全 文 ：0.05 ,0.50 ,5.00 mg·L - 1的 3 种质量浓度的样品 ,
按血样测定方法操作 ,一日内重复测定 6次 ,一周内
重复测定 6次 。结果莫西沙星的日内 RSD 分别为
4.44 %, 3.44%, 2.88%, 日 间 RSD 分 别 为
9.53%,7.48%,5.22%。
2.6　萃取回收率与方法回收率　用空白血清配制
莫西沙星为0.05 ,0.50 ,5.00 mg·L–1 3种质量浓度
的样品各 6份 ,按血样测定方法操作 ,莫西沙星峰面
积与对照品溶液直接进样之峰面积比值 ,作为萃取
回收率 ,而测得值与加入量之比值 ,作为方法回收
率。莫西沙星在 3种质量浓度下的萃取回收率分别
为 91.0%(RSD 6.8%), 96.6%(RSD 5.2%),
98.4%(RSD 4.0%);而方法回收率分别为 96.0%
(RSD 5.9%), 98.2%(RSD 4.3%), 101.0%(RSD
3.3%)。
2.7　样品测定　取口服莫西沙星 400 mg·d-1(给
药方案:每次 400 mg ,qd ,口服 3 d以上)患者血清 3
份 ,测得稳态血清谷浓度分别为 0.43 , 0.58 , 0.48
mg·L-1 。
3　讨论
测定血清中莫西沙星 ,一般均采用液液萃取
法[ 2-3] ,但该法较费时 ,烦琐 ,而我们采用 C18-SPE 固
相萃取法 ,同时可处理多个样品 ,使提取方法更为简
便 、省时 ,避免使用大量有机溶剂 ,而且可以更彻底
地除去被测物中的杂质干扰 ,避免提取过程中的乳
化现象[ 5] 。
本实验采用新型固相萃取柱 OASIS 柱 ,其填料
有很好的亲水-亲脂性 ,其萃取表面积高(800 m2·
g
-1),因此萃取效率较高;这种聚合物填料只有一种
反相保留机制 ,可以避免硅胶填料引起的二级保留
机制的发生 ,萃取的重复性较好[ 4] 。
参考文献:
[ 1] 　刘九雨 ,郭惠元.广谱高效的新喹诺酮类抗菌药莫西沙星[ J] .
国外医药(抗生素分册), 2002 , 23(6):274-278.
[ 2] 　Boubakar B.Ba , Renaud Et ien ne , Dominique Ducint , et al.
Determinat ion of m oxi flox acin in g row th media by high-per-
formance liquid chromatography[ J] .J.Chromatog r.B , 2001,
754:107-112.
[ 3] 　Karthick V , Mich ael GB , James T.S tew art.Determination of
moxif loxacin in human plasma by liquid chromatograph y elec-
t rospray ionizat ion tandem mass spect romet ry[ J] .J.Pharm.
Biom ed.Anal , 2002 , 30:961-968.
[ 4] 　Lemoine T , Breilh D , Ducint D , eta l.Determinat ion of moxi-
floxacin(BA Y 12-8039)in plasma and lung t is sue by high-per-
formance liquid ch romatography wi th u lt raviolet detection u-
sing a fully automated ext raction method w ith a new polymeric
cart ridge[ J] .J.Chromatogr .B , 2000 , 742:247-254.
[ 5] 　Snyder LR , Kirkland JJ , Glajch JL 著.张玉奎 ,王杰 ,张维冰
译.实用高效液相色谱法的建立[ M ] .北京:华文出版社 ,
2001:125-146.
[收稿日期] 2006-07-15
[ 作者简介] 莫可元 ,男 ,学士 ,副主任药师 ,电话:13607811056 , E-mail:ky mo@163.com
双氢杨梅树皮素抗肉瘤 S180的体外实验
莫可元1 , 2 , 郑作文2 , 阎莉2 , 陈英1 　(1.广西壮族自治区区人民医院 , 广西 南宁 530021;2.广西中医学院 , 广西 南宁
530001)
[ 摘要] 　目的:探讨双氢杨梅树皮素(APS)的抗肿瘤作用。方法:以 M TT 法观察 APS 及其含药血清对肉瘤 S180细胞的体外
抑制作用。结果:APS 及其含药血清均能明显抑制体外培养的 S180细胞的生长 , APS 的 IC50为9.22 mg·L-1 , 20%, 10%含药
血清的抑制率分别为39.47%, 26.88%。结论:APS 对体外培养的 S180细胞有明显的抑制作用。
[ 关键词] 　双氢杨梅树皮素;抗肿瘤作用;S180
[中图分类号] R965 　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2007)04-0483-03
The experimental study of ampelopsin on anti-sarcoma S180 effect
MO Ke-yuan1 , 2 , ZHENG Zuo-wen2 , YAN Li2 , CHEN Ying1(1.The Hospital o f Guangxi P rov ince , Guangxi Nan-
ning , 530021 , China;2.Guang Xi T raditional Chinese Medical Univer sity , Guangxi Nanning , 530001 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To investig ate the anti- tumo r effect of ampelopsin(APS)in vitro.METHODS　Cy to tox-itity effect
of APS and APS serum on mouse sarcoma S180 was determined by MT T assay in v itro.RESULTS　APS could obviously inhibit
the g row th o f cultured S180 cells , the IC50(48 hour s incubation)was 9.22 mg ·L -1 .APS se rum could also inhibit S180 cells , the
inhibition r ate s w ere r espectively 39.47% and 26.88% under the serum concent ration o f 20% and 10%.CONCLUSION　APS
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can inhibit the g row th of S180 in v itro.
KEY WORDS:ampelopsin;anti-tumo r;S180
　　藤茶为葡萄科葡萄属显齿蛇葡萄[ Ampelopsis
grossedentata (Hand-Mazz)W.T .Wang] 的茎叶 ,
主要分布于广西 、广东 、云南 、贵州 、湖南 、湖北 、江
西 、福建等省区 ,其性凉味甘 、淡 ,具有清热解毒 、
消肿止痛 、祛风湿 、强筋骨等功效 。主治皮肤癣
癞 、黄疸型肝炎 、感冒风热等[ 1] 。双氢杨梅树皮素
(ampelopsin , APS)是藤茶总黄酮中主要的单体化
合物[ 2] ,含量较高[ 3] 。本实验应用广西藤茶中提
取的 APS进行抗腹水型肉瘤 S180细胞研究 ,现报
道如下 。
1　材料
1.1　仪器　SUN RISE全自动酶标仪(奥地利 TE-
CAN 公司);311 二氧化碳培养箱(美国 Thermo
Fo rma 公司);DLF560 型超净工作台(荷兰 clear
Air Techniek bv 公司);倒置显微镜(德国 Leica
BM IRB公司)。
1.2　药品与试剂　APS 由广西中医学院中药化学
教研室从广西藤茶中提取而得;环磷酰胺(上海华联
制药有限公司 , 批号 010914);RPM I-1640 培养基
(GIBCO 公司);新生牛血清(NBS)(杭州四季青公
司);四甲基二氮唑蓝(MT T);二甲基亚砜(DM-
SO);注射用生理盐水 。
1.3　细胞系　肉瘤 S180瘤株由广西中医药研究所
惠赠 。
1.4　实验动物　健康昆明种小鼠 ,体质量(20±2)
g , ♀♂兼用 ,由广西中医学院实验动物中心提供 ,合
格证号:桂医动字第 1104号。
1.5　培养液的配制 　不完全培养液:不加血清的
RPM I1640 培养液。完全培养液:10%新生牛血清
+RPM I1640不完全培养液 。
2　方法
2.1　体外抑瘤实验　无菌抽取 8 d龄荷瘤小鼠腹
腔瘤细胞液 ,以不完全培养液洗 2次 ,用完全培养液
调整成 5×104个·mL-1的细胞悬液 ,培养备用 。将
S180细胞(1×105个·mL-1)接种到 96孔板 ,每孔 100
μL ,并设空白对照孔(只加 RPM I1640完全培养液 ,
不加细胞),置 37 ℃,5%二氧化碳培养箱中培养 24
h ,加入不同浓度 APS ,每个浓度设 5 个复孔 ,同时
设不加药物的细胞对照孔。培养 48 h 后 , 加入
MTT(5 g·L-1)10 μL 继续培养 4 h ,离心 ,弃上清
加入 DMSO 200μL ,振荡 ,以酶标仪在 570 nm 处测
吸收度(OD),计算抑制率 ,并用回归法计算半数抑
制浓度(IC50)。
肿瘤细胞生长抑制率%=(1-实验组平均 OD
值/对照组平均 OD值)×100%
2.2　体外含药血清抑瘤实验[ 4] 　取健康小鼠 12
只 ,分空白对照组 、APS 血清组 。APS 血清组给药
剂量为 600 mg·kg-1 ,空白对照组给纯化水 ,均灌胃
给药 ,bid ,连续 3 d。未次药后 1 h ,取血分离血清 ,
于 56 ℃、30 min灭活 ,用不完全培养液释稀 ,滤菌 ,
4 ℃保存备用。将 S180细胞(1×10 5个·mL-1)接种
到 96孔板 ,每孔 100 μL , 并设空白对照孔 , 置 37
℃、5%二氧化碳培养箱中培养 24 h , 加入含药血
清 ,每孔 100μL ,设 5个复孔 ,使含药血清终质量分
数分别为 20%,10%,并用相同质量分数的空白组
血清作对照。培养 48 h 后 ,加入 MT T(5 g·L-1)10
μL 继续培养 4 h ,离心 ,弃上清 , 加入 DMSO 200
μL ,振荡 ,以酶标仪在 570 nm 处测各孔 OD 值 ,计
算抑制率 。
抑制率%=(空白组血清平均 OD 值-血清组
平均 OD值)/空白组血清平均 OD值×100%。
3　结果
3.1　对体外培养的 S180细胞的抑制作用　结果如
表 1 所示 , 当 APS 终质量浓度为 50.00 , 35.70 ,
25.50 ,18.22 , 13.02 , 9.27 , 6.64 , 4.74 mg·L-1时 ,
抑制率与细胞对照组相比差异极显著(P<0.01),
提示其有强的体外抑制 S180细胞作用。通过抑制率
对药物浓度作直线回归方程 ,得到药物对 S180细胞
的半数抑制质量浓度(IC50)为9.22 mg·L-1 。
表 1　APS 对 S180细胞的体外抑菌作用( x±s , n=5)
Tab 1　I nhibito ry effec t o f APS on S180 ce lls in v itro( x±s , n
=5)
组别 药物质量浓度/m g·L -1 OD 值
抑制率
/ %
IC50
/mg·L -1
细胞对照组 - 1.05±0.07 - -
APS组
50.00 0.156±0.028a 85.05
35.70 0.195±0.017a 81.38
25.50 0.206±0.018a 80.31
18.22 0.28±0.05a 73.59
13.02 0.28±0.06a 73.23
9.27 0.40±0.05a 61.53
6.64 0.691±0.110a 33.92
4.74 0.84±0.08a 19.85
9.22
注:与细胞对照组比较 , aP<0.01
3.2　含药血清对体外培养的 S180细胞的抑制作用
　结果如表 2所示 ,质量分数为 20%, 10%APS 含
药血清的抑制率与空白组血清的抑制率相比 ,差异
有极显著性(P<0.01)。
·484· 中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 4期 Chin H osp Pharm J , 2007 Apr , Vol 27 , No.04
表 2　APS 含药血清对 S180细胞的抑制作用( x±s , n=6)
Tab 2　Inhibitory effect of APS se rum on S180 cells in v itro
( x±s , n=6)
项目 APS 含药血清 空白组血清 抑制率/ %
20%血清浓度OD 值 0.52±0.05 0.86±0.08 39.47
10%血清浓度OD 值 0.72±0.05 0.99±0.09 26.88
4　讨论
恶性肿瘤是人类主要死亡原因之一 ,其治疗难
度大 。从传统的中草药中筛选抗癌药物 ,是目前开
发新抗癌药物的方向之一 。细胞培养技术作为体外
实验的手段在药物的筛选中起到一定的作用 ,该技
术易于控制实验条件 ,与以往的体内实验方法相比 ,
具有简便可行 ,筛选量大 ,速度快的优点 ,可以为抗
肿瘤药物的筛选提供新的契机 。而采用中药血清药
理学的含药血清进行体外实验的方法 ,可以排除体
外实验中许多干扰因素的影响 ,比较接近药物在体
内环境中产生药理效应的真实过程 。黄酮类化合物
存在于多种中草药 ,其抗肿瘤作用是研究的一个热
点 ,研究证实许多黄酮类化合物有一定的抗癌作
用[ 5] 。本实验采用两种实验方法研究广西藤茶黄酮
类单体化合物 A PS 及其含药血清对体外 S180细胞
的抑制作用 ,结果表明 , APS 对体外 S180细胞有明显
抑制作用 ,表现出浓度依赖的趋势;而含药血清抑瘤
实验亦证实 A PS 含药血清同样对体外 S180细胞有
明显的抑制作用 ,其抑制率亦随浓度而增加。提示
APS 或其代谢产物有抗癌活性 ,其机制有待进一步
研究 。
参考文献:
[ 1] 　广西壮族自治区中医研究所.广西药用植物名录[ M ] .南宁:
广西人民出版社 ,1986:300.
[ 2] 　张友胜.宁正祥.胡闫勇.黄酮类化合物二氢杨梅皮素的研究利
用现状[ J] .中成药 , 2002 , 12(24):970-972.
[ 3] 　何桂霞 ,裴刚 ,周天达 ,等.显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨梅素
的含量测定[ J] .中国中药杂志 , 2000 , 25(7):423-425.
[ 4] 　李仪奎 ,吴健宇.血清药理实验中采血时间的通法方案[ J] .中
国药理学通报 , 1999 , 15(6):569-570.
[ 5] 　Weber G , Shen F , Prajda N , et a l.Regulation of the sigm al
t ran sduct ion program by drugs[ J] .Adv Enzym e Regul , 1997 ,
37 :35-55.
[收稿日期] 2006-07-15
[ 作者简介] 孙淑萍 ,女 ,硕士 ,讲师 ,电话:13396071103 , E-m ail:su nshu pingjyq@sohu.com
萘普生海藻酸钙凝胶微丸的制备及体外释药
孙淑萍1 , 2 ,李高1 ,沈灵佳2 ,刘红2 ,周利娟2 　(1.华中科技大学同济医学院药学院 , 湖北 武汉 430030;2.湖北省医药
工业研究院有限公司 ,湖北 武汉 430061)
[ 摘要] 　目的:制备萘普生海藻酸钙凝胶微丸 , 并建立其释放度测定方法。方法:采用均匀设计优化处方 , 用分光光度法测定
萘普生的含量 ,用体外溶出实验考察其释放效果。结果:在优化条件下制备的凝胶微丸外观好 , 载药量(62.2±1.8)%, 在模拟
胃液(SGF)中 2 h 释放率小于3.1%,在模拟肠液(SIF)中 45 min 释放达 95%以上。结论:在优化条件下可制备外观好 , 载药
量高的萘普生海藻酸钙凝胶微丸 ,体外溶出符合肠溶特征。
[ 关键词] 　均匀设计;萘普生;海藻酸钙;肠溶
[中图分类号] R944.9 , R971.1　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2007)04-0485-03
Preparation and in vitro release characterization of naproxen calcium alginate gel micro pills
SUN Shu-ping1 , 2 , LI Gao1 , SHEN Ling-jia2 , LIU Hong2 , ZHOU Li-juan2(1.Tong ji Pha rmaceutical Co llege ,
Huazhong Univer sity o f Science and Techno log y , Hubei Wuhan 430030 , China;2.Hubei Pha rmaceutical I ndust ry Resea rch
Institute Co., Ltd., Hubei Wuhan 430061 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To prepa re napro xen calcium alginate gel micro pills , and determine the r elease o f the drug.METH-
ODS　The formulation w as optimized by unifo rm design.The concentr ation of naproxen in the release medium w as assayed by
UV-VIS spectrophotome try.The dissolution behavior o f the pills was determined in vitro.RESULTS　The gel beads micro
pills prepared under the optimum condition w ere with a good appea rance , and the drug loading w as (62.2±1.8)%.The drug
relea sed from the gel mic ro pills w as less than 3.1% in SGF during 2 hours , and mo re than 95% in SIF during 45 minutes.
CONCLUSION　The gel micro pills have a good appear ance with high drug loading and the enteric release proper ty.
KEY WORDS:unifo rm design;napro xen;calcium algina te;ente ric release
·485·中国医院药学杂志 2007年第 27卷第 4期 Chin H osp Pharm J , 2007 Ap r , Vol 27 , No.04