全 文 ：JILIN AGRICULTURE 127
2011年第05期
（总第255期）
吉 林 农 业
JILIN AGRICULTURE
NO.05，2011
（CumulativetyNO.255）
两株芭蕉花内生菌纤维素降解能力的测定
孙 浩，缪福俊，李 彪
（西南林业大学，云南 昆明 650224）
摘要：研究从芭蕉花中分离到能提高玉米秸秆青贮饲料营养的两株酵母菌（SWFU 1003，SWFU 1021），并分别对它们降解纤维
素的能力进行了测定，结果表明：SWFU 1003的FPA和CMC酶活分别达到2.37U和16.77U；SWFU 1021的FPA和CMC酶活分别达到2.86U和
15.62U。结论：获得的两株酵母均有较高的纤维素降解能力。
关键词：芭蕉花；酵母；纤维素降解
中图分类号：X172 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-05-0127-2
基金项目：云南省教育厅科学研究基金（09j0069）
芭蕉花为芭蕉科植物芭蕉（Musa basjoo）的花蕾或花[1]。
植物内生菌是指在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植
物的组织和器官内部或细胞间隙的一类微生物，被感染的宿主植
物不表现出外在病症，可通过组织学方法或从严格表面消毒的植
物组织中分离。陈露[1,2]等报道了芭蕉花内生菌对纤维素的降解作
用。本研究以分离自云南产芭蕉花的内生菌为研究对象，对其纤
维素降解酶活力进行了研究。
1 材料与方法
1.1 实验进行地
西南林业大学西 南山地森林资源保育与利用省部共建教育部
重点实验室。 时间：2010年5月
1.2 芭蕉花内生菌的分离、纯化、保存
取新鲜芭蕉花，打孔器打片。分别用水冲洗干净，无菌台内
风干后，稀释涂布于加氨苄青霉素的PDA培养基中。待菌落成型
后，以划线法分纯。纯培养菌株于4℃保存待用。
1.3 降解纤维素菌株的筛选
菌株悬液接种装有Dubos 纤维素培养基的试管，30℃培养
至滤纸条上出现溃烂斑。自滤纸溃烂处挑取菌落于纤维糊精培养
基，划线分离，得单菌落。将单菌落点种刚果红纤维素培养基，
30℃培养48h，NH4Cl固定后，测量透明圈直径大小。
1.4 DNS试剂配制
称取200g酒石酸钾钠，溶于一定量水中，加热溶解，添加
10.0g 3,5-二硝基水杨酸、10.0g氢氧化钠，溶解后加入2g苯
酚、0.5g无水亚硫酸钠，全部加热溶解后，冷却至室温，定容至
1000mL。用前一周配制。
1.5 葡萄糖标准曲线绘制
准确称取100.0mg分析纯的无水葡萄糖(预先在105℃干燥至
衡重)，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100mL容量瓶中，再定
容到刻度，摇匀，浓度为1mg/mL。取9支试管，分别加入0、0.2、
0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6 ml葡萄糖标准溶液，加入
2.5mlDNS试剂混合均匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即用流
动水冷却到室温，定容到25ml，摇匀。于520nm波长处测定OD值。
1.6 降解菌的初筛
将筛选后的菌株以PDA培养基摇瓶培养，菌液在3500r/min下离
心15min，取上清液即为粗酶液。参照FPA的测定方法(山东大学微生
物研究所 1976)。取经适当稀释的粗酶液lmL，加入1mL pH 4.8醋酸
-醋酸钠缓冲液，摇匀后投入一张50mg滤纸，50℃保温30min，加入
2.5mLDNS试剂，沸水中煮沸5 min，冷却后定容到25mL，在520nm下
比色，测出OD值，查标准曲线后，求出溶液中的葡萄糖含量。
1.7 CMC 酶活测定
取适当稀释的酶液1ml，加入1ml含1% CMC的pH4.8醋酸- 醋酸
钠缓冲液，混匀，50℃恒温水浴30min，加入2.5ml DNS试剂，沸
水中煮沸5min，冷却后定容到25ml，在520nm下比色，测出OD值，
查l葡萄糖标准曲线后，求出溶液中的葡萄糖含量。
注：酶活力单位规定：以1ml酶液，在一定条件下（58℃ PH
4.8恒温1h）下，水解生成1μmol葡萄糖的酶量为1个国际单位
(IU，简写为U)(DM Stuart,1999)。
2 结论与分析
经分离得到菌落不同的菌株5株，经显微镜镜检为酵母未知
种。经Dubos 纤维素培养基初筛初步得到具有纤维素降解能力的
酵母两株。见（图1）。

图1 获得的两株具有纤维素降解能力的菌株
（左为SWFU1003 右为SWFU1021）
由图2可知，用于本试验的葡萄糖标准曲线线性关系良好，能
够保证测定结果的准确和真实。经过测定，并根据标准曲线求得
菌株SWFU 1003及SWFU 1021的酶活，如(表2)所示。从表2可以看
出，菌株SWFU 1021的FPA酶活及CMC酶活均大于菌株SWFU 1003的
酶活，分别达到3.94U和19.65U。
图2 葡萄糖标准曲线的制作
表2 菌株FPA和CMC酶活力测定结果

结论：本实验用滤纸筛选法筛选能降解纤维素的活性菌株，
（下转133页）
菌株 FPA酶活 CMC酶活
SWFU 1003 2.37U 16.77U
SWFU 1021 3.94U 19.65U
JILIN AGRICULTURE 133
组试验，每试验小区6米2，包括对照共18个小区。试验地pH值
8.5，地头有盐碱地指示植物羊草。药剂施入后播种玉米，秋季
测玉米棒产量。测产结果如表3。从表3看出，施入制剂比未施
入制剂产量高，而以施入量5.5升/亩的试验水平产量最高，提
高产量（7.43－6.45）÷6.45×100%=15.2%。通过表3产生表
4，表4证明各施量水平之间产量差异是明显的，F>F0.01说明不
同施用剂量之间产量差异极显著。实际上在试验区凭肉眼仔细目
测，就能看出每个区组内5.5升/亩的剂量水平的玉米结棒总体
比对照大，而且大小均一，但各水平及对照的秸秆高度无明显差
异，秸秆粗度有差异。
表4 不同KOM施用剂量的产量方差分析

表4证明各水平产量差异显著，那么为获得最高产量，根
据表3 不同制剂用量与对应的平均产量通过拟合回归曲线可求
得制剂最佳施用量。以表3中前4个制剂施用量水平2.7、5.5、
9.4、13.8为自变量，相对应的平均产量为因变量，近似于二次
曲线，得回归方程 =6.3969+0.2491x-0.0174x2。方程的回归系
数 ，临界值 ， 说明
回归关系明显，此方程可用。当导数 时有最高产量，则相对应的
最佳施入剂量x=7升/亩。即根据回归曲线推测制剂最佳施用量为7
升/亩（每公顷105升）。这个用量是近似曲线的推测值，在生产
上可以不必固守此数，掌握每亩6-7升左右的用量即可。
4 结论
使用KOM活化堆盐碱改良剂，通过实验证实了一次改良而效
果逐年增强的理论判断在实践上是正确的。但制剂施入1个月内
无明显效果，1个月后开始逐渐增效。有的土壤专家不懂，认为
盐碱地不能改良，实际该技术不是土壤学，是生态学，即土壤生
态。它是一个微生物群落的发生过程，改良效果不反弹，而且随
着时间的推移应该越来越好。通过对中度盐碱地试验证明，玉米
产量可以提高15%以上，最佳施用剂量6-7升/亩，那么轻度盐碱
地（7可增大施用量。
通过连续几年的试验研究和大规模土壤改良证实，改良效
果明显而且无可置疑，具备大规模推开的技术成熟性。但目前
存在的问题是，制剂的价格较高，40元/升。以这个价格购买，
再加施入药剂用工投入，以种玉米计算，通过提高产量获得投
入后的回收，资金回收期要达4-5年，这可能会打消农民的投资
激情。我们在双辽种羊场连续2年较大规模地开展了此项工作，
是在四平市农业综合开发办公室土地治理项目的资金支持下完成
的。吉林省作为农业大省，有150万公顷盐碱地，农业增产的开
发潜力很大，如果政府在短时间内全面发动治理，药剂用量很
大，价格可能会降低50%，农民就能够承受得起，就可以促成一
场大规模的农田基本建设，给农业以至林业、牧业带来长期的稳
产高产。
作者简介：赵国辉（1972-），男，吉林四平人，吉林省四
平市实验林场高级工程师，研究方向：造林、森林资源管理、林
粮复合经营等。
Youliang, Wang Daowen. Identification of a novel HMW
gulte-nin subunit and comparison of its amino acid
sequence with those of homologous subunits[J]. Chinese
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国北方冬麦区的分析[J].作物学报,2001,27(1):127-129.
作者简介：舒晓霞(1982-)，女，硕士研究生，成都农业科技
职业学院教师。
方差来源 自由度 离差平方和 均 方 均方比 Fα
组间 5－4=1 1.76 0.44
F= =27.5
组内 14－4=10 0.16 0.016
总的 5×3－1=14 1.92
0.4 F0.010.6 9.510
4
2
1 =⎟⎟⎠
⎞
⎜⎜⎝
⎛
=
=
f
f
0
（上接131页）
（上接127页）
该方法简单、直观、可行。菌株SWFU 1003及菌株SWFU 1021都
具有一定的纤维素降解能力，能够使纤维素转换为还原糖。SWFU
1021的降解能力略高。该菌株的纤维素降解能力与文献中报道的
其他具有纤维素降解能力的内生菌相当[3]。上述菌株均具有成为
纤维素降解菌的潜质。有望在饲料添加剂等领域得到应用。
参考文献
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其潜在应用价值[A].见:植物科学研究进展(第2版)[M].北京:高等
教育出版社,1999:1832-1901.
作者简介：孙浩（1982-），男，西南林业大学硕士研究生，
西南山地森林资源保育与利用省部共建教育部重点实验室，研究
方向：微生物学。
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