全 文 ：第 25卷 第 3期 贵州大学学报(自然科学版) Vol.25 No.3
2008年 5月 JournalofGuizhouUniversity(NaturalSciences) May.2008
文章编号 1000-5269(2008)03-0320-02
蛇含委陵菜提取物抑菌作用的研究＊
黄易安 ,黄思菊 ,国兴明
(贵州大学生命科学学院 ,贵州 贵阳 550025)
摘 要:用石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯 、正丁醇对蛇含全草 95%乙醇提取物进行分段萃取 ,采用大肠
杆菌 、金黄色葡萄球菌 、绿脓杆菌 、枯草杆菌 、藤黄微球菌作为受试菌 ,测定各萃取部分的抑菌活
性 。结果表明 ,乙酸乙酯萃取物具有良好的抑菌活性 ,特别对金黄色葡萄球菌的抑制效果显著 ,
最小抑菌浓度(MIC)≤0.33mg/mL。
关键词:蛇含委陵菜;抑菌活性;萃取物
中图分类号:Q93-33 文献标识码:A
EfectofRestrainingBacteriumonPotentilaKleinianaWightetArn
HUANGYi-an, HUANGSi-ju, GUOXing-ming
(ColegeoflifeScience, GuizhouUniversity, Guiyang550025, China)
Abstract:Theextractof95% ethanolfromPotentilakleinianaWightetArn.hadbeenextractedby
petroleumether, chloroform, ethylacetateandn-butanolorderly.Theanti-bacterialactivityoftheex-
tractionswastestedbytheEscherichiacoli, staphylococcusaureus, Pseudomonasaeruginosa, Bacilus-
subtilisandMicrococcusluteus, andstudiedtheantibacterialactivityofeveryextractions.Theresults
showedthattheextractbyethylacetateisthemainactivecompound, whichhavestrongantibacterial
efectonstaphylococcusaureus.Theminimalinhibitoryconcentration(MIC)≤0.33mg/mL.
Keywords:PotentilakleinianaWightetArn;antibacterialactivity;extract
蛇含委陵菜(PotentilakleinianaWightetArn.)是蔷薇科(Rosaceae)委陵菜属(Potentila)植物 ,别名蛇
含 、蛇衔 、五匹风 、五爪风 、五叶蛇莓 。多年生草本 ,多生于田边 、山坡草地及潮湿处 。海拔 400-3000m。
分布于长江以南各省及辽宁 、陕西 、山东 、河南 [ 1] 。常以全草入药 ,具有清热解毒 ,袪风止咳之功效 。用于
治疗疟疾 ,咳嗽 ,喉痛 ,丹毒 ,癣疮 ,蛇虫咬伤[ 2] 。蛇含在民间广泛应用 ,但目前对该药的抑菌活性未见报
道 。本实验对蛇含提取物的抗菌活性进行了研究 , 以期为蛇含的进一步开发利用提供依据。
1 材料与方法
1.1 材料
植物材料:蛇含委陵菜购于贵阳市花溪区 ,经贵州大学生命科学学院熊源新教授鉴定为蔷薇科(Rosa-
ceae)委陵菜属(Potentila)蛇含委陵菜(PotentilakleinianaWightetArn.)。
菌种:大肠杆菌(Escherichiacoli.);金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus),绿脓杆菌(Pseudomonas
aeruginosa);枯草杆菌(Bacilusubtilis);藤黄微球菌(Micrococcusluteus)。以上菌种均由贵州大学生化营养
研究所提供 。
培养基:肉汤培养基(牛肉膏 3g,酵母浸膏 3g,蛋白胨 10g,氯化钠 5g,蒸馏水 1000mL, pH7.0 ～ 7.2),
固体培养基需加入 20g琼脂。
1.2 方法
1.2.1 供试样品的制备
取干燥蛇含全草 5.0kg粉碎 ,用 95%工业乙醇浸泡提取 3次 , 2d/次 。回收乙醇 ,提取浸膏溶于热水
中 ,依次用石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯 、正丁醇萃取 。分别减压回收溶剂 ,依次得到乙醇总提取物(ETA)及石
油醚萃取物(PE)、氯仿萃取物(CH)、乙酸乙酯萃取物(ETY)、正丁醇萃取物(BU)。
＊ 收稿日期:2007-12-25
作者简介:黄易安(1982-),女 ,硕士研究生,研究方向:生物活性物质的分离与纯化。
DOI :10.15958/j.cnki.gdxbzrb.2008.03.017
1.2.2 配制菌悬液
将受试菌在斜面培养基上活化 2代后 ,用接种环从斜面上轻刮菌苔一环 ,放置于盛液体牛肉膏培养基
的小三角瓶中 ,在 37℃下培养 24h,见有浑浊后 ,在无菌条件下 ,按十倍稀释法配成终浓度为 107个 ml-1的
菌悬液 ,备用 。
1.2.3 含菌平板的制备
用 200μL移液管吸取各菌悬液 20μL于培养基中 ,用无菌三角涂布棒涂布均匀 ,待干后倒置于 37℃
恒温培养箱中培养 ,然后观察培养结果。
1.2.4 滤纸圆片法测试
用打孔器将滤纸打成 6mm的圆片 ,滤纸经高压灭菌后 , 放在各部分萃取物溶液及空白对照的溶剂中
浸泡 30min, 适度挥干溶剂 , 用无菌镊子放在涂好菌液的培养基上 。每种菌平行做 3个样 ,培养结束后测
量培养基中抑菌圈的直径 ,取平均值为最终结果。
1.2.5 最低抑菌浓度(MIC)测定
将抑菌效果最好的萃取物用无菌水溶解 ,配成不同浓度的药液 ,每个培养皿中加入 15mL培养基和
1mL不同浓度的药液混匀 ,凝固后涂布菌液 ,每个浓度做三个平行样 ,完全没有菌生长的最低提取物浓度
为最低抑菌浓度(MIC)。
表 1 不同萃取物的抑菌活性
Tab.1 Antibacterialactivityofthedifferentextracts
供试菌 空白对照 抑菌圈直径 Diameterofinhibitionzone(mm)ETA PE CH ETY BU
大肠杆菌 Escherichiacoli - - - - 13 -
金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureus - - - 13 36 8
绿脓杆菌 Pseudomonasaeruginosa - - - - 16 -
藤黄微球菌 Micrococcusluteus - - - - 14 -
枯草杆菌 Bacilussubtilis - - - - 28 -
注:表中抑菌圈直径为 3次试验的平均值(mm);“ -”表示没有抑菌圈。
2 结果
蛇含乙醇总提取物及石油醚萃取物对本实验供试菌都无明显抑制作用;氯仿萃取物(CH)和正丁醇萃
取物(BU)仅对金黄色葡萄球菌有一定抑制作用 ,抑菌圈直径平均值分别为 13mm和 8mm;乙酸乙酯萃取
物(ETY)对受试菌均有抑制作用 ,其中对金黄色葡萄球菌抑制效果显著 ,抑菌圈直径达 36mm,其次为枯
草杆菌(28mm)>绿脓杆菌(16mm)>藤黄微球菌(14mm)>大肠杆菌(13mm)(见表 1)。
乙酸乙酯萃取物对大肠杆菌的 MIC≤3.33mg/mL, 金黄色葡萄球菌 MIC≤0.33mg/mL, 绿脓杆菌
MIC≤3.00mg/mL, 藤黄微球菌 MIC≤2.33mg/mL,枯草杆菌 MIC≤0.67mg/mL(见表 2)。
表 2 乙酸乙酯萃取物对供试菌的最低抑菌浓度
Tab.2 MICoftheextractbyethylacetateagainstsamplebacteria
供试菌 MIC(mg/mL)
大肠杆菌 Escherichiacoli 3.33
金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureus 0.33
绿脓杆菌 Pseudomonasaeruginosa 3.00
藤黄微球菌 Micrococcusluteus 2.33
枯草杆菌 Bacillussubtilis 0.67
3 讨论
蛇含委陵菜的乙醇提取物 ,石油醚 、氯仿 、正丁醇萃取物均无明显抑菌作用 。乙酸乙酯萃取物对本实
验受试菌都有抑菌活性 ,尤其对金黄色葡萄球菌有很强的抑菌活性 ,而氯仿 、正丁醇部分只对金黄色葡萄
球菌有较弱抑制作用 ,说明蛇含提取物能很好地抑制金黄色葡萄球菌的生长。至于乙醇总提取物没有的
活性 ,在乙酸乙酯萃取物中体现出来 ,也许与抑菌活性成分相对含量有关 ,抑菌活性成分主要分布于乙酸
乙酯相 ,萃取后提高了相对含量 ,因此抑菌活性明显地体现出来。
参考文献:
[ 1] 张勇 ,李鹏 ,李彩霞 ,等.委陵菜属药用植物 [ J].中兽医医药杂志 , 2005, 2:60-63.
[ 2] 张勇.国产委陵菜属药用植物 [ J] .张掖师专学报 , 1995, 12(1):77-80.
·321·第 3期 黄易安 等:蛇含委陵菜提取物抑菌作用的研究