全 文 ：脱皮马勃止血有效部位的实验研究
高云佳①② ,赵庆春① ,闵　鹏② ,颜　鸣①
　　[摘　要 ] 　目的　研究脱皮马勃止血的有效部位 。方法　采用家兔体外凝血实验 ,通过瓷板针挑法 、试管法观察凝血时
间和血浆复钙时间等指标 , 针对脱皮马勃各提取部位进行对比研究。结果　脱皮马勃的乙酸乙酯部位和正丁醇部位凝血时
间和复钙时间与空白对照组比较显著缩短(P<0.01),有较好的止血作用。结论　脱皮马勃醇提液的乙酸乙酯部位和正丁
醇部位是其止血有效部位。
　　[关键词 ] 　脱皮马勃;止血;有效部位
　　[中图分类号 ] 　R965　　　[文献标志码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1008-9926(2010)06-0548-03
　　[ DOI] 　10.3969/j.issn.1008-9926.2010.06.026
ExperimentalStudiesontheEfectiveHemostaticComponentsofLasiosphaerafenzliReich.
GAOYun-jia①② , ZHAOQing-chun① , MINPeng② , YANMing①
①DepartmentofPharmacy, GeneralHospitalofShenyangMilitaryRegion, Shenyang110840, China;
②SchoolofTraditionalChineseMateriaMedica, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China
　　[ Abstract] 　ObjectiveTostudytheefectivehemostaticcomponentsofLasiosphaerafenzliReich.MethodsOrigi-
nalsolventextractsofLasiosphaerafenzliReich.wereusedinrabbitbloodcoagulationexperiments.Thecoagulationtime
andrecalcificationtimeoforganicsolventextractsofLasiosphaerafenzliReich.wereinvestigatedandcompared.Results
Thecoagulationtimeandrecalcificationtimeofethylacetateextractandn-Butanolextractwereshorterthanthoseofthe
blankcontrols(P<0.01).ConclusionEthylacetateextractandn-ButanolextractofLasiosphaerafenzliReich.aremajor
activeextractsplayingapartinhemostasis.Thehemostasisefectisrelatedtopromotedplateletaggregation.
　　[ Keywords] 　LasiosphaerafenzliReich.;hemostaticefects;efectivecomponents
　　脱皮马勃是《中国药典》2005年版规定的三种正
品马勃之一 ,是我国民间常见的用于止血 、消肿的药用
真菌之一 ,其味辛 、平 ,具有清肺利咽 、止血之功效 ,用
于风热郁肺咽痛 、咳嗽 、喑哑[ 1] 。其药理作用主要表现
在止血 、抑菌 、抗炎止咳、抗肿瘤等[ 2] 。临床上用于治
疗多种出血性疾病 ,如口腔出血 、消化道出血 ,外伤出
血等[ 3-5] 。但目前对脱皮马勃止血作用的研究还不深
入 ,尤其对脱皮马勃止血作用的有效部位和有效成分
的研究未见报道。本实验研究了脱皮马勃的 6个提取
部位对家兔凝血时间和血浆复钙时间的影响。
1　材料与方法
1.1　试药与动物　脱皮马勃(Lasiosphaerafenzli
Reich.)属于灰包科脱皮马勃属真菌药材(购于河北
作者简介:高云佳 , 硕士。研究方向:天然药物化学。 Tel:(024)
28851435;E-mail:gugojia-0727@163.com
作者单位:① 110840 辽宁沈阳 , 沈阳军区总医院药剂科;②
110016 辽宁沈阳 ,沈阳药科大学中药学院
通讯作者:赵庆春 , Tel:(024)28856205;E-mail:zhaoqc53@yahoo.
com.cn
省保定市安国市百姓大药房 ,经沈阳药科大学中药
教研室孙启时教授鉴定);云南白药(云南白药集团
有限公司 , 批号:20070328),无水氯化钙 、枸橼酸
钠 、二氯甲烷 、乙酸乙酯 、正丁醇 、乙醇等试剂均为化
学纯 ,水为蒸馏水。清洁级日本大耳白兔 6只 , 体
质量 2.5 ～ 3.0kg, ♀♂兼用 〔购于沈阳军区总医院
动物实验中心 ,动物合格证号:SYXK(军 )2007 -
001〕,实验室室温:24 ～ 26℃,湿度:50% ～ 70%,自
然光照 ,自由饮水。
1.2　仪器 　SB-1000 , N-1000旋转蒸发仪(日本东
京理化株式会社), TDL-5自动平衡离心机(北京医
用离心机厂), SHA-C电热恒温水浴槽(江苏金坛市
亿通电子有限公司)。
1.3　供试品的提取与制备　(1)脱皮马勃生药水溶液
的制备　称取脱皮马勃粉末 0.5 g,用蒸馏水加热回流
提取 3次 ,每次 2h。合并滤液并减压浓缩 ,定容至 100
ml量瓶 ,配制成生药量为 0.005g/ml水溶液 , 0.45 μm
微孔滤膜 ,滤过 ,得澄清溶液 ,备用。(2)脱皮马勃醇提
物的制备　取脱皮马勃干燥药材 500g,剪碎后用 45%
乙醇加热回流提取 3次 ,每次 2h。合并滤液并减压浓
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缩 ,至无醇味 ,加蒸馏水定容至 1000ml量瓶中 ,配制成
生药量为 0.5 g/ml提取溶液。取脱皮马勃醇提溶液
1ml,加蒸馏水定容至 100ml量瓶中 ,配制成生药量为
0.005g/ml水溶液 , 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,得澄清溶
液 ,备用。(3)脱皮马勃各提取部位的制备　将 1.3(2)
中脱皮马勃醇提物 1000 ml依次用二氯甲烷、乙酸乙
酯 、正丁醇进行萃取 ,得到二氯甲烷层 、乙酸乙酯层 、正
丁醇层 ,水层提取物 ,回收溶剂 ,将各层提取物制成冻
干粉 ,分别取各层提取物的冻干粉 0.5 g,加蒸馏水
45℃超声至溶解后定容至 100ml量瓶中 ,配制成 0.005
g/ml水溶液 , 0.45μm微孔滤膜滤过 ,得澄清溶液 ,备
用。(4)云南白药阳性对照溶液的制备　称取云南白
药粉末 0.5g,用蒸馏水加热回流提取 3次 ,每次 2h。
合并滤液并减压浓缩 ,定容至 100ml量瓶 ,配制成生药
量为 0.005g/ml水溶液 , 0.45μm微孔滤膜 ,滤过 ,得澄
清溶液 ,备用。(5)氯化钙溶液(凝血试剂)的制备　精
密称取无水氯化钙1.38g,加蒸馏水至 500 ml量瓶中
定容。(6)抗凝血液及血浆的制备　家兔耳缘静脉取
血 4.5ml,加入放有 3.8%枸橼酸钠溶液 0.5ml的一次
性抗凝管中 ,轻轻混匀 , 3500r/min离心 10min,分离血
浆 ,备用。
1.4　兔体外凝血试验
1.4.1　瓷板针挑法 [ 6] 　在白瓷板的凹坑内 ,加入
各药液 0.1ml,再分别加入氯化钙溶液 0.1ml,用大
头针把药液与氯化钙溶液混匀 ,最后分别同时加入
抗凝血液 0.5ml,立刻计时 ,迅速用大头针搅拌混匀
且搅拌次数一致 。以云南白药为阳性对照 ,生理氯
化钠溶液为空白对照 。以后每 30 s用大头针穿过
血液轻挑 1次 ,当出现血丝时为开始凝血 ,当推动血
块时 ,露出瓷板白底为血液完全凝固。从加入抗凝
血液到血液完全凝固时间为凝血时间 。每药重复实
验 6次 ,取其平均值。
1.4.2　试管法[ 6] 　取内径为 8mm,长 10 cm的玻璃
洁净试管 ,每管分别加入上述各药液 0.1 ml,再加入
氯化钙溶液 0.1 ml,摇匀 , 37℃水浴温浴 1 min,然后
于各管内同时加入兔血 0.5ml,以云南白药为阳性对
照 ,生理氯化钠溶液为空白对照 ,盖紧 ,倒转 3次 ,立
刻计时 ,在 37℃的水浴箱中观察 ,每隔 30s轻轻倾斜
试管 1次 ,角度为 30°,观察血液是否流动 ,直至倾斜
到 90°血液不再流动而完全凝固于试管底为止 ,即为
凝血时间 ,每组重复实验 6次 ,取其平均值。
1.4.3　复钙时间的测定[ 7] 　取内径为 8 mm,长 10
cm的玻璃洁净试管 ,每管分别加入上述各药液 0.1
ml,加入氯化钙溶液 0.1 ml,摇匀 , 37 ℃水浴温浴
1min,再于各管内同时加入 0.1 ml的血浆 ,同时开
动秒表计时 ,每隔 15 s倾斜试管 1次 ,在混合液中
开始出现弥漫的白色颗粒纤维蛋白丝时 ,即为复钙
时间 。以云南白药为阳性对照 ,生理氯化钠溶液为
空白对照 ,每种药物重复 6次 ,取其平均值 ,凝血时
间缩短率(%)=对照组凝血时间 -给药组凝血时
间 /对照组血凝时间 ×100%。
　　一般以药物凝血时间比空白对照组缩短 30%
以上者认为有效。
1.4.4　统计学处理 　使用 SPSS软件 , oneway
ANOVA单因素方差分析。
2　结果
　　脱皮马勃醇提物的各提取部位对家兔凝血时间
的影响结果可知:与空白对照组比较 ,脱皮马勃乙酸
乙酯提取物组 ,正丁醇组均能显著缩短家兔凝血时
间(P<0.01),缩短率为 33.74%和 27.56%,乙酸
乙酯组和正丁醇组的作用与云南白药组相近;马勃
生药组和 45%醇提组的缩短率分别为 23.4%和
25.44%。二氯甲烷组及水组与空白对照组比较 ,均
无显著性差异 ,结果见表 1。
表 1　各提取部位对家兔凝血时间的影响( x±s, n=6)
组别 瓷板针挑法(s)
试管法
(s)
复钙时间
(s)
缩短率
(%)
空白对照组 296.47±27.6 308.23±37.1 260.9±42.2 …
云南白药组 208.59±26.6d 213.76±25.0d 186.28±20.2d -29.63
马勃生药组 225.20±25.4d 230.76±31.8d 197.96±24.0c -23.43
45%醇提组 224.16±33.3d 226.14±26.6d 194.93±34.3c -25.44
二氯甲烷组 279.15±30.8 277.97±27.9 235.48±22.8 -8.47
乙酸乙酯组 202.46±28.7d 206.67±21.5d 165.48±31.2d -33.74
正丁醇组 215.31±31.8d 212.18±19.5d 197.90±27.9c -27.56
水层组 235.19±33.2c 248.56±25.5d 214.61±39.9 -19.26
　　注:与空白对照组比较 , cP<0.01, dP<0.001。
3　讨论
　　脱皮马勃作为我国民间常用止血 、消肿药 ,对其
相关的研究较少 ,且主要集中在马勃生药的粉末性
质。有关脱皮马勃止血活性的有效部位及化学成分
研究均未见报道。本实验首次应用体外凝血法对脱
皮马勃生药组 、醇提液和各提取部位进行活性追踪 ,
并确定其止血的活性部位为乙酸乙酯部位和正丁醇
部位 ,为以后进一步的有效成分研究奠定了药效基
础。
　　凝血时间是指血液自离体至凝固所需时间 ,大部
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分是内源性凝血酶生成所需时间 ,其长短与第Ⅷ 、Ⅳ、Ⅺ
等因子关系很大。测定凝血时间是观察受试药物对凝
血机制有无影响的必须实验。本实验乙酸乙酯组和正
丁醇组的凝血时间均比生理氯化钠溶液组明显降低 ,
说明脱皮马勃可能是通过影响内源性凝血系统起到促
凝作用;复钙时间是由于抗凝剂与血浆中的钙结合 ,使
凝血过程中断 ,在血浆中加入适量的钙以后 ,血液的凝
固过程即继续进行。乙酸乙酯组和正丁醇组使复钙时
间明显缩短 ,说明其有体外促凝作用。
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(收稿日期:2010-04-03;修回日期:2010-08-11)
(本文编辑　魏　萍)
(上接 491页)端粒酶是唯一一种以自身 RNA依赖的
DNA聚合酶。它能以自身的 RNA为模板 ,逆转录
合成端粒 DNA序列 ,添加到染色体末端 ,以补偿细
胞分裂时端粒 DNA的缩短 ,使得细胞克服危机期 ,
成为永生细胞[ 12] 。目前已有大量的文献证实 , G-四
链体的稳定剂可以有效抑制端粒酶活性 ,使得端粒
酶无法作用 ,从而破坏了肿瘤细胞的永生化 ,使得
G-四链体稳定剂具有抗肿瘤活性。为了进一步探讨
黑丑提取物的抗肿瘤作用机制 ,我们开展了其对 G-
四链体的稳定性实验 。
3.1　黑丑的体内及体外抗肿瘤活性 　从体外的
MTT实验结果中可以看出 ,黑丑提取物对多种人肿
瘤细胞株均有抑制增生的效果 。在浓度为 50μg/ml
时 ,对人肝癌和肺癌细胞株的抑制率均大于 30%。
由于黑丑提取物对人肺癌细胞 A-549具有较高的抑
制效果 ,故而针对该细胞株进行了系列浓度的测定 ,
并计算其 IC50值。
　　在体内抗肿瘤药效评价中 ,以相对肿瘤增殖率
评价抗肿瘤药物是否有效的标准:T/C>40%为无
效;T/C≤40%,经统计学处理 P<0.05,为有效 。
而以抑瘤率为指标的评价标准为:抑瘤率 <40%为
无效;抑瘤率≥40%为有效 。从相对肿瘤增殖率 、抑
瘤率 、瘤重 、肿瘤生长变化曲线的综合评价来看 ,黑
丑具有一定的抗肿瘤效果 。这为下一步扩大抗瘤谱
进行更深层次的研究奠定基础 。
3.2　黑丑的抗肿瘤机理探讨　利用变温 CD研究
了黑丑提取物对 G-四链体的稳定能力。结果显示 ,
G-四链体的 Tm值随黑丑提取物的加入量增加而逐
渐升高 。黑丑可以有效的稳定 G-四链体结构 ,进而
可以通过抑制端粒酶的活性的途径 ,破坏肿瘤细胞
的永生化 ,最终导致肿瘤细胞凋亡 ,进一步的分子机
理研究仍在进行中 。
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(收稿日期:2010-06-13;修回日期:2010-09-29)
(本文编辑　魏　萍)
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