全 文 ：对大鼠急性心肌缺血具有保护作用 。
表 2　对急性心肌梗塞大鼠ηBH ,ηBL , 及ηP的影响
(x±S)
组　别 剂量(g/kg)
ηBH
(mPa s)
ηBL
(mPa s)
ηP
(mPa s)
空白组
(n=11) - 7.30±1.52 12.73±4.02 1.78±0.15
模型组
(n=9) - 11.52±3.40#1 19.75±5.40#2 2.08±0.21#2
碟脉灵
(n=10) 5 8.38±1.95#2 13.80±3.86＊1 1.85±0.18＊1
碟脉灵
(n=10) 10 8.12±2.16＊2 12.35±4.12＊2 1.80±0.12＊2
碟脉灵
(n=9) 20 7.58±1.70＊2 12.62±3.90＊2 1.79±0.29＊2
表 3　对急性心肌梗塞大鼠 FIB 、HCT 及 RCET 的
影响(x±S)
组　别 剂量(g/kg)
Fib
(%)
HCT
(%)
RECT
(u/ l)
空白组
(n=11) - 1.96±0.25 42.25±3.05 17.30±3.25
模型组
(n=9) - 2.280±0.29#1 47.76±6.52#1 20.50±1.70#1
碟脉灵
(n=10) 5 2.03±0.18＊1 43.30±5.18 17.45±3.40＊1
碟脉灵
(n=10) 10 1.98±0.21＊1 41.78±4.20＊1 15.52±3.50＊2
碟脉灵
(n=9) 20 1.92±0.26＊1 39.01±8.35＊1 15.08±4.19＊2
　　大量资料表明 ,急性心肌梗塞或心肌缺
血时 ,血液流变学出现特征性改变。主要表
现为全血粘度升高 ,红细胞压积上升 ,血浆粘
度及血浆纤维蛋白原浓度增加 ,红细胞聚集
性增强 ,红细胞变形能力下降[ 4 ,5] 。本实验
结果证实 ,碟脉灵注射液能使急性心肌梗塞
24h大鼠全血高切 、低切粘度血浆粘度 ,红细
胞压积 ,纤维蛋白原浓度 ,红细胞电泳时间 ,
红细胞聚集指数及红细胞刚性指数明显降
低 ,表明该药可能通过降低红细胞聚集性 、增
强红细胞变形能力和降低血液粘滞性等发挥
化瘀通脉作用 。这对于降低急性心肌梗塞时
冠状动脉侧支血管的血流阻力 ,防治急性心
肌缺血时的高粘状态具有重要意义 。
表 4　对急性心肌梗塞大鼠及 EAI及 ERI 的影响
(x±S)
组　别 剂量(g/kg) EAI ERR
空白组
(n=11) - 1.61±0.24 6.05±0.95
模型组
(n=9) - 2.05±0.25#2 7.68±1.06#2
碟脉灵
(n=10) 5 1.68±0.35＊1 6.18±1.28＊1
碟脉灵
(n=10) 10 1.60±0.27＊2 6.02±1.25＊2
碟脉灵
(n=9) 20 1.56±0.31＊2 6.01±1.27＊2
参 考 文 献
1　汉　武.中医药理学与毒理学杂志 , 1988 , 2(2):20
2　张丽丽.临床生化检验 ,上海科学技术出版社 , 1982:337
3　曾贵云.药理学进展 ,人民卫生出版社 , 1997:127
4　余月明 ,等.中国中西医结合杂志 , 1993 , 13(11):672
5　睢大员.中国实验方剂学杂志 , 1996 , 2(3):14
(收稿日期:1998年 1月)
一叶秋碱的抗肿瘤作用及其机制研究
苏州医学院(215007)　董宁征　顾振纶
摘要　采用小鼠移植性肿瘤 EC模型 ,观察一叶秋碱腹腔注射对荷瘤小鼠的抑瘤效应 , 并以人早幼
粒细胞白血病细胞株 HL60 为研究对象 , 采用 MT T 法 , DNA 电泳及荧光显微镜等实验手段 ,研究
一叶秋碱抑瘤作用的可能机理 , 结果显示:一叶秋碱对 EC 有抑制作用 , 平均抑瘤率达 25.3%～
62.2%;一叶秋碱处理后的 HL60细胞出现核固缩 、核碎裂 , DNA 电泳显示梯状条带 , 提示一叶秋
碱具有抗肿瘤作用 ,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。
关键词　一叶秋碱　抗肿瘤作用　细胞凋亡　HL60
　　从各种生物中寻找天然抗癌活性成分是 抗癌药研究的一个重要途径 ,有文献综述了
193中成药　Chinese Traditional Patent Medicine 1999 , 21(4)
十年来抗肿瘤天然产物活性成分研究进展 ,
认为生物碱 、萜类及大环内酯类是最重要的
几类抗肿瘤天然产物 ,其中大风子科 、苦木科
及大戟科植物是重点研究对象[ 1] 。一叶秋
碱(securinine , SEC)是从大戟科植物一叶秋
中提取的生物碱 ,具有中枢兴奋作用[ 2] 。本
文研究其体内外抗肿瘤作用及其可能作用机
理。
1　材料与方法
1.1　实验材料
1.1.1　主要试剂　硝酸一叶秋碱购自江苏
宜兴制药厂 ,批号 951172;环磷酰胺(CTX)
购自上海华联制药有限公司 ,批号 960206;
一叶秋碱粉剂由江苏宜兴制药厂提供 ,贮存
液为无水乙醇配制 , 4℃保存;MTT 、蛋白酶
K 、RNase A 及 DAPI均为Sigma产品。
1.1.2　细胞系　人早幼粒细胞白血病细胞
株HL60购自中国科学院上海细胞生物所 ,
常规培养于含 10%灭活新生小牛血清的
RMPI 1640培养基中 ,实验用细胞处于对数
生长期。
1.1.3　瘤株　小鼠艾氏癌(EAC)购自中国
科学院上海药物研究所。
1.1.4　实验动物　昆明种小鼠 ,雌雄兼用 ,
体重为(20.5±1.33)g ,同批实验使用的动物
性别相同 ,由苏州医学院实验动物中心提供。
1.2　实验方法
1.2.1　体内实验[ 3] ,实验用同性别小鼠 ,设
对照组 ,SEC 组及 CTX组 ,肿瘤接种24h后 ,
腹腔给药一周 ,对照组 N.S ,治疗组 SEC 每
天给药 1次 , CTX间断给药 2 次 ,各组给药
体积均为 10g体重 0.1ml ,停药 1d后处死动
物 ,取瘤称重 ,按下式计算抑瘤率 ,抑癌率%
=(1-实验组平均瘤重/对照组平均瘤重)×
100%。
1.2.2　体外增殖抑制实验 　采用 MTT
法[ 4] ,取对数生长期细胞 ,用 RMPI 1640调
整细胞浓度为 5×105/ml , 接种于 96 孔板
中 ,每孔 100μl ,对照组和不同浓度的药物组
均设 6个平行孔 ,用DG3022A酶标仪检测吸
光度 A 值(实验波长 A570nm),按下式计算
抑制率 ,抑制率%=(1-用药组平均 A 值/
阴性组平均A 值)×100%。
1.2.3　DNA 的抽提及电泳[ 5] 　收集细胞 ,
加入含 0.5%SDS 和 0.25mg·ml-1蛋白酶 K
的裂解液(50mM·I-1 T ris.HCL , pH8.0 ,
10mM·L-1 EDTA) , 然后加入 0.125mg·
ml-1 RNase A , 50℃水浴 1h后 ,用等体积的
苯酚-氯仿-异戊醇(25∶24∶1)抽提 ,上清液变
性后经 1.5%琼脂糖凝胶电泳 ,紫外透射仪
观察并摄影。
1.2.4　荧光显微镜形态学观察[ 6] 收集对照
组及一叶秋碱作用 48h 后的 HL60 细胞 ,
PBS 洗涤两次。用 3%多聚甲醛(pH7.4 ,
PBS)24℃条件下固定 30min ,经 PBS 洗涤后
用1%Triton X-10作用 4min ,然后用0.5μg/
mL 的 DAPI 在 24℃条件下染色 60min , PBS
洗涤后载片 ,用荧光显微镜观察着色的细胞
核形态。
1.3　统计
实验数据以均数±标准差( x ±S)表示 ,
用配对 t检验进行统计分析 。
2　结果
2.1　一叶秋碱对艾氏癌实体型 EC 的抑制
效应
给药过程中 ,给药组动物的一般情况和
进食量与对照组动物无明显差异 ,也无其它
毒副作用出现。一叶秋碱 2.5mg/kg , 5mg/
kg ,10mg/kg 3个剂量对 EC 抑制效应见表
1 ,结果显示 3个剂量对 EC 均有抑制作用 ,
其中 5mg/kg 组与 10mg/kg组与对照组相比
有差异(P<0.05),3次实验平均抑癌率分别
为 25.3%,45.4%,62.2%。3次实验结果基
本相符。
2.2　一叶秋碱对人白血病细胞 HL60增殖
的抑制作用
通过 MTT 实验观察不同浓度的一叶秋
碱作用 24h后的细胞生存率的变化 ,结果见
表 2 ,一叶秋碱能明显抑制 HL60细胞增殖 ,
并且呈剂量依赖性 。IC50为6.18μg/ml(r =
194 中成药　Chinese Traditional Patent Medicine 1999 , 21(4)
表 1　 ESC对 EC抑制效应
＊P<0.05 , ＊P<0.01 vs control
SEC
(mg/ kg·d-1×d)
CTX
组
鼠　数
(init ial/ end)
体重变化
(g)
肿　瘤
(g)
IR
(%)
0×7 0 10/ 10 +5.75 2.03±1.16 -
2.5×7 0 8/ 8 +4.25 1.45±0.57 28.5
5.0×7 0 8/ 8 +5.43 1.07±0.40 47.3＊
10×7 0 8/ 8 +4.34 0.69±0.34 66.0＊＊
0 20×2 8/ 8 +4.81 1.19±0.71 41.4
0×7 0 8/ 8 +10.23 1.77±0.98 -
2.5×7 0 8/ 8 +7.20 1.13±0.76 36.2
5.0×7 0 8/ 8 +8.37 1.03±0.51 41.8
10×7 0 8/ 8 +5.81 0.74±0.34 58.2＊
0 20×2 8/ 8 +7.35 1.13±0.80 36.2
0×7 0 8/ 8 +6.01 1.99±0.62 -
2.5×7 0 8/ 8 +9.01 1.77±0.81 11.1
5.0×7 0 8/ 8 +5.83 1.05±0.65 47.2＊＊
10×7 0 8/ 8 +4.43 0.75±0.60 62.3＊＊
0 20×2 8/ 8 +5.91 1.14±0.57 41.8＊＊
表 2　一叶秋碱对人白血病细胞 HL60 增殖的抑制
作用
n=6 , x ±S ＊ P<0.01 , ＊＊ P<0.01 vs control
Drug/μg/ml A value 抑癌率(%)
SEC 0 2.07±0.11 -
5 1.21±0.08＊＊ 41.55
10 0.81±0.03＊＊ 60.87
20 0.46±0.02＊＊ 77.78
40 0.34±0.05＊＊ 83.58
80 0.12±0.01＊＊ 94.21
0.5%乙醇 2.10±0.01＊＊ -
0.94)。
2.3　DNA 凝胶电泳
由于诱发凋亡时细胞内源性核酸内切酶
的作用 ,凋亡细胞出现 DNA 核小体之间随
机性断裂 ,可在琼脂糖电泳时显示出阶梯状
电泳条带。提取不同浓度一叶秋碱(5 -
80μg/ml)作用 48h HL60 细胞的 DNA 进行
琼脂糖电泳 ,观察到凋亡细胞特征性的阶梯
状条带。
2.4　荧光显微镜观察
运用 DAPI 对细胞核进行荧光染色 ,可
见对照组细胞核呈弥散均匀荧光 ,而一叶秋
碱处理 48h后的细胞 ,出现凋亡细胞特征性
的细胞体积缩小 ,核固缩和核断裂 ,镜下可见
浓密的块状或颗粒状荧光 。
3　讨论
一叶秋碱是从大戟科植物一叶秋中提取
的生物碱 ,药理研究表明 ,其具有中枢兴奋作
用 ,给小鼠腹腔注射可促进骨髓造血多能干
细胞(CFU-S)和粒系前体细胞(CFU-C)形
成 ,改善骨髓造血功能[ 7] ,通过体内外实验
证实一叶秋碱具有显著的抗肿瘤活性 ,提示
一叶秋碱是一个值得注意的抗肿瘤新药 。
参 考 文 献
1　方唯硕 ,等.国外医学 ,药学分册 , 1994 , 21(5):264
2　余传龙 ,等.中药词海 ,中国医药科技出版社 , 1993:3
3　徐叔云 ,等.药理实验方法学 , 人民卫生出版社 , 1991:
1423
4　Dole M , Nenez G , et al.Cnacer Res , 1994 , 54(15):3253
5　陈功星 ,等.中华血液学杂志 , 1995 , 16(12):654
6　Aharoni D , et al.Exp Cell Res 1995 , 218:271
7　姜学英 ,等.天津医药 , 1982 ,(2):99
(收稿日期:1997年 10月)
《中成药》杂志 1998年合订本已出版 。每册 90元(含邮费),需要者请汇款到上海市人民
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195中成药　Chinese Traditional Patent Medicine 1999 , 21(4)