 年 8 月