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蜜环菌菌种及配方的筛选



全 文 :北方园艺2013(18):145~147 ·食用菌·
第一作者简介:任思竹(1981-),男,吉林长春人,硕士研究生,现主
要从事药用菌栽培和育种等研究工作。E-mail:rensizhu@hot-
mail.com.
责任作者:陈青君(1963-),女,博士,教授,硕士生导师,现主要从
事食药用菌栽培和育种等研究工作。E-mail:cqj@sohu.com.
基金项目:北京市教委农业综合服务基地建设林下经济资助项目
(PXM2013014207000053)。
收稿日期:2013-06-24
蜜环菌菌种及配方的筛选
任 思 竹,郭 亚 萍,张 国 庆,陈 青 君,张 晶 华,赵   晶
(北京农学院 植物科技学院,北京102206)
  摘 要:以8个蜜环菌菌种为试材,研究比较了8个蜜环菌菌种在7种培养基配方上接种效
果。结果表明:8个菌种在以栎皮煮水加PDA的配方中萌发时间最短,平均为4.3d;在PDA和
栎皮煮水加PDA配方上平均满皿时间最短,为24.1d和23.7d;在麦芽汁半固体和混合培养基
上菌索干重最大,平均为0.1600g和0.1680g。在各种培养基上以M7菌株长势最好,菌索干重
最大。
关键词:蜜环菌;菌种;培养基;生物量
中图分类号:Q 949.329+.81 文献标识码:A 文章编号:1001-0009(2013)18-0145-03
  蜜环菌 (Armillaria mellea)属担子菌亚门
(Basiaiomycotina)、伞 菌 目 (Agaricales)、白 蘑 科
(Tricholomataceae)、蜜环菌属(Armilaria(Fr.)Staude)。
蜜环菌子实体味道鲜美,营养丰富,菌丝、菌索、菌核均
可入药,是一种著名的食药用真菌[1]。在长期的生物演
化过程中,蜜环菌黑色、类似线绳的菌索侵入天麻块茎
或猪苓菌核后被消化利用,成为天麻或猪苓唯一的营
养源[2-4]。
在自然条件下,蜜环菌主要靠树木或枯枝落叶及土
壤基质获取碳源、氮源、无机盐及维生素等营养物质。
在人工培养基上不同的菌株表现出不同的生长特性[5],
在中国,蜜环菌的种类繁多,分布广泛,用于天麻的蜜环
菌种类的报道很多[6],在猪苓产区使用的蜜环菌通常与
天麻相同,蜜环菌的质量决定着天麻和猪苓的产量。筛
选优良的蜜环菌菌株和配方是生产蜜环菌优质菌种的
基础。该试验对国内几个主要的蜜环菌品种采用不同
的配方对其进行了比较观察,以期筛选出适合蜜环菌生
长的最佳配方。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试菌种“蜜三明”由福建三明真菌研究所提供,
AM8由湖北嘉鱼县环宇食用菌研究所提供,AM7由贵
州习酒食用菌研究所提供,AM1由韩国提供,AM6由华
中农大菌种中心提供,“蜜A9”由四川绵阳市食用菌研
究所提供,“宁强A9-1”由陕西宁强县真菌研究所提供,
“蜜-2”由陕西洋县提供。
1.2 试验方法
培养基配方:①PDA综合:马铃薯200g、葡萄糖
20g、琼脂15g、磷酸二氢钾3g、硫酸镁1.5g、维生素B1
微量。②PDA综合+蛋白胨5g。③PDA综合+牛肉
膏5g。④PDA综合+栎皮水100g(水煮)。⑤麦芽汁
半固体培养基:麦芽汁150mL、琼脂15g、葡萄糖20g、
蛋白胨5g。⑥GPC半固体:葡萄糖20g、蛋白胨5g、玉
米粉10g(取浸出液)、琼脂15g。⑦混合培养基:马铃薯
100g、木屑50g、麸皮50g、玉米粉50g、葡萄糖20g、蛋
白胨5g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、维生素B1微量、琼
脂15g。
将8个菌种分别接种于上述7种不同配方的培养
基皿中部,每个菌株在不同配方培养基上接种10个皿,
置于25℃培养箱中进行黑暗恒温培养。记录各种不同
的菌株在同一种培养基中的萌发时间、长势、菌索伸长
情况以及长满时间等参数。菌索干重在试验观察结束
时冲洗并烘干称重。
2 结果与分析
2.1 不同菌种在不同配方培养基上萌发时间的比较
由表1可知,不同菌株在7种母种培养基配方中的
萌发时间不同,平均萌发速度由快到慢依次为AM7>
AM8>“蜜2”>“蜜三明”>AM1>AM6>“蜜A9”>“宁
强A9-1”。以AM7菌株为例,菌丝在PDA综合+栎皮
水的萌发天数最短,在培养基PDA综合+蛋白胨、PDA
综合+牛肉膏、麦芽汁半固体、综合斜面培养基、GPC培
养基中的萌发时间差异不显著,菌丝在PDA培养基中
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·食用菌· 北方园艺2013(18):145~147
的生长速度慢于在其它培养基中的萌发速度。不同菌
株在同一配方中萌发天数存在差异,在栎皮水中萌发的
时间最短,为4.3d,而在其它各种培养基中萌发的平均
时间延长为6.4~7.5d。
  表1 不同菌种在不同培养基上萌发时间 d 
PDA综合 PDA综合+蛋白胨 PDA综合+牛肉膏 PDA综合+栎皮水 麦芽汁半固体 GPC半固体 混合斜面培养 均值
“蜜三明” 7.5  7.4  7.3  3.1  5.6  5.0  8.3  6.3
AM8  3.3  3.5  3.4  3.3  2.6  3.6  3.4  3.3
AM7  3.2  2.5  2.6  2.3  2.5  2.5  2.4  2.6
AM1  6.5  6.4  6.3  5.5  7.4  7.2  5.3  6.4
AM6  7.4  7.2  7.1  4.4  7.5  4.6  7.5  6.5
“蜜A9” 10.5  11.3  8.1  3.2  5.3  10.2  7.3  8.0
“宁强A9-1” 10.5  8.5  12.5  5.5  8.6  11.5  8.5  9.4
“蜜-2” 3.5  5.2  4.1  3.1  5.4  5.2  5.2  4.5
均值 7.5  7.4  7.3  4.3  6.4  7.1  6.8 -
2.2 不同菌种在不同培养基上满皿时间的比较
从表2可以看出,各菌株在7种配方培养基中均可
生长,但生长速度却有不同。满皿时间递增顺序依次为
培养基AM7>AM8>“蜜三明”>“蜜2”>AM1>“蜜
A9”>AM6>“宁强 A9-1”。其中,AM7、AM8、“蜜三
明”、“蜜2”之间平均差异不大,但以AM7菌株生长最
快,满皿时间最短。AM1、“蜜A9”满皿天数接近,迟于
上述4种菌株,但快于AM6、“宁强A9-1”。在麦芽汁半
固体培养基中,AM7的满皿时间最短,仅为16.4d。同
一菌株在各配方中的时间也有不同,PDA综合、PDA综
合+蛋白胨、PDA综合+牛肉膏、PDA综合+栎皮水、
麦芽汁半固体几种菌株长满时间大致相同,最多相差不
过1d。8个菌种在混合斜面培养基、GPC培养基上满
皿时间过长,不适于应用。
    表2 不同菌种在不同培养基上满皿时间 d 
PDA综合 PDA综合+蛋白胨 PDA综合+牛肉膏 PDA综合+栎皮水 麦芽汁半固体 GPC半固体 混合斜面培养 均值
“蜜三明” 26.5  24.2  21.2  21.2  20.1  25.3  23.2  23.1
AM8  17.8  18.1  17.4  17.3  18.6  33.9  31.5  22.1
AM7  17.5  19.4  17.2  17.9  16.4  34.3  31.2  22.0
AM1  29.2  28.2  25.1  23.2  23.1  34.5  34.2  28.2
AM6  25.1  30.3  33.1  34.1  34.2  34.3  34.4  32.2
“蜜A9” 25.2  34.1  31.1  25.2  30.4  29.5  25.0  28.6
“宁强A9-1” 34.4  34.2  34.2  31.3  32.8  34.5  34.2  33.7
“蜜-2” 17.2  25.5  20.2  19.3  30.3  34.2  25.1  24.5
均值 24.1  26.8  24.9  23.7  25.7  32.6  29.9 -
2.3 不同菌种在不同配方培养基上的形态特征
在选定的7种培养基中培养,8个菌株的形态特征
不尽相同。从菌索密度、菌索边缘整齐度、菌索颜色、菌
索生长势方面观察蜜环菌的生长状况。从表3可以看
出,AM7在培养基麦芽汁中菌索密度最大、边缘最整齐、
颜色为红褐色、长势最粗壮有力,PDA综合+蛋白胨、混
合斜面培养次之,栎皮水、牛肉膏居中,在综合PDA和
GPC半固体培养基上长势最差。
  表3 AM7在不同培养基上的生长特征
PDA综合 PDA综合+蛋白胨 PDA综合+牛肉膏 PDA综合+栎皮水 麦芽汁半固体 GPC半固体 混合斜面培养
菌索密度 + ++++ +++ +++ +++++ ++ ++++
边缘整齐度 整齐 较整齐 较整齐 整齐 整齐 整齐 整齐
菌索颜色 黑褐色 红褐色 浅褐色 红褐色 红褐色 浅褐色 红褐色
菌索生长势 ++ ++++ +++ +++ +++++ ++ ++++
2.4 不同菌种在不同配方培养基上的菌索干重
通过菌索生物量的多少,可以较为清晰、明了的反
映出菌种活性。从表4可以看出,AM7、AM8在7个配
方中干重较高,平均菌索干重为0.1420、0.1440g,明显
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强于“蜜三明”、AM1、AM6等其它6个菌株。各菌株在
麦芽汁半固体培养基和混合培养基平均菌索生物量最
重,平均为0.1600、0.1680g,表明这2种配方比较适合
密环菌生长。
  表4 不同培养基上不同菌种的平均菌索干重 g 
PDA综合 PDA综合+蛋白胨 PDA综合+牛肉膏 PDA综合+栎皮水 麦芽汁半固体 GPC半固体 混合斜面培养 均值
“蜜三明” 0.1053  0.1066  0.1348  0.0954  0.1588  0.1109  0.1123  0.1173
AM8  0.1145  0.1235  0.1368  0.0974  0.2036  0.1175  0.2013  0.1421
AM7  0.1238  0.129  0.1649  0.0983  0.1823  0.1137  0.1960  0.1440
AM1  0.0845  0.0935  0.1345  0.0933  0.1611  0.1004  0.1869  0.1220
AM6  0.0955  0.1022  0.1354  0.0927  0.1521  0.0669  0.1097  0.1077
“蜜A9” 0.0854  0.0874  0.1064  0.0886  0.1606  0.0673  0.1804  0.1108
“宁强A9-1” 0.1011  0.1028  0.0973  0.0791  0.1379  0.073  0.1843  0.1107
“蜜-2” 0.0942  0.0841  0.1331  0.1022  0.1239  0.0894  0.1772  0.1149
均值 0.1005  0.1039  0.1304  0.0934  0.1600  0.0923  0.1680 -
3 结论与讨论
优良的蜜环菌菌株表现为萌发快、菌索长势强壮,
满皿时间短,菌索生长茂密、生物量大。该试验结果表
明,在同一培养基上AM7表现突出,AM8虽然菌索生
物量多但满皿时间很长,生长速度慢,其它菌株表现
一般。
关于蜜环菌的配方,程显好等[7]认为在以甘露醇为
碳源制成的培养基上生长最好,而刘天贵等[8]认为蜜环
菌最易利用的碳源为葡萄糖。该试验结果表明,8个菌
株均在以葡萄糖为碳源并添加了麦芽汁的配方上生长
最好,菌索最健壮,满皿时间最短,说明麦芽汁对蜜环菌
生长非常有利,可以在母种制作时添加。培养蜜环菌的
目的是为了伴栽天麻和猪苓,而蜜环菌菌种质量和培养
基的优劣,也直接影响到天麻和猪苓接菌状况及产量效
果,其最终对天麻和猪苓产量的影响有待进一步研究。
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Screening on Species and Formulation of Armilaria melea Strains
REN Si-zhu,GUO Ya-ping,ZHANG Guo-qing,CHEN Qing-jun,ZHANG Jing-hua,ZHAO Jing
(Colege of Plant Science and Technology,Beijing Agricultural University,Beijing 102206)
Abstract:Taking eight Armilaria meleastrains as test material,the efect of the inoculated were cultured on seven media
for best cultural media screening.The results showed that a modified PDA medium with oak tree bark extracts was the
best germination medium for al the 8strains,with an average time of 4.3d.The strains colonized al the petri dishes on
PDA and the modified PDA media with the average time of 24.1and 23.7d,respectively.On the other hand,the best
cultural media for rhizomorph production were malt extract sub-solid medium and mixture medium,with rhizomorph
weight of 0.1600g and 0.1680g.Based on growth rate and rhizomorph weight,the best cultural strain was M7.
Key words:Armilaria melea;strains;medium;biomass
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