全 文 ：• 1935 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2012年7月第27卷第7期 CJTCMP , July 2012, Vol . 27, No. 7
序贯法研究广西不同产地对叶百部总生物碱对
小鼠的止咳作用
王孝勋，黄茂春，赵旭，夏星，黄骞春
（广西中医药大学，南宁 530001）
摘要：目的：采用序贯法研究广西不同产地对叶百部总生物碱止咳作用，为对叶百部品质评价以及临床用药
提供理论依据。方法：采用序贯法先进行预实验确定止咳有效剂量，再取10个广西不同产地对叶百部总生物碱
作用于不同组别的小鼠，求得各组的EDT50，依次定量判断其止咳活性。结果：不同组别的小鼠EDT50均较空白
组有所延长，广西不同产地对叶百部总生物碱均能延长氨水引咳时间（R值>100%），6.9g生药/kg为止咳有效
剂量，平均R值为138.8%。结论：广西各产地对叶百部总生物碱均具有止咳作用，而恭城、凤山、靖西产地效
果较好。
关键词：对叶百部；总生物碱；止咳作用；不同产地；序贯法
基金资助：广西自然科学基金创新研究团队项目（No.2011GXNSFF018006），广西教育厅面上科研项目
（No.200911MS130），广西研究生教育创新计划项目（No.20100106001008M08）
Sequential method study on the antitussive effect of the total alkaloids of Stemona
tuberosa L. from different production areas in Guangxi
WANG Xiao-xun, HUAG Mao-chun, ZHAO Xu, XIA Xing, HUAGN Qian-chun
( Guangxi Traditional Chinese Medical University, Nanning 530001, China )
Abstract: Objective: This study adopted the sequential method to study the cough relieving effect of the total alkaloids
of Stemona tuberosa L.from different production areas in Guangxi, to provid theoretical basis for the quality evaluation and
clinical medication for Stemona tuberosa L.. Methods: Adopting the sequential method, the effective dosage for relieving cough
was determined by preliminary experiment. EDT50 of the mice was figured out after giving mice the total alkaloids from 10
different production areas of Stemona tuberosa L.. Results: The results indicated that total alkaloids of Stemona tuberosa L. from
different production areas could prolong the time after which ammonia water-induced cough occurred (R>100%); R was 138.82%
in average. Conclusion: The total alkaloids of Stemona tuberosa L. from different production areas had the efficacy of relieving
cough, but there was significant difference especially in the Gongcheng, Fengshan, Jingxin areas.
Key words: Stemona tuberosa L.; Total alkaloids; Antitussive effect; Different production areas; Sequential method
Fund assistance: Innovat ive Research Team Project of Guangxi Natural Science Foundat ion
(No.2011GXNSFF018006), General Scientific Research Program of Guangxi Education Department (No.200911MS130),
Innovation Project of Guangxi Graduate Education (No.20100106001008M08)
·研究报告·
通讯作者：夏星，广西南宁市明秀东路179号广西中医药大学21号信箱，邮编：530001，电话：0771-3137585，传真：0771-3140360
E-mail：xiaxing@gxtcmu.edu.cn
百部为百部科植物直立百部[Stemona sessilifolia（Miq.）
Miq.]、蔓生百部[Stemona japonica（Bl.）Miq.]或对叶百部
（Stemona tuberosa Lour.）的干燥块根，具有润肺下气止咳、杀
虫灭虱功效，主要用于新久咳嗽、肺痨咳嗽、百日咳；外用于头
虱、体虱、蛲虫病、阴痒[1]。已有学者通过柠檬酸喷雾刺激豚鼠
致咳模型证实，生物碱是百部止咳活性的主要成分，但不同种
百部甚至不同产地对叶百部种内都表现出不同程度的止咳活
性[2-3]。广西为百部主产地之一[4]，仅产大百部（即对叶百部）[5]，
但广西不同产地对叶百部药材的质量差异一直未能得到充分
的研究，故本研究在氨水引咳方法的基础上，采用序贯法考察
广西不同产地对叶百部总生物碱的止咳作用，为对叶百部品质
评价以及临床用药提供理论依据。
材料与方法
1. 动物 普通级昆明种小鼠，雌雄各半，体质量18-22g，由
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广西中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：桂医动字
11004号，批号：20110420。
2. 仪器 SB3200T超声波清洗仪（上海必能信超声有限公
司）、BP211D型电子分析天平（德国Sartorius公司）、Millipore
Simplicity-185超纯水仪（美国Millipore公司）、HH-S2数显恒温
水浴锅（江苏金坛市医疗仪器厂）、RE-52AA旋转蒸发器（上海
亚荣生化仪器厂）。
3. 试剂与药材 水为超纯水、其他试剂均为分析纯；可待
因片（青海制药厂有限公司，30mg/片，批号：20100518）。对叶
百部样品采自广西的东兴、上思、大新、天等、靖西、隆林、凤
山、天峨、平乐、恭城10个不同产地，均经广西中医药大学药
学院药用植物教研室韦松基教授鉴定为百部科植物对叶百部
Stemona tuberosa Lour.的块根。药材处理：洗净→沸水烫15－
20min→切片→晒干→打粉→过40目筛。
4. 方法
4.1 总生物碱的制备 参照文献提取方法[6-8]，取10个不同
产地对叶百部药材粉末各约40g，精密称定，分别加甲醇400mL
超声提取40min，2次，过滤，合并滤液，减压回收溶剂，残渣加
入4%盐酸200mL溶解，抽滤，滤液加氨水调pH至9－10，用氯仿
萃取2次，160mL/次，合并萃取液，水洗2次，取氯仿层，减压回
收溶剂，残渣加甲醇溶解，转至蒸发皿置水浴蒸干，即得各产
地对叶百部总生物碱，采用酸性染料比色法测得上述各样品总
生物碱的含量范围为6.56－20.93mg/g。
4.2 止咳作用预实验 ①给药剂量的选择：按照成人用量
15g生药·d-1·70kg-1，参照文献[9]按相对体表面积折算得小鼠
的等效剂量为2.3g生药/kg，以此剂量为预实验的起始剂量。
②样品及动物分组：取广西天峨对叶百部总生物碱，按与生
药量的比例取样，供预实验使用。取小鼠60只，雌雄各半，分
为6组，每组10只，分别为空白对照组（0.9%氯化钠溶液）、阳
性对照组（可待因30mg/kg），总生物碱组（2.3g生药/kg，4.6g
生药/kg、6.9g生药/kg、9.2g生药/kg、18.4g生药/kg）。给药容量
0.2mL/10g。实验前动物禁食不禁水12h，氨水引咳实验前1h灌
胃给予相应药物。根据预实验结果确定止咳有效剂量。
4.3 止咳作用正式实验 ①给药剂量的选择：预实验结果
确定总生物碱给药剂量相当于6.9g生药/kg为止咳有效剂量，因
此，正式实验中广西不同产地对叶百部总生物碱的给药剂量定
为相当于6.9g生药/kg。②样品及动物分组：取10个不同产地对
叶百部总生物碱，按相当于6.9g生药/kg体质量的剂量给药。取
小鼠120只，雌雄各半，分为12组，每组10只，分别为空白对照组
（0.9%氯化钠溶液）、阳性对照组（可待因30mg/kg）、10个不同
产地对叶百部总生物碱（6.9g生药/kg）。给药容量0.2mL/10g。
实验前动物禁食不禁水12h，氨水引咳实验前1h灌胃给予相应
药物。
4.4 氨水引咳实验 打开玻璃钟罩电源开关，开动真空泵，
压力表调节至180mmHg（23.99Pka），预喷雾5s后放入动物，
继续喷雾使小鼠接受恒压氨水喷雾刺激至预定的时间，刺激
停止后，立即取出小鼠，观察1min内出现3次以上典型咳嗽动
作（嘴张大或有咳嗽声）者，为“有咳嗽”，否则算“无咳嗽”。
改变每只小鼠的喷雾时间，以20s为起始时间，在该时间段上
下连续递增或递减。序贯喷雾时间序列为10.4s、12.0s、14.1s、
16.7s、20.0s、24.2s、29.7s、36.8s、46.4s（喷雾时间的对数比为
0.94:1）。实验时，当前一只小鼠出现咳嗽反应，则后1只就用低
一级的时间给予氨水刺激，相反，若未出现咳嗽，则下一次就
用高一级的时间给予氨水刺激[10]。凡出现咳嗽的以“+”表示，
不出现咳嗽的以“-”表示。用序贯法求出引起小鼠咳嗽的半数
有效喷雾时间（50% effective dose time，EDT50）。计算R值，若R
值大于130%，说明药物有止咳作用。若R值大于150%，则表明
有显著止咳作用。R值计算公式如下[11]：㒭㥃㒘 EDT50
R  h100%ぎⱑᇍ✻㒘EDT50
式中EDT50=log
-1c/n（c为rX值的总和，n为动物数，r为每剂
量组的动物数，X为剂量的对数）
结果
1. 预实验结果 见表1。广西天峨对叶百部总生物碱的不
同剂量组的小鼠EDT50分布在空白对照组EDT50上下，通过计算
R值后发现相当于6.9g生药的总生物碱/kg以上的给药剂量的R
值约等于或大于130%，按照前述标准有止咳作用；相当于18.4g
生药的总生物碱/kg的给药剂量的R值为134.9%，止咳效果接近
30mg/kg的可待因。
表1 不同剂量对叶百部总生物碱对氨水引咳时间比较（n=10）
组别
空白对照组
阳性对照组
总生物碱组
剂量（g/kg）
-
0.03
2.3
4.6
6.9
9.2
18.4
平均值
17.65
24.83
15.39
17.65
22.89
23.00
24.83
95%置信区间
[16.27，19.04]
[23.22，26.44]
[14.05，16.73]
[16.35，18.96]
[21.58，24.20]
[21.47，24.54]
[23.22，26.44]
R值（%）
-
140.7
87.2
100.0
129.7
130.3
134.9
EDT50（s）
当总生物碱给药剂量升到相当于6.9g生药/kg后，再增加给
药剂量，药效上升并不显著，故结合药效、总生物碱提取工艺
和节约用药量考虑，定为相当于6.9g生药/kg为止咳有效剂量。
2. 正式实验结果 见表2。当总生物碱给药剂量为相当
于6.9g生药/kg时，通过计算R值后发现广西不同产地对叶百
部总生物碱均能延长氨水引咳时间（R值>100%），平均R值为
138.8%。其中：恭城、凤山、靖西对叶百部总生物碱的R值均大
于阳性对照组可待因，显示有显著止咳作用；天峨、大新对叶百
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表2 广西不同产地对叶百部总生物碱对氨水引咳时间的影响
（n=10）
组别
空白对照组
阳性对照组
东兴组
上思组
大新组
天等组
靖西组
隆林组
凤山组
天峨组
平乐组
恭城组
剂量（g/kg）
-
0.03
6.9
6.9
6.9
6.9
6.9
6.9
6.9
6.9
6.9
6.9
平均值
16.07
23.48
17.65
16.47
20.63
21.25
25.77
22.89
26.94
19.69
21.25
30.56
95%置信区间
[14.30，17.84]
[21.69，25.26]
[16.35，18.96]
[15.08，17.85]
[19.06，22.19]
[19.67，22.84]
[24.77，26.77]
[21.58，24.20]
[25.19，28.69]
[18.30，21.08]
[19.67，22.84]
[28.99，32.12]
R值（%）
-
146.1
109.8
102.5
128.4
132.2
160.4
142.4
167.6
122.5
132.2
190.2
EDT50（s）
部总生物碱止咳作用接近有效；上思、东兴对叶百部总生物碱
止咳作用不明显。
People’s Republic of China (Vol I).Beijing:China Medical
Science and Technology Press,2010:123-124
[2] Chung H S,Hon P M,Lin G.Antitussive Activity of Stemona
Alkaloids from Stemona tuberosa.Planta Med,2003,69:914-920
[3] Xu Y T.Antitussive alkaloids of Stemona tuberosa.Hong Kong:The
Chinese University of Hong Kong,2006:87-93
[4] 万德光.中药品种品质与药效.上海:上海科学技术出版社,
2007:16
WAN De-guang.Variety,Quality and Efficacy of Traditional
Chinese Medicine.Shanghai:Shanghai Science and Technology
Publishers,2007:16
[5] 广西中药资源普查办公室.广西中药资源名录.南宁:广西民
族出版社,1983:287
Resource Census Office of Guangxi Traditional Chinese Medicine.
Resource List of Traditional Chinese Medicine in Guangxi.
Nanning:Guangxi Nationalities Press,1983:287
[6] Jiang R W,Hon P M,Zhou Y,et al.Alkaloids and Chemical Diversity
of Stemona tuberosa.Journal of Natural Products,2006,69(5):749-
754
[7] Yan Zhou,Ren-Wang Jiang,Po-Ming Hon,et al.Analyses of Stemona
alkaloids in Stemona tuberosa by liquid chromatography/tandem
mass spectrometry.Rapid Commun.Mass Spectrom,2006(20):
1030-1038
[8] Li Song-Lin,Jiang Ren-wang,Hon Po-ming,et al.Quality evaluation
of Radix Stemonae through simultaneous quantification of bioactive
alkaloids by high-performance liquid chromatography coupled
with diode array and evaporative light scattering detectors.Biomed.
Chromatogr,2007(21):1088-1094
[9] 徐淑云,卞如濂,陈修.药理实验方法学.3版.北京:人民卫生出
版社,2001:1861
XU Shu-yun,BIAN Ru-lian,CHEN Xiu.Methodology of
Pharmacological Experiment (3rd edition).Beijing: People’s
Medical Publishing House,2001:1861
[10] 刘宾,江南.序贯法研究甘草酸二铵对小鼠止咳作用.中国医
院药学杂志,2009,29(10):820-822
LIU Bin,JIANG Nan.Sequential study on the antitussive effect of
diammonium glycyrrhizinate on mice.Chinese Journal of Hospital
Pharmacy,2009,29(10):820-822
[11] 陈奇.中药药理实验方法.北京:人民卫生出版社,1994:138
CHEN Qi.Experimental Methods of Pharmacology of Traditional
Chinese Medicine.Beijing:People’s Medical Publishing House,
1994:138
[12] 于立芬.数理学统计方法.上海:上海科学技术出版社,1984:
156-157
YU Li-fen.Statistical Methods of Mathematics and Physics.
Shanghai:Shanghai Science and Technology Publishers,
1984:156-157
（收稿日期：2011年7月12日）
讨论
咳嗽多由呼吸道黏膜受刺激引起，本实验用氨水刺激小
鼠，为广西不同产地对叶百部总生物碱止咳作用进行初步筛
选。序贯试验也称上下法，序贯试验是统计学中的一类方法，
其特点是试验→分析→试验，即试验一次或一批后随即分析数
据，由分析的结果决定下一次或一批的试验如何进行，再试验
后再分析，如此依次试验→分析→试验的进程序贯而行[12]，采
用序贯法可以用较少的试验对大量样本的药理活性进行高效
率的筛选[10]。
本实验在传统氨水引咳方法的基础上，采用序贯试验方法
研究广西不同产地对叶百部总生物碱的止咳作用，为对叶百部
药材的质量评价和临床用药提供实验依据。结果显示：均能
延长氨水引咳时间（R值>100%），这与传统中医药认为百部
有止咳作用相一致；各组总生物碱的止咳作用差异明显，其中
恭城、凤山、靖西对叶百部总生物碱均有显著止咳作用，上述
3个产地的对叶百部总生物碱止咳作用R值均高于30mg/kg的
可待因，说明产地不同药材质量不同。等量提取广西不同产地
对叶百部药材所得总生物碱，其止咳药效差异明显，应该是种
内总生物碱含量差异、所含成分种类及其含量差异所导致，
这与文献报道[2-3，6]结果相一致，其确切原因有待进一步深入研
究。
参 考 文 献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).北京:中国医药
科技出版社,2010:123-124
State Pharmacopoeia Commission.Pharmacopoeia of the