全 文 ：北方园艺２０１４（１６）：８１～８５ 植物·园林花卉·
第一作者简介：马诗钰（１９８９－），女，硕士研究生，研究方向为林木
遗传育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｅｌｉｓｈｅｒｙ１９８９＠１６３．ｃｏｍ．
责任作者：周兰英（１９６０－），女，教授，博士生导师，现主要从事林木
遗传育种及园林植物与观赏园艺教学与科研工作。Ｅ－ｍａｉｌ：
９４９４６０３５９＠ｑｑ．ｃｏｍ．
收稿日期：２０１４－０３－１３
贴梗海棠花粉生活力与贮藏性研究
马 诗 钰１，周 兰 英１，蒲 光 兰１，赖 腾 跃１，蔡 利 娟１，王 　 波１，２
（１．四川农业大学 林学院，四川 雅安６２５０１４；２．四川工程职业技术学院 建筑工程系，四川 德阳６１８０００）
　　摘　要：以贴梗海棠初开花朵为试材，研究了次甲基蓝、ＴＴＣ、Ｉ２－ＫＩ、а?萘酚－联苯胺４种染色
剂测定花粉生活力的效果，３种贮藏条件下（－２０、４、２５℃）花粉生活力的变化规律及离体培养时
蔗糖、硼酸、温度对花粉萌发的影响和最佳培养基组合。结果表明：不同染色剂测定的花粉生活
力差异显著，次甲基蓝（８４．９４％）最适合贴梗海棠花粉染色，Ｉ２－ＫＩ（４４．６２％）不适合该种花粉染色。
贮藏温度对花粉生活力影响显著，温度越低，贮藏时间越长，各贮藏条件下，花粉活力降到５０％以
下的时间分别为３ｄ（２５℃）、１０ｄ（４℃）、７ｄ（－２０℃），４℃贮藏条件最佳。在一定范围内，蔗糖、硼
酸和温度能促进花粉萌发，超过范围后抑制萌发，且高浓度硼酸对萌发的抑制作用比低浓度硼酸
强，单因素试验下最佳蔗糖、硼酸浓度和温度分别为１０％、０．０３％、２０℃，正交实验花粉萌发的最
佳组合为８％（蔗糖）＋０．０３％（硼酸）＋２０℃（温度）。
关键词：贴梗海棠；花粉；生活力；贮藏；萌发
中图分类号：Ｓ　６６１．４　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１４）１６－００８１－０５
　　贴梗海棠（Ｃｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ　ｓｐｅｃｉｏｓａ（Ｓｗｅｅｔ）Ｎａｋａｉ）属蔷
薇科（Ｒｏｓａｃｅａｅ）木瓜属（Ｃｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ）落叶灌木，果实也
称作皱皮木瓜，具有极高的药用价值［１］，同时也是优良
的观花观果树种。以往对其研究多集中在组织培养、植
株繁殖栽培、中药化学成分、品种分类等方面［１－４］，花粉
相关研究有郑林等［５］对花粉形态的描述，董美芳等［６］
对花粉超低温保存１周后不同的解冻方式与萌发率的
关系研究，但其试验中应用的是水培条件，且花粉来自
盛开２ｄ的花朵，而花粉活力受开花程度影响显著［７］。
　　　　
目前尚鲜见初开花朵贮藏和染色法及固体培养基法测
定生活力的报道。
花粉是植物的生殖单位，对其贮藏有利于解决授粉
时空和地域障碍问题［８］，为基础领域研究，如低温休眠、
萌发、种质资源保存等提供试材［９］。花粉生活力测定可
以了解花粉的可育性，提高杂交、人工授粉效率，目前关
于各种植物花粉贮藏条件和萌发基质有大量报道［１０－１３］。
现以贴梗海棠初开花朵的花粉为试材，采用次甲基蓝、
а?萘酚－联苯胺、ＴＴＣ、Ｉ２－ＫＩ　４种染色剂测定花粉活力，以
期找出适合贴梗海棠花粉生活力测定的有效试剂；在
－２０℃（冷冻）、４℃（冷藏）、２５℃（常温）条件下贮藏，定期
用选出的最优染色法测定花粉活力以期得出花粉有效
贮藏时间，为解决不同种亲本间杂交花期不遇的问题提
供数据支撑；固体培养基法测定花粉萌发率，以获得花
粉萌发的最适培养基浓度组合，为贴梗海棠杂交育种
　　　　
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｎ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｃｏｎｄｕｃｔｅｄ　ｏｎ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ　ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ　ｏｎ　ｔｒｕｃｋｓ，ｄｅａｄ
ｗｏｏｄｓ　ａｎｄ　ｌｉｔｔｅｒｓ　ｉｎ　Ｙｕｓｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐａｒｋ　ｏｆ　Ｇｕｉｚｈｏｕ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ
ａｍｏｎｇ　ｔｒｅｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｄｅｂｒｉｓ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ　ａｎｄ　ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ
５６ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ　ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ　ｂｅｌｏｎｇｉｎｇ　ｔｏ　２６ｆａｍｉｌｉｅｓ　ａｎｄ　３５ｇｅｎｅｒａ　ｗｅｒｅ　ｒｅｃｏｒｄｅｄ，ｗｉｔｈ　Ｈｙｐｎａｃｅａｅ，Ｌｅｐｉｄｏｚｉａｃｅａｅ，
Ｍｅｔｚｇｅｒｉａｃｅａｅ　ａｎｄ　Ｂｒａｃｈｙｔｈｅｃｉａｃｅａｅ　ｐｒｅｄｏｍｉｎａｔｉｎｇ．Ｈｏｓｔ　ｔｒｕｎｋｓ　ｈａｄ　ｔｈｅ　ｌａｒｇｅｓｔ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｓｐｅｃｉｅｓ（４０ｓｐｅｃｉｅｓ）ａｍｏｎｇ
ｔｈｒｅｅ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅ　ｔｙｐｅｓ．Ｓｈａｎｎｏｎ－Ｗｉｅｎｅｒ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ　ｏｆ　ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ　ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ　ｏｒｄｅｒ　ｗａｓ　ｔｒｕｃｋｓ＞ｄｅａｄ　ｗｏｏｄｓ＞
ｌｉｔｔｅｒｓ，ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ　ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｗｉｄｅｌｙ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　Ｂｒｏｔｈｅｒｅｌａ　ｈｅｎｏｎｉ，Ｔａｘｉｐｈｙｌｕｍ
ｓｕｂａｒｃｕａｔｕｍａｎｄ　Ｄｉｔｒｉｃｈｕｍ　ｐａｌｉｄｕｍ．Ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　ｌｉｆｅ－ｆｏｒｍ　ｗａｓ　ｗｅｆｔｓ　ｔａｋｉｎｇ　ｕｐ　４４．６４％ ｏｆ　ａｌ　ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ
ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｈａｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　ｃｌａｒｉｆｙｉｎｇ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｐａｔｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ
ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ　ａｎｄ　ｉｎｄｉｃａｔｉｖｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｖｅｇｅｔａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌ　ｍｏｎｔａｎｅ　ｆｏｒｅｓｔ　ｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｅｐｉｐｈｙｔｉｃ　ｂｒｙｏｐｈｙｔｅｓ；ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ｔｒｕｎｋ；ｄｅａｄ　ｗｏｏｄ；Ｙｕｓｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｒｅｓｔ　Ｐａｒｋ
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·园林花卉·植物 北方园艺２０１４（１６）：８１～８５
的顺利开展提供条件。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试贴梗海棠花粉采自四川农业大学植物园，为保
证花朵为初开，于采集前１ｄ先标记好即将开放花朵的
位置，采集当天时间为上午１０：００，将花朵迅速带回实验
室，取下花药，混匀后装在４个干燥的花粉瓶中，用棉花
塞住瓶口分别放在２５、４、－２０℃中备用。
１．２　试验方法
１．２．１　快速测定染色剂的筛选　用镊子和解剖针将花
药划开，花粉均匀洒在洁净的载玻片上，分别滴０．５％
ＴＴＣ、０．０２５％次甲基蓝、а?萘酚－联苯胺、Ｉ２－ＫＩ　４种染色
剂，待充分反应后，盖上盖玻片，每种染色法重复３张片，
每张片选取３个分散均匀的视野，每个视野花粉数不少
于１００粒，记录并统计结果。
１．２．２　不同贮藏条件对花粉生活力的影响　取分别放
在２５、４、－２０℃下的花粉，选用а?萘酚－联苯胺染色，最初
每２４ｈ测定１次，１周后每３～５ｄ测１次，直到花粉完
全失去生活力，方法和操作如１．２．１。
１．２．３　花粉萌发单因素试验筛选　蔗糖对萌发率的影
响：１ｇ琼脂＋１００ｍＬ蒸馏水，ｐＨ　５．８，２０℃，蔗糖浓度分
别为０、５％、１０％、１５％、２０％；硼酸对萌发率的影响：１ｇ琼
脂＋１００ｍＬ蒸馏水＋蔗糖１０ｇ，ｐＨ　５．８，２０℃，Ｈ３ＢＯ３浓
度分别为０、０．０１％、０．０３％、０．０５％、０．０７％；温度对萌发
率的影响：１ｇ琼脂＋１００ｍＬ蒸馏水＋蔗糖１０ｇ，ｐＨ
５．８，温度分别为５、１５、２０、２５、３０℃。
１．２．４　花粉萌发正交实验　单因素试验选出各组分浓度
后，采用Ｌ９（３３）正交实验设计选出三者最佳组合浓度。
１．２．５　花粉萌发试验操作方法　将配置好的培养基趁
热用玻璃棒薄薄的涂一层在盖玻片上，凝固后将花粉轻
轻粘在培养基上，盖玻片盖在双凹孔上（孔中滴２滴蒸
馏水保湿），有培养基的一面朝向凹孔，每处理３次重复。
观察时选取同１张盖玻片上均匀分散的３个不同视野，
每视野花粉数不少于１００粒，以花粉管长度超过花粉
粒直径的１／２作为萌发标准，用Ｎｉｋｏｎ５５ｉ显微镜每２４ｈ
镜检，用ＡＩ　Ｃｙｔｏｖｉｓｉｏｎ软件对花粉萌发情况照相并保
存。萌发率＝（萌发花粉粒数／花粉粒总数）×１００％。
１．３　数据分析
试验数据采用Ｅｘｃｅｌ和ＳＰＳＳ　１７．０进行分析处理。
２　结果与分析
２．１　不同试剂测定生活力的比较
染色法是快速测定花粉生活力且比较有效的方法，
不同的染色试剂对花粉的染色效果不同。从表１可以
看出，次甲基蓝和а?萘酚－联苯胺染色效果较好，二者差
异不显著，但均与ＴＴＣ和Ｉ２－ＫＩ染色法差异极显著，测
出的生活力均高于８０％，与新采集花粉的生活力接近
（８９．０２％）。ＴＴＣ染色法显著优于Ｉ２－ＫＩ染色法，生活力
达７７．００％，Ｉ２－ＫＩ染色法测定结果最低，生活力低于
５０％，由此可见，Ｉ２－ＫＩ染色法不适合用于贴梗海棠花粉
快速测定，最佳选用试剂为次甲基蓝和а?萘酚－联苯胺。
　　表１ 不同染色剂测定花粉生活力结果
　　Ｔａｂｌｅ　１ Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｗｈｉｃｈ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｌｏｒｉｎｇ　ａｇｅｎｔｓ
试剂
Ｒｅａｇｅｎｔ
生活力
Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ／％
５％显著水平
５％Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｌｅｖｅｌ
１％显著水平
１％Ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｌｅｖｅｌ
次甲基蓝 Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ　ｂｌｕｅ　 ８４．９４ ａ Ａ
а?萘酚－联苯胺а?ｎａｐｈｔｈｏｌ－ｂｅｎｚｉｄｉｎｅ　 ８３．８１ ａ Ａ
ＴＴＣ　 ７７．００ ｂ Ｂ
Ｉ２－ＫＩ　 ４４．６２ ｃ Ｃ
　　注：表中大小写字母分别表示Ｐ＝０．０１和Ｐ＝０．０５显著差异水平。下同。
Ｎｏｔｅ：Ｃａｐｉｔａｌ　ａｎｄ　ｌｏｗｅｒｃａｓｅ　ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔａｂｌｅ　ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ　Ｐ＝０．０１ａｎｄ　Ｐ＝０．０５ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｌｅｖｅｌ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
２．２　贮藏温度对花粉生活力的影响
从图１不同贮藏条件下花粉生活力的变化趋势可
以看出，贴梗海棠新鲜花粉生活力达８９．０２％，在３种不
同温度下的保存时间差异显著。２５℃条件下保存时间
最短，生活力下降速度最快，３ｄ后花粉活力降到５０％以
下，７ｄ后降为０％。在贮藏初期，即１～１０ｄ之间，４℃贮
藏下的花粉生活力下降速度比－２０℃的缓慢，分别降到
５６．０７％、４９．７９％。之后－２０℃下花粉生活力降速减缓，
而４℃下的花粉生活力迅速降低，１５ｄ时间内由４６．３８％
降为０％。因此，远程杂交的花粉保存无需在冷冻条件
进行，可采用冷藏温度保存，降低设备需求，并尽可能在
采粉后１周完成。
图１　不同贮藏条件下贴梗海棠花粉生活力
随时间的变化趋势
Ｆｉｇ．１　Ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｔｅｎｄｅｎｃｙ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｕｎｄｅｒ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ
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北方园艺２０１４（１６）：８１～８５ 植物·园林花卉·
２．３　单因素试验结果
２．３．１　蔗糖对萌发率的影响　蔗糖在花粉萌发过程中
除了为花粉提供碳源外，还能起到调节渗透压的作用。
由表２可知，当蔗糖浓度为０％时，花粉也能萌发，只是
萌发率偏低，仅为６．４６％。蔗糖浓度为１０％时的萌发率
最高，达到１４．９３％，与其余４个浓度下的萌发率差异显
著。当浓度为５％、１５％、２０％时，萌发率均低于１０％，三
者差异不显著，但均高于对照（６．４６％），分别为８．３１％、
９．７３％、７．４２％，说明贴梗海棠花粉对蔗糖浓度敏感，仅
适宜浓度蔗糖才能促进萌发率显著增加。花粉萌发过
程见图２。
２．３．２　硼酸对萌发率的影响　硼参与花粉管膜果胶物
质的合成，一般情况下，花粉中硼酸含量较低，需要由柱
头和花柱内的硼酸进行补偿，其次糖与硼酸形成糖－硼复
合体，促进植物对糖的吸收和代谢［１４］。贴梗海棠花粉萌
发对硼酸浓度较为敏感，从表２可以看出，当硼酸浓度
为０．０３％时，花粉萌发率最高，达到１７．８９％，极显著高
于其余４个浓度。０％和０．０１％２个低浓度条件下的萌
发率虽然较低，分别为１３．４０％、１３．６７％，但均极显著高
于０．０５％（１０．２５％）和０．０７％（８．３９％）条件下的萌发率，
表明高浓度硼酸对花粉萌发的抑制程度较低浓度下大，
因此适宜的硼酸浓度对贴梗海棠花粉萌发尤为重要。
图２　花粉管萌发过程
注：ａ．刚接种到培养基上的花粉；ｂ．萌发孔张开；ｃ，ｄ．花粉管开始长出；ｅ．花粉管完全伸长；ｆ．花粉管顶端破裂。
Ｆｉｇ．２　Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｐｉｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ　ｔｕｂｅ
Ｎｏｔｅ：ａ．Ｔｈｅ　ｐｏｌｅｎ　ｔｈａｔ　ｊｕｓｔ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ　ｏｎ　ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ｍｅｄｉｕｍ；ｂ．Ｇｅｒｍｉｎａｌ　ａｐｅｒｔｕｒｅ　ｏｐｅｎ；ｃ，ｄ．Ｐｏｌｅｎ　ｔｕｂｅ　ｓｔａｒｔ　ｔｏ　ｂｅ　ｇｒｏｗｎ；ｅ．Ｐｏｌｅｎ　ｔｕｂｅ　ｅｘｔｅｎｅｄ
ｔｏｔａｌｙ；ｆ．Ｔｈｅ　ｔｏｐ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ　ｔｕｂｅ　ｂｒｅａｋ　ｕｐ．
　　表２ 单因素试验各组分浓度下花粉离体萌发率
　　Ｔａｂｌｅ　２ Ｔｈｅ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒｓ
蔗糖浓度
Ｓｕｃｒｏｓｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／％
萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
硼酸浓度
Ｂｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／％
萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
温度
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ／℃
萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
１０　 １４．９３ａＡ　 ０．０３　 １７．８９ａＡ　 ２０　 １２．４７ａＡ
１５　 ９．７３ｂＢ　 ０．０１　 １３．６７ｂＢ　 １５　 １１．３２ａｂＡＢ
５　 ８．３１ｂｃＢＣ　 ０　 １３．４ｂＢ　 ２５　 １０．７６ｂＡＢ
２０　 ７．４２ｃｄＢＣ　 ０．０５　 １０．２５ｃＣ　 ３０　 １０．４４ｂＢ
０　 ６．４６ｄＣ　 ０．０７　 ８．３９ｄＤ　 ５　 ４．９４ｃＣ
２．３．３　温度对萌发率的影响　温度影响体内酶活性，一
定范围内，随着温度升高花粉萌发数可能减少，但可促
进花粉管的生长速度。由表２可知，当温度在１５～３０℃
之间时，萌发率均在１０％以上，２０℃时，萌发率最大，为
１２．４７％，与 １５℃ （１１．３２％）差 异 不 显 著，与 ２５℃
（１０．７６％）在０．０５水平上差异显著，与３０℃（１０．４４％）差
异极显著。１５、２５、３０℃之间差异均不显著。当温度为
５℃时，萌发率极显著低于其它４个温度，仅为４．９４％，
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·园林花卉·植物 北方园艺２０１４（１６）：８１～８５
说明低温花粉活力受影响较大，不利于其生长繁殖。
２．４　蔗糖、硼酸、温度三因素正交实验结果
从表３可以看出，９个组合平均萌发率为１１．１１％，
其中高于平均值的组合有２、４、５，萌发率最高的为组合２
（８％蔗糖＋０．０３％硼酸＋２０℃），萌发率为均值的２倍，
达到２２．２３％，极显著高于其它组合，组合４、５萌发率分
别为１３．００％、１３．８２％，极显著高于其它６个组合。萌发
率最低是组合９（１２％蔗糖＋０．０５％硼酸＋２０℃），萌发
率仅为５．５２％。蔗糖浓度为８％、１０％、１２％时，平均萌
发率分别为１４．０５％、１１．１９％、８．０９％，其中８％、１０％条
件下的萌发率较总体均值高，浓度为１２％的平均萌发率
低于总体平均值。当硼酸浓度分别为０．０１％、０．０３％、
０．０５％时，平均萌发率分别为１０．６４％、１４．９６％、７．７２％，
仅在硼酸浓度为０．０３％时的平均萌发率高于总体平均
值（１１．１１％），说明硼酸浓度过高与过低对萌发的影响较
大，与单因素情况一致。当温度分别为１５、２０、２５℃时，
平均萌发率分别为８．１９％、１３．５８％、１１．５５％，２０℃仍然
是萌发率最高的温度。
　　表３ 花粉萌发Ｌ９（３３）正交实验结果
　　Ｔａｂｌｅ　３ Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ａｂｏｕｔ　ｐｏｌｅｎ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
序号
Ｎｕｍｂｅｒ
蔗糖浓度
Ｓｕｃｒｏｓｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／％
硼酸浓度
Ｂｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／％
温度
Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ／℃
花粉萌发率
Ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ／％
１　 ８　 ０．０１　 １５　 ９．００ＣＤｄ
２　 ８　 ０．０３　 ２０　 ２２．２３Ａａ
３　 ８　 ０．０５　 ２５　 １０．９１Ｃｃ
４　 １０　 ０．０１　 ２０　 １３．００Ｂｂ
５　 １０　 ０．０３　 ２５　 １３．８２Ｂｂ
６　 １０　 ０．０５　 １５　 ６．７４Ｅｅ
７　 １２　 ０．０１　 ２５　 ９．９３ＣＤｃｄ
８　 １２　 ０．０３　 １５　 ８．８２Ｄｄ
９　 １２　 ０．０５　 ２０　 ５．５２Ｆｆ
均值ＡＶＧ　 １１．１１
３　讨论
花粉生活力的测定方法较多，其中染色法是一种相
对简单快捷的方法。不同植物花粉内含物不同，适用的
染色剂也不同，如该试验中Ｉ２－ＫＩ测定效果最差，不适用
于贴梗海棠花粉生活力的快速测定，这与管雨等［１５］对木
瓜（Ｃｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ）研究结果相似，可能是因为花粉
中淀粉含量较低所致，而李刚等［１６］认为Ｉ２－ＫＩ能准确测
定芍药（Ｐａｅｏｎｉａ　ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ　Ｐａｌ）花粉的生活力。甲基蓝
和а?萘酚－联苯胺染色效果均较好，二者无显著差异，均
可用于贴梗海棠花粉生活力的快速测定。染色法虽使
用方便，受花粉自身条件（花粉壁厚度、组成物特性、花
粉内酶活性等）影响较大［１５］，在一定程度上与主观判断
染色程度相关，可结合离体萌发以达到更准确的判断。
花粉生活力的强弱受遗传因素和环境因素影响。
贮藏过程中温度越低，花粉保存时间越长，但在贮藏初
期（１０ｄ），－２０℃花粉活力比４℃下降低速度更快，这可
能是在贮藏初期冷冻温度对花粉细胞伤害较大，短时间
内出现－２０℃的花粉生活力比４℃降低较快的现象，一
段时间后，短期休眠现象逐渐解除［１７］，温度越低，呼吸作
用越弱，可溶性糖类、有机酸的消耗减少［１８］，使得－２０℃
花粉生活力逐渐高于４℃。花粉在２５℃保存条件下仅
３ｄ生活力就降到５０％以下，４℃及－２０℃也仅能保存
１０、７ｄ，表明贴梗海棠花粉具有不耐贮藏性，这与杜仲
（Ｅｕｃｏｍｍｉａ　ｕｌｍｏｉｄｅｓ　Ｏｌｉｖ）花粉贮藏６个月后生活力仍
可达５２．４％不同［１９］。因此，贴梗海棠的授粉及杂交等工
作应尽可能在采粉后冷藏条件下１周内完成。
不同植物及同一植物不同品种花粉离体培养时所
需培养基组分、浓度差异及萌发率均差异较大，如程伟
等［２０］研究表明，西南桦（Ｂｅｔｕｌａ　ａｌｎｏｉｄｅｓ　Ｂｕｃｈ．－Ｈａｍ．
ｅｘＤ．Ｄｏｎ）花粉离体培养最佳培养基为１５％蔗糖＋２００
ｍｇ／ｋｇ硼酸＋３０℃，此时萌发率为３０．３％，该试验中萌
发率最高的浓度组合为蔗糖８％＋硼酸０．０３％＋温度
２０℃，萌发率为２２．２３％，高于任一单因素结果，但远远
低于染色法测定的花粉活力，与此相反，贾文庆等［２１］研
究发现，离体萌发表现良好的紫薇（Ｌａｇｅｒｓｔｒｏｅｍｉａ　ｉｎｄｉ－
ｃａ）花粉在染色反应里表现并不好，这可能是因为离体条
件虽然能提供模拟环境，但无法提供花粉在自然生长情
况下植株体内提供的所有营养物质，因此不能完全符合
贴梗海棠自然生长发育条件。董美芳等［６］对皱皮木瓜
花粉采用水培法，并在培养基中增加ＣａＣｌ２一项，获得最
适浓度为温度２０℃＋蔗糖１５０ｇ／Ｌ＋硼酸２０ｍｇ／Ｌ＋
ＣａＣｌ２５０ｍｇ／Ｌ，萌发率为３５．４％，造成此差异的原因也
可能是试验材料品种不同，其取材为皱皮木瓜，该试验
中为贴梗海棠。据张茜等［３］对木瓜分类表明，目前木瓜
属分类较混乱，皱皮木瓜与贴梗海棠均属于皱皮木瓜种
下的不同品种，如李玉萍等［２２］对２０个风信子（Ｈｙａ－
ｃｉｎｔｈｕｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）品种萌发特性研究表萌发率高的品种
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北方园艺２０１４（１６）：８１～８５ 植物·园林花卉·
可达８４．６７％，而低的仅为１０．７１％。在后续研究中，可
以扩大选材范围，比较不同种源地贴梗海棠花粉生活力
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Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｐｏｌｅｎ　Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　Ｓｔｏｒａｇｅ　Ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｏｆ
Ｃｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ　ｓｐｅｃｉｏｓａ
ＭＡ　Ｓｈｉ－ｙｕ１，ＺＨＯＵ　Ｌａｎ－ｙｉｎｇ１，ＰＵ　Ｇｕａｎｇ－ｌａｎ１，ＬＡＩ　Ｔｅｎｇ－ｙｕｅ１，ＣＡＩ　Ｌｉ－ｊｕａｎ１，ＷＡＮＧ　Ｂｏ１，２
（１．Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａ’ａｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ　６２５０１４；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｒｃｈｉｔｅｃｔｕｒａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ
Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｄｅｙａｎｇ，Ｓｉｃｈｕａｎ　６１８０００）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔａｋｉｎｇ　ｙｏｕｎｇ　ｂｌｏｏｍＣｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ　ｓｐｅｃｉｏｓａ　ａｓ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍａｔｅｒｉａｌｓ，ｆｏｕｒ　ｃｏｌｏｒｉｎｇ　ａｇｅｎｔｓ（Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ　Ｂｌｕｅ，
ＴＴＣ，Ｉ２－ＫＩ　ａｎｄ　ａｌｐｈａ－ｎａｐｈｔｈｏｌ　ｂｅｎｚｉｄｉｎｅ）ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｍｅａｓｕｒｅ　ｐｏｌｅｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ．Ｓｔｏｒａｇｅ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｓ　ｕｎｄｅｒ　ｔｈｒｅｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ（－２０，４ａｎｄ　２５℃）ａｎｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓｕｃｒｏｓｅ，ｂｏｒｉｃ
ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｐｏｌｅｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｌｏｒｉｎｇ
ａｇｅｎｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ．Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ　Ｂｌｕｅ（８４．９４％）ｗａｓ　ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｃｈｏｉｃｅｓ　ｆｏｒ　ｒａｐｉｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ
ｗｏｒｓｔ　ｗａｓ　Ｉ２－ＫＩ（４４．６２％）．Ｓｔｏｒａｇｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ　ｈａｄ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｅ　ｅｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｐｏｌｅｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ，ｔｈａｔ　ｗａｓ　ｔｈｅ　ｌｏｗｅｒ　ｔｈｅ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅ　ｌｏｎｇｅｒ　ｔｈｅ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｔｉｍｅ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｕｎｄｅｒ　５０％ｗｅｒｅ　３ｄａｙｓ（２５℃），
１０ｄａｙｓ（４℃）ａｎｄ　７ｄａｙｓ（－２５℃），ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｆｏｒ　ｐｏｌｅｎ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｗａｓ　４℃．Ｗｉｔｈｉｎ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｌｉｍｉｔｓ，ｓｕｃｒｏｓｅ，
ｂｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｐｏｌｅｎ　ｔｏ　ｇｅｒｍｉｎａｔｅ　ｅａｓｉｌｙ．Ｉｆ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｅｘｃｅｅｄｅｄ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｃａｐａｃｉｔｙ，
ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｏｌｅｎ　ｗｏｕｌｄ　ｂｅ　ｒｅｓｔｒａｉｎｅｄ．Ｍｏｒｅｏｖｅｒ，ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｇａｖｅ　ａ　ｓｅｖｅｒｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｎ
ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｃｏｎｔｒａｓｔ　ｗｉｔｈ　ｌｏｗ　ｂｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｓｕｃｒｏｓｅ，ｂｏｒｉｃ　ａｃｉｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｗｅｒｅ　１０％，０．０３％，２０℃ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｄｕｒｉｎｇ　ｓｉｎｇｌｅ　ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐｏｒｔｆｏｌｉｏ　ｏｆ　ｓｏｌｉｄ　ｍｅｄｉｕｍ　ｖｅｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ
ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｗａｓ　８％（ｓｕｃｒｏｓｅ）＋０．０３％（ｂｏｒｉｃ　ａｃｉｄ）＋２０℃（ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ）．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｈａｅｎｏｍｅｌｅｓ　ｓｐｅｃｉｏｓａ（Ｓｗｅｅｔ）Ｎａｋａｉ；ｐｏｌｅｎ；ｖｉａｂｉｌｉｔｙ；ｓｔｏｒａｇｅ；ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
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