全 文 ：花椒叶提取物抑菌效果的初步研究
龚晋文1， 胡变芳2， 闫林林2， 罗爱国1
（1.山西生物应用职业技术学院生物制药工程系， 山西 太原 030031；
2.晋中学院生物科学与技术学院， 山西 晋中 030600）
摘 要：采用滤纸片法研究了花椒叶提取物在不同条件下对 3 种常见菌（大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌）的抑菌
效果。结果表明：（1）不同浓度下花椒叶提取物对 3 种细菌都有明显的抑制作用，且提取物浓度越高抑菌效果越明显；（2）不同温度
下花椒叶提取物对 3 种细菌都有明显的抑制作用，但提取物的抑菌效果受温度影响较小；（3）花椒叶提取物在中性（pH=7.0）至偏
碱性（pH=7.0～10.0）条件下抑菌效果明显，而在酸性（pH=4.0、6.0）条件下几乎无效果；（4）花椒叶提取物对革兰氏阳性菌金黄色葡
萄球菌和枯草芽孢杆菌作用效果相对较好。 表明花椒叶提取物具有一定的抑菌作用。
关键词：花椒叶； 抑菌作用； 滤纸片法
中图分类号：Q946.8 文献标识码：A 文章编号：1004-874X（2011）24-0057-02
Comparative study on bacteriostasis of extracts from
Zanthoxylum bungeanum
GONG Jin-wen1， HU Bian-fang2, YAN Lin-lin2, LUO Ai-guo1
（1.Department of Biopharmaceutical Engineering, School of Shanxi biology Application Professional Technology,
Taiyuan 030031, China； 2.Department of Biology, Jinzhong University, Jinzhong 030600, China)
Abstract: The method of agar diffusion was used to investigate the bacteriostasis of extracts from the leaf of Zanthoxylum bungeanum
in different concentrations, temperature and pH. The results showed: （1） The different concentration extracts all had the antibacterial
effect, but the higher concentration, the more significant effect. （2）Temperature had little effect on bacteriostasis. （3）The significant
antibacterial effect showed that the level of pH=7.0～10.0.（4）The extracts had significant effect on Gram- positive bacteria (Staphylococcus
aureus and Bacillus subtilis).
Key words: Zanthoxylum bungeanum leaf; bacteriostasis; agar diffusion
花椒（Zanthoxylixm bungeanum）系芸香科花椒属，叶
为奇数羽状复叶或散落的小叶， 小叶片圆形或卵状长圆
形，较大，表面暗绿色或棕绿色，先端急尖，基部钝圆，边
缘具钝齿，对光透视，齿缝间有大而透明的油点，主脉微
凹，侧脉斜向上展，具叶轴者，叶轴腹面具狭小翼，背面有
小皮刺，气香，味微苦[1]。
花椒是重要的经济植物，在我国资源非常丰富，我国
也是花椒栽培、产量的第一大国 [2]。 花椒主要分布于我国
北部至西南，除新疆、东北和内蒙古少数地区外，其余各
省均有大量分布，尤其是长江以南诸省较多。 由于产地的
气候、雨量及土壤结构等诸多自然因素的影响，可能造成
其化学成分及含量的不同[3]。
我国很早就将花椒作为一种中药材来治疗疾病[4]。 近
年来随着传统中医药学的发展， 传统中草药的研究及开
发已越来越引起世界的关注，花椒作为其中的一员，国内
外报道也非常多，如其生物活性成分、临床医用、生理活
性研究、药理作用等，但前人大多都是对花椒籽粒、果皮
成分进行研究[5-7]，对花椒叶抑菌作用的研究报道还很少。
本文主要研究了花椒叶对 3种常见菌的抑制作用，以
期为花椒这一经济作物的全面利用提供理论依据，使花椒
叶能够变废为宝，同时也可为开发新的药用资源提供参考。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试花椒叶于 2009年 9 月在盂县采摘， 花椒品种为
秦椒，晾干备用。
供试菌种包括 G-：大肠杆菌（Escherichia coli）；G+：枯
草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（Staphyloc-
occus aureus），由山西大学生命科学学院微生物实验室提供。
试验仪器包括手提式压力蒸汽消毒器（北京市永光明
医疗仪器厂）、HZS-H 水浴振荡器（哈尔滨市东联电子技
术开发有限公司）、DHX-9143B 型（101-2B）电热恒温鼓风
干燥箱（上海福玛实验设备有限公司）、SHZ-D 循环水式
真空泵（河南巩义市英峪豫华仪器厂）、RE-52旋转式蒸发
器（上海安亭实验仪器有限公司）、HUANGPINGFA1004 电
子分析天平（上海精科天平）、电热套（北京科伟永兴仪器
有限公司）、三星数码相机（ES55）。
1.2 试验方法
1.2.1 花椒叶提取物的制备 称取 20 g 研磨后的干叶于
250 mL三角瓶中，加入 100 mL配制好的 75%乙醇溶液冷浸
提取 3次，时间各为 26 h，合并滤液移于 250 mL三角瓶中。
然后再将滤液转至烧瓶中，先常压蒸馏 6 h，再减压蒸馏 4 h，
浓缩，将浓缩后的提取物移置小三角瓶中，4℃保存备用。
1.2.2 培养基的配制 称取牛肉膏 5 g、蛋白胨 10 g、氯化
收稿日期：2011-10-19
基金项目：晋中学院质量工程植物学教学团队项目（Zl2010td02）
作者简介：龚晋文（1958-），男，高级经济师，主管中药师，E-mail:
hubianfang168@126.com
广东农业科学 2011 年第 24 期 57
DOI:10.16768/j.issn.1004-874x.2011.24.052
表 3 不同 pH下花椒叶提取物的抑菌效果
pH值
4.0
6.0
7.0
8.0
10.0
大肠杆菌
-
-
15.3±0.5
16.6±0.7
15.1±0.2
枯草芽孢杆菌
-
-
16.6±0.4
17.5±0.2
16.5±0.5
金黄色葡萄球菌
-
-
20.7±1.0
20.6±0.3
20.5±0.3
CK
0
0
0
0
0
抑菌圈直径（mm）
表 2 不同温度下花椒叶提取物的抑菌效果
温度
（℃）
15
20
25
大肠杆菌
15.4±0.5
16.2±0.3
15.2±0.2
枯草芽孢杆菌
16.5±0.3
17.3±0.2
15.7±0.5
金黄色葡萄球菌
20.5±0.7
20.8±0.4
19.5±0.4
CK
0
0
0
抑菌圈直径（mm）
钠 5 g、琼脂 15 g，制备 1 000 mL牛肉膏蛋白胨培养基，调
pH值至 7.0，4℃保存备用。
1.2.3 菌种的活化与培养 将 3 种供试菌种分别在各自
合适的培养基上和温度下于培养箱中活化（24 h），再挑选
单个菌落用划线法转接至数个灭菌后的斜面培养基上培
养（24 h），备用。
1.2.4 菌悬液的制备 将活化的供试菌种用无菌的生理
盐水稀释成含菌量大约为 9×109个/mL的菌悬液。
1.2.5 药敏片的制备 将花椒叶提取物分别用 5 mL 的
容量瓶定容， 配制成 25%、50%、75%的花椒叶提取物，然
后将滤纸片浸入不同浓度（25%、50%、75%、100%）的花椒
叶提取物中，使其充分吸收，散放于小平皿中（将滤纸片浸
入蒸馏液中作为对照）。
1.2.6 菌液涂布 用移液管将稀释后的菌液分别移至培养
皿中（0.5 mL/皿），再分别用玻璃涂布棒将菌液涂布均匀，将
培养皿于恒温箱中放置 1 h，待菌液稍稍吸收后取出备用。
1.2.7 抑菌试验 将制备好的药敏片放置于涂好菌液的培
养皿中（5片/皿）。将培养皿置于恒温箱中（37℃）培养 24 h，
观察抑菌圈的大小并测量。 用滤纸片（20 张/皿）测定在不
同浓度梯度、 不同温度和不同 pH 条件下花椒叶提取物的
抑菌效果。
试验数据采用 SPSS13.0软件进行方差分析。
2 结果与分析
2.1 不同浓度梯度下抑菌效果比较
由表 1可知，不同浓度下花椒叶提取物对 3 种供试菌
种都有明显的抑制作用，且提取物浓度越高抑菌效果越明
显。 此外，花椒叶提取物对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌
和枯草芽孢杆菌的作用效果相对较好。
2.2 不同温度下抑菌效果比较
由表 2可知，不同温度下花椒叶提取物对 3种供试菌
种都有明显的抑制作用，且 20℃条件下抑菌效果最明显。
但提取物的抑菌效果受温度影响较小。
2.3 不同 pH下抑菌效果比较
由表 3 可知，花椒叶提取物在中性（pH=7.0）至偏碱性
（pH=7.0～10.0）条件下抑菌效果明显，且在此范围内抑菌效果
差异不显著，而在酸性（pH=4.0、6.0）条件下几乎无抑菌效果。
3 结论与讨论
本研究结果表明， 花椒叶提取物对金黄色葡萄球菌、
枯草芽孢杆菌和大肠杆菌均有一定的抑菌效果，但抑制作
用强度不同，对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的抑菌效
果较好，这可能是由于革兰氏阳性菌与阴性菌所需的营养
条件有所不同。
同时，外界环境条件也对花椒叶提取物的抑菌效果产
生不同程度的影响。 浓度越高抑菌效果越明显，温度对它
们的抑菌效果影响不明显，在偏碱性环境中抑菌效果较好
等，这可能是由于不同菌种对生长因子和抑菌成分的敏感
程度不同。
本研究采用滤纸片法即滤纸片平板扩散法，是利用抗
菌物质在琼脂中扩散使其周围的细菌生长受到抑制而形
成抑菌圈，根据抑菌圈大小来判断细菌或真菌对抑菌物质
的敏感程度，得出抑菌物质的抑菌作用大小和抗菌谱的一
种方法。此方法简便、易操作，但因抑菌圈大小受多种因素
的影响，如培养基成分、pH值、琼脂来源和浓度、培养温度
和时间、药效、药液浓度等，即使控制条件一致，也会因不
同菌种生长到肉眼可见所需时间不同、不同物质扩散系数
不同，导致结果受到影响，一般只用于定性或初步判断其
作用强弱 [8]。 因此该研究仅为初探性试验，更为精确的研
究还需进一步进行。
参考文献：
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kaloids with antiplatelet aggregation activity from Zanthoxylum
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1997,45(7):1419-1422.
[8] 毕慧敏.三种含笑叶片提取物的抑菌作用研究 [D].南京 :南京林
业大学,2008.
表 1 不同浓度花椒叶提取物的抑菌效果
处理
25%
50%
75%
100%
大肠杆菌
12.5±0.5
12.7±0.5
12.8±0.6
15.5±0.6
枯草芽孢杆菌
10.8±0.5
12.9±1.3
14.8±1.1
16.7±0.5
金黄色葡萄球菌
13.8±0.7
15.5±0.8
18.0±1.0
20.3±0.7
抑菌圈直径（mm）
CK
0
0
0
0
58