全 文 ：基金项目:安徽高校省级自然科学研究项目(KJ2012A188)
作者简介:张圣龙，男，硕士研究生 研究方向:中药质量分析 * 通讯作者:谢晓梅，女，教授，硕士生导师 研究方向:中药质量分析
Tel /Fax:(0551)65169230 E-mail:xiexiaomei9401@ sina. com
熊果酸和齐墩果酸在枇杷叶枇杷花中的分布及动态变化
张圣龙，谢晓梅* ，程菁菁，沈盼盼(安徽中医学院，现代中药安徽省重点实验室，合肥 230031)
摘要:目的 考察熊果酸( UA) 、齐墩果酸( OA) 在枇杷落叶、树叶和枇杷花中的分布，并探索其在枇杷叶中含量的动态变化规
律。方法 采用超高效液相色谱法( UPLC) 测定熊果酸和齐墩果酸含量，色谱柱为 Acquity BEH C18 ( 2. 1 mm × 100 mm，1. 7
μm) ;流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺( 体积比为 250∶ 50∶ 0. 10∶ 0. 05) ，流速: 0. 25 mL·min －1 ;检测波长 210 nm，柱温 25 ℃。
结果 熊果酸和齐墩果酸在枇杷叶中含量显著高于枇杷花;落叶中熊果酸和齐墩果酸的含量高于树叶;一年里每个月采摘的
枇杷叶中熊果酸和齐墩果酸的总含量变化范围在 0. 874% ～ 0. 988%。结论 熊果酸和齐墩果酸在枇杷花、枇杷树叶和落叶
中有不同的含量分布;不同采收时期枇杷叶中两个三萜酸总量随月份发生小幅波动，该波动主要来源熊果酸;研究结果支持
2010 年版《中国药典》对枇杷叶“全年均可采收”的规定;同时提示枇杷叶采收在自然落叶前后为佳。
关键词:枇杷叶;批杷花;熊果酸;齐墩果酸;超高效液相色谱法; 分布; 动态变化
doi: 10. 11669 /cpj. 2013. 06. 006 中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1001 － 2494(2013)06 － 0419 － 04
Distribution of Ursolic Acid and Oleanolic Acid in the Leaves and Flowers of Erobotrya japonica and Chan-
ges of Triterpene Acids Contents in the Leaves at Different Harvest Time
ZHANG Sheng-long，XIE Xiao-mei* ，CHENG Jing-jing，SHEN Pan-pan(Anhui College of Traditional Chinese Medicine
＆ Anhui Key Laboratory of Modern Chinese Materia Medica，Hefei 230031，China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To find out the distribution of ursolic acid and oleanolic acid in fresh leaves，fallen leaves and flowers of
Eriobotrya japonica Lindl，and to explore the variation in contents of the triterpene acids in the leaves at different harvest time. METH-
ODS Samples were collected in the campus once every month for 12 months. Determination of ursolic and oleanolic acid was carried
out by ultra-high performance liquid cromatography (UPLC)with an acquity BEH C18 column(2. 1 mm × 100 mm，1. 7 μm)using
methanol-water-glacial acetic acid-triethylamine(250∶ 50∶ 0. 10∶ 0. 05)as the mobile phase. The flow rate was 0. 25 mL·min －1 . The
detection wavelength was set at 210 nm. RESULTS The contents of ursolic and oleanolic acids in Erobotrya japonica leaves were sig-
nificantly higher compared with those in Erobotrya japonica flowers. The contents of the two triterpene acids in the fallen leaves were
higher than those in the fresh leaves. The annual curves of dynamic changes of the two triterpene acids contents in Erobotrya japonica
leaves showed that the total triterpene acids contents in the Erobotrya japonica leaves collected at the different time varied from 0. 874%
to 0. 988%. CONCLUSION The distribution of the contents of ursolic and oleanolic acid in the fresh leaves，fallen leaves and flowers
was different，and there was minor variation in the contents of the two triterpene acids in fresh Erobotrya japonica leaves collected at the dif-
ferent harvest time. This study therefore provides evidence that the Erobotrya japonica leaves included in Chinese Pharmacopoeia (2010 edi-
tion，Volume I)can be harvested all the year round. Furthermore，the results suggest that the optimal harvesting time of Erobotrya japonica
leaves should be between pre-defoliation period and defoliation period.
KEY WORDS:Erobotrya japonica leaves;Erobotrya japonica flowers;ursolic acid;oleanolic acid;UPLC;distribution;dynamic changes
枇杷［Eriobotrya japonica(Thunb. )Lindl.］为蔷
薇科枇杷属常绿乔木，秋萌冬花，春实夏熟;枇杷叶
是清肺止咳的常用中药，资源丰富，全年均可采
收［1］;枇杷花也是民间用于治疗各种咳嗽的良
药［2］。文献报道三萜酸是枇杷叶抗炎作用的主要
成分［3-4］;其中含量较高的是熊果酸(ursolic acid，
UA)［5-6］;《中国药典》将 UA 和齐墩果酸(oleanolic
acid，OA)作为枇杷叶质量评价和控制的指标成
分［1］。枇杷叶和枇杷花中三萜酸的分析测定有高
效液相色谱法［5-7］和毛细管电泳法［8］，尚未见超高
效液相色谱法(UPLC)测定枇杷叶中三萜酸的报
道。本实验建立 UPLC，以 UA 和 OA 含量为检测指
标，考察枇杷花、枇杷树叶和落叶中 UA 和 OA 的含
量分布，并研究这两种三萜酸在不同时期采收的枇
杷叶中动态变化趋势，旨在为三萜酸类相关研究和
枇杷叶质量控制提供实验资料和科学依据。
·914·
中国药学杂志 2013 年 3 月第 48 卷第 6 期 Chin Pharm J，2013 March，Vol. 48 No. 6
1 仪器与材料
1. 1 仪器
Waters Acquity UPLCTM(Waters 公司，包括:四
元溶剂泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，Em-
power2 化学工作站等) ;BP221D 电子天平(Sartorius
公司) ;KQ －250DB数控超声清洗器(江苏省昆山市
超声仪器有限公司)。
1. 2 药品与试剂
UA(110742-200516)、OA(110709-200505)对照
品(供含量测定用) (中国药品生物制品检定所) ;甲
醇为色谱纯;水为蒸馏水(屈臣氏公司) ;其他试剂
均为分析纯。
枇杷叶、枇杷花均采于安徽中医学院西区校
园内东西相距约 200 米的两处枇杷树(分别记为
Pe 和 Pw)。枇杷树经本院中药与资源教研室王
德群教授鉴定为 Eriobotrya japonica(Thunb. )
Lindl;在 2010 年每月 25 日采摘树叶;落叶收集
于 11 月 25 日(提前一天清扫树下地面) ;枇杷花
采于 12 月 25 日;新鲜样品即时 60 ℃干燥 48 h，
干燥处保存备用。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Acquity UPLC BEH C18色谱柱(2. 1 mm × 100
mm，1. 7 μm) ;甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(250 ∶ 50 ∶
0. 10∶ 0. 05)为流动相;流速:0. 25 mL·min －1;检测
波长:210 nm;柱温:25 ℃;进样量:0. 8 μL。
2. 2 对照品溶液制备
精密称取 UA对照品 7. 08 mg，OA 对照品 5. 40
mg、分别置 10 mL 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻
度，摇匀，即得 UA、OA 对照品储备液。分别精密移
取 UA、OA 对照品储备液适量，制成混合对照品溶
液:混合对照品溶液①每 1 mL分别含 UA 35. 4 μg、
OA 10. 8 μg;混合对照品溶液②每 1 mL 分别含 UA
141. 6 μg、OA 36. 0 μg。
2. 3 供试品溶液制备
取样品细粉约 0. 5 g，精密称定，置具塞锥形瓶
中，精密加甲醇 25 mL，称定重量，超声处理(功率
250 W，频率 40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用
甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液用 0. 22
μm微孔滤膜滤过，即得。
2. 4 线性关系考察
依序分别精密吸取①和②混合对照品溶液
0. 5、1. 0、1. 5 μL，在“2. 1”项下条件注入 UPLC 仪
器，以色谱峰面积(Y)为纵坐标，进样质量(X，μg)
为横坐标，绘制标准曲线，建立回归方程，UA 回归
方程为:Y = 2. 234 × 106 X － 887. 2，r = 1. 00;OA 回
归方程为:Y = 2. 303 × 106X － 935. 1，r = 1. 00;表明
UA 在 0. 017 7 ～ 0. 212 μg、OA 在 0. 005 40 ～
0. 054 0 μg内线性关系良好。
2. 5 精密度实验
取同一供试品溶液，连续进样 5 次，UA 峰面积
RSD为 0. 79%，OA峰面积 RSD为 1. 3%，表明仪器
精密度良好。
2. 6 重复性实验
取同一批枇杷叶样品 5 份，按“2. 3”项下方法
制备供试品溶液，按“2. 1”项下方法进样测定;UA
含量的 RSD 为 0. 69%，OA 含量的 RSD 为 2. 00%，
表明方法重复性良好。
2. 7 稳定性实验
取同一供试品溶液，分别于 0，2，4，8 h 进样测
定，UA 峰面积 RSD 为 1. 38%，OA 峰面积 RSD 为
1. 62%，表明供试品溶液在 8 h内稳定性良好。
2. 8 加样回收率实验
取同一批已知含量的枇杷叶样品 5 份，各约
0. 25 g，精密称定，准确加入一定量的 UA 和 OA 对
照品溶液，按“2. 3”项下方法制备供试品溶液并进
样测定，计算加样回收率，结果见表 1。
2. 9 样品含量测定
分别精密称取样品粉末各 2 份，按“2. 3”项下
方法制备供试品溶液，按“2. 1”项下色谱条件测定
UA、OA色谱峰面积，外标法计算含量，UPLC谱图见
图 1，含量测定结果见表 2，3。
2. 10 UA和 OA的含量分布及动态变化
UA、OA在校园两处枇杷树的枇杷花、枇杷树叶
及落叶中的含量分布见图 2，在枇杷树叶的 12 个月
动态变化见图 3。
表 1 熊果酸(UA)、齐墩果酸(OA)加样回收率实验结果
Tab. 1 Recoveries of ursolic acid and oleanolic acid
Analyte
Initial
amount /mg
m(added)
/mg
m(found)
/mg
Recovery
/%
Mean
value /%
RSD
/%
UA 1． 899 1． 800 3． 61 95． 2 95． 1 2． 4
1． 855 1． 800 3． 53 93． 2
1． 918 1． 800 3． 70 98． 8
1． 870 1． 800 3． 56 94． 0
1． 942 1． 800 3． 63 93． 9
OA 0． 365 0． 345 0． 678 90． 6 96． 6 4． 1
0． 372 0． 345 0． 711 98． 1
0． 368 0． 345 0． 696 95． 1
0． 366 0． 345 0． 706 98． 5
0． 380 0． 345 0． 728 100． 8
·024· Chin Pharm J，2013 March，Vol. 48 No. 6 中国药学杂志 2013 年 3 月第 48 卷第 6 期
图 1 对照品(A)和枇杷树叶(B)，枇杷落叶(C)，枇杷花
(D)的超高效液相色谱图
Fig. 1 UPLC-UV Chromatograms of a standard mixture of ur-
solic acid and oleanolic acid(A)，and a sample of the Erobotrya
japonica fresh leaves(B)，and a sample of the Erobotrya japoni-
ca fallen leaves(C)，and a sample of the Erobotrya japonica
flowers(D)
表 2 枇杷树叶、落叶和枇杷花中熊果酸和齐墩果酸含量 . n =2
Tab. 2 Contents of ursolic acid and oleanolic acid in E. ja-
ponica samples collected in the campus. n = 2
Sample
Pe Pw
Ursolic
acid /%
Oleanolic
acid /%
Total
content /%
Ursolic
acid /%
Oleanolic
acid /%
Total
content /%
Flowers 0. 491 0. 072 0. 562 0. 372 0. 060 0. 432
Leaves 0. 859 0. 160 1. 019 0. 778 0. 155 0. 933
Defoliation 0. 927 0. 188 1. 114 0. 861 0. 187 1. 048
3 讨 论
本实验建立的 UPLC测定枇杷叶、枇杷花中 UA
和 OA含量，保留时间分别为 8. 5 和 8. 9 min，两色
谱峰分离度 1. 52;采用同样流动相的 HPLC，在达到
相同分离度时 OA与 UA的保留时间分别为 28. 4 和
29. 8 min［9］。结果显示，所建方法在保证精密度和
表 3 不同采收时期枇杷树叶中熊果酸和齐墩果酸含量 .
n = 2
Tab. 3 Contents of ursolic acid and oleanolic acid in the Ero-
botrya japonica fresh leaves collected at different harvest
time. n = 2
Sample
Pe Pw
Ursolic
acid /%
Oleanolic
acid /%
Total
content /%
Ursolic
acid /%
Oleanolic
acid /%
Total
content /%
1 0. 800 0. 149 0. 950 0. 754 0. 145 0. 899
2 0. 790 0. 149 0. 939 0. 789 0. 160 0. 950
3 0. 811 0. 145 0. 956 0. 772 0. 158 0. 929
4 0. 767 0. 140 0. 907 0. 707 0. 133 0. 840
5 0. 837 0. 157 0. 993 0. 795 0. 163 0. 958
6 0. 818 0. 150 0. 967 0. 810 0. 148 0. 958
7 0. 753 0. 130 0. 883 0. 784 0. 150 0. 935
8 0. 835 0. 154 0. 990 0. 827 0. 159 0. 986
9 0. 853 0. 158 1. 011 0. 811 0. 151 0. 962
10 0. 788 0. 141 0. 929 0. 818 0. 157 0. 975
11 0. 859 0. 160 1. 019 0. 778 0. 155 0. 933
12 0. 843 0. 158 1. 001 0. 640 0. 117 0. 756
Average 0. 813 0. 149 0. 962 0. 774 0. 150 0. 923
SD 0. 034 0. 009 0. 043 0. 053 0. 013 0. 065
图 2 熊果酸、齐墩果酸在两处枇杷树(Pe，Pw)上枇杷花、枇
杷树叶及落叶中的含量分布
Fig. 2 Distribution of ursolic acid and oleanolic acid of Pe，Pw
in the flowers，fresh leaves and defoliation of Erobotrya japonica
准确度的前提下，比 HPLC有效提高了分析速度，并
显著节省有机溶剂的消耗量。
实验样品收集的枇杷树都有 10 年以上的树龄，
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中国药学杂志 2013 年 3 月第 48 卷第 6 期 Chin Pharm J，2013 March，Vol. 48 No. 6
图 3 熊果酸、齐墩果酸在 Pe，Pw树上枇杷叶中含量的动态
变化曲线
Fig. 3 The dynamic change curves of ursolic acid and oleanolic
acid contents in the fresh leaves at different harvest time of
Pe，Pw
枇杷树叶均为成熟叶，落叶在落下 24 h内被收集;
校园东边枇杷树日照时长略强于西边，两处生境
基本相同;样品均显示所测的三萜酸含量高低顺
序为落叶 ＞树叶 ＞花;UA 的含量变化大于 OA;总
含量的变化趋势与 UA 一致。图 1 显示，除了 UA
和 OA含量外，枇杷树叶、落叶和花在化学组成上
也有明显不同。结果提示，枇杷叶采收在自然落
叶前后为佳。
OA和 UA 为同分异构体，两者常常共生互存，
广泛存在于自然界多种植物中。枇杷叶中两者含量
动态变化见图 3:12 个月间 OA的含量变化甚小，波
动范围在 0. 138% ～ 0. 160%;UA 含量波动范围在
0. 737% ～ 0. 832%;总 量 随 月 份 的 小 幅 波 动
(0. 874% ～0. 988%)主要来源 UA的含量波动。但
总体来看，UA和 OA在枇杷叶中含量的动态变化幅
度均较小与文献［10］采用 HPLC 测定结果基本一
致;两批样品表现出相近的变化趋势。本实验结果
为 2010 年版《中国药典》对枇杷叶“全年均可采收”
的规定提供了科学依据。
本实验在制备枇杷叶供试品溶液时，曾采用活
性炭除叶绿素，经对比实验，发现活性炭对供试品溶
液中两种三萜酸有一定吸附性，使测量结果偏低。
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(收稿日期:2012-06-28
櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁
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《中国药学杂志》获 2011 年度中国精品科技期刊
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