全 文 ：收稿日期:2008-02-24;　修订日期:2008-07-20
作者简介:王玉亮(1978-),男(汉族),山西朔州人 ,现任上海交通大学农
业与生物学院助理研究员 ,硕士学位 ,主要从事天然产物的活性成分研究
工作.
＊通讯作者简介:张　磊(1977-), 男(汉族),重庆人 ,现任中国人民解放
军第二军医大学药学院生药教研室讲师,博士学位 ,主要从事植物次生代
谢研究工作.
水龙骨体外抗肝癌作用研究
王玉亮 1 , 吕　晶 2 , 张　磊3＊ , 辛海量 4
(1.上海交通大学农业与生物学院 ,上海　200240;　2.沈阳药科大学 ,辽宁 沈阳　110016;
3.中国人民解放军第二军医大学药学院 ,上海　200433;
4.中国人民解放军新疆马兰第 546医院 ,新疆 马兰 　841700)
摘要:目的 研究水龙骨对人肝癌细胞株 HepG2、SMMC-7721的生长增殖抑制作用 。方法 制备水龙骨含药血清 , 用
MTT法观察细胞增殖情况。结果 水龙骨含药血清在体外对人肝癌细胞株 HepG2 、SMMC-7721均有抑制作用 , 对 HepG2
的最高抑制率为 87.4%, 对 SMMC-7721的最高抑制率为 85.9%, 抑制肝癌细胞的效果优于含 5-氟尿嘧啶血清。结论
水龙骨对肝癌细胞的体外增殖有明显的抑制作用。
关键词:水龙骨;　人肝癌细胞株;　抗癌效应;　大耳白免;　含药血清
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)02-0415-01
StudyonAntihepatocarcinomaPropertyofPolypodiodesniponicainvitro
WANGYu-liang1 , LVJing2 ,ZHANGLei3＊ ,XINHai-liang3
(1.SchoolofAgricultureandBiology, ShanghaiJiaotongUniversity, Shanghai200240, China;2.Department
ofPharmacognosy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016, China;3.DepartmentofPharma-
cognosy, SchoolofPharmacology, SecondMilitaryMedicalUniversity, Shanghai200433, China;4.No.546
HospitalofPLA, MalanXinjiang841700 , China)
Abstract:ObjectiveToobservetheinhibitoryactionofPolypodiodesniponicaontheproliferationofHCCcellineHepG2 ,
SMMC-7721 invitro.MethodsTheserologicpharmacologicalmethodandMTTassaywereused.ResultsPolypodiodesniponi-
cahadsomeinhibitoryeffectontumorcelproliferationinvitro.TheproliferationofHepG2 、SMMC-7721cellswasobviouslyin-
hibitedafterbeingtreatedwithPolypodiodesniponica.ThehighestinhibitoryrateonHepG2 was87.4% andthatofSMMC-7721
was85.9%.ConclusionPolypodiodesniponicahasobviousefectofinhibitingtheproliferatoryofHCCcelline.
Keywords:Polypodiodesniponica;　HCCcellline;　Inhibitionaction;　Rabbit;　Pharmaceuticserum
　　水龙骨始载于《本草纲目拾遗》, 以草石蚕名之《植物名实图
考》名之水龙骨 ,列入石草类 , 来源为水龙骨科植物水龙骨 Polyp-
odiodesniponica(Met.)Ching的干燥根茎 , 性味苦 、凉 , 可化湿 ,
清热解毒 , 祛风通络 , 治痧秽泄泻 、痢疾 、淋病白浊 、风痹腰痛 、筋
骨酸痛 、跌打损伤等症 [ 1 , 2] 。现代药理研究证实其具有抗炎和抗
纤维化作用 [ 3] 。
笔者通过在江浙一带大量的调研 ,发现水龙骨在当地医院和
民间被广泛地用于治疗慢性乙型肝炎及其相关性肝癌和肝癌晚
期腹水症 , 疗效较好。为进一步确证其抗癌活性 ,本实验应用血
清药理学方法 , 观察其对人肝癌细胞增殖的抑制作用。
1　材料
1.1　试剂和设备 水龙骨药材采自浙江天目山 , 经第二军医大
学生药教研室张汉民教授鉴定为水龙骨科植物水龙骨 Polypo-
diodesniponica的干燥根。药材粉碎后过 100目筛 , 70%乙醇渗漉
提取 , 渗漉液浓缩至浸膏 , 4℃存放备用。 DMEM培养液 、胎牛血
清 、胰蛋白酶由美国 Gibco公司提供 , MTT及其他常用试剂购自
美华公司。 CO2培养箱购自德国 Hereus, ST-360酶标仪购自科
华公司 。
1.2　动物与细胞 日本大耳白兔购自上海斯莱克实验动物中
心 , 动物合格证号:SCXK(沪),雄性 , 体重(2.5±0.2)kg;人肝癌
细胞株 HepG2 、SMMC-7721由第二军医大学药理实验室提供。
2　方法
2.1　含药血清的制备 参考文献 [ 4]的方法 , 动物随机分成 3组 ,
每组 3只。空白组 , 生理盐水每日灌胃;阳性组 , 5-氟尿嘧啶每
日按 100 mg/kg灌胃给药;水龙骨组 ,每日按生药量计 10g/kg灌
胃。 10 d后 ,于最后 1次灌药后 1 h(灌药前禁食 12 h), 乙醚麻
醉 , 颈动脉采血 , 无菌分离血清 , 经过 56℃, 30 min灭活后 , 置
-20℃冰箱保存备用。
2.2　肿瘤细胞悬液制备 将冻存的人肝癌细胞 HepG2、SMMC-
7721按常规方法复苏 , 接种于含 10%小牛血清的 DMEM培养液
中 , 传代培养 ,至细胞呈指数生长期时 , 弃培养液 , 加入 0.25%胰
蛋白酶消化 3 min, 用 DMEM培养液中止消化后弃去 , 重新加入
含 10%小牛血清的 DMEM培养液吹打 , 调整细胞数为 1×10/ml,
接种于 96孔培养板 ,每孔加细胞悬液 90μl。
2.3　MTT法检测 将培养的细胞接种于 96孔的培养板中 ,置于
饱和湿度的 CO2培养箱中继续培养 24 h(37℃、5%CO2),弃去培
养液 , 然后每孔加入 DMEM培养液 70 μl, 空白组加入不含药的
空白兔血清 30μl;阳性药组加入含 5-氟尿嘧啶血清 30 μl;水龙
骨组分 3个剂量组:大剂量组加 30μl兔含药血清 , 中剂量组加
20 μl兔含药血清及 10 μl的小牛血清 ,小剂量组加 10μl兔含药
血清及 20μl的小牛血清。继续培养 24 h, 每孔加入 MTT溶液 ,
37℃孵育 4 h, 吸去每孔中的培养液 ,每孔加入二甲基亚砜(DM-
SO), 振荡后采用酶联免疫反应检测仪测定各孔 OD值 , 测定波长
为 570 nm,调零孔只含有 DMSO。所得各孔平均 OD值按下述公
式计算肿瘤细胞抑制率:抑制率(%)=(对照组平均 OD值 -给
药组平均 OD值)/对照组平均 OD值 ×100%。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.2 时珍国医国药 2009年第 20卷第 2期
2.4　统计学方法 数据以 x±s表示。进行 t检验及方差分析。
3　结果
3.1　对人肝癌细胞 HepG2的作用 结果表明水龙骨对 HepG2有
明显的抑制作用 , 高 、中 、低浓度含药血清的 OD值与空白血清组
对照差异均有显著性意义 , 高浓度含药血清的抑制率可达
87.4%,高于 5-氟尿嘧啶血清组(见表 1)。
表 1　水龙骨对 HepG2肝癌细胞的作用( x±s)
组别 OD值 肿瘤细胞抑制率(%)
空白 0.753±0.045
5-氟尿嘧啶血清 0.110±0.034＊＊ 85.4
水龙骨高剂量 0.095±0.025＊＊ 87.4
水龙骨中剂量 0.145±0.035＊＊ 80.7
水龙骨低剂量 0.477±0.049＊ 36.6
　　与空白组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<0.05
3.2　对人肝癌细胞 SMMC-7721的作用 结果表明水龙骨对
SMMC-7721有明显的抑制作用 , 高 、中 、低浓度含药血清的 OD
值与空白组比较差异均有显著性意义 ,高浓度含药血清的肿瘤细
胞抑制率可达 85.9%, 高于 5-氟尿嘧啶血清组(见表 2)。
表 2　水龙骨对 SMMC-7721肝癌细胞的作用( x±s)
组别 OD值 肿瘤细胞抑制率(%)
空白 0.653±0.039 -
5-氟尿嘧啶血清 0.103±0.041＊＊ 84.2
水龙骨高剂量 0.092±0.017＊＊ 85.9
水龙骨中剂量 0.155±0.025＊＊ 76.3
水龙骨低剂量 0.399±0.042＊ 38.9
　　与空白组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<0.05
4　讨论
我国是一个肝炎大国 ,乙型肝炎病毒携带者超过 1亿。研究
表明乙型肝炎病毒是肝细胞癌变的主要原因 [ 5] , 原发性肝癌患
者 HBV感染率高达 89.6% ～ 95%[ 6] 。因此对肝癌的防治应兼
顾对乙型肝炎的治疗。水龙骨在民间被广泛用于肝炎的治疗 , 效
果显著 , 并对肝癌和肝腹水有一定的疗效。本研究采用了血清药
理学方法 ,避免了将中药复方粗提物直接加入反应体系进行实验
所得结果的偏倚 ,从而提高实验结果的可信度。实验结果证实水
龙骨在体外能显著抑制肝肿瘤细胞的生长 ,提示水龙骨是一种很
有潜力的抗癌药物 ,值得更深入地研究。
参考文献:
[ 1 ] 　中国植物志编委会.中国植物志 ,第 6卷 2分册 [ M] .北京:科技出
版社 , 2000:10.
[ 2 ] 　姚振生 ,熊耀康 ,俞　冰 ,等.浙江省水龙骨科药用植物资源 [ J].中
药材 , 2004, 27(10):718.
[ 3 ] 　核心制药技术公司.水龙骨属提取物的新型治疗用途 [ J] .国际公
布:WO2003 /103695西 2003.12.18.
[ 4 ] 　孟　李 ,王宁生.含药血清的制备方法研究 [ J] .中药新药与临床药
理 , 1999, 10(5):290.
[ 5 ] 　YanyanZheng, Wen-lingChen, StanG.Louie, eta1.HepatitisB
VirusPromotesHepatocarcinogensisinTransgenicMice[ J] .Hepatolo-
gy, 2007, 45:16.
[ 6 ] 　陆培新 ,王金兵 ,吴一迁 ,等.乙型肝炎病毒表面抗原携带者队列前
瞻性研究在肝癌发生发展中的意义 [ J].中华医学杂志 , 2001, 81
(14):856.
收稿日期:2007-11-21;　修订日期:2008-03-10
作者简介:韩　刚(1957-),男(汉族),河北唐山人 ,现任华北煤炭医学院
药学系教授 ,学士学位 ,主要从事中药有效成分提取及药物新剂型的研究
工作.
姜黄素增溶方法的比较研究
韩　刚 , 孙广利 , 孔晶晶 , 张卫国
(华北煤炭医学院 ,河北 唐山　063000)
摘要:目的 优选提高姜黄素溶解度的最佳方法和条件。方法 以聚乙烯吡咯烷酮 K30,聚乙二醇 6000为载体制备姜黄
素固体分散体;以 β -环糊精 , 2-羟丙基 -β -环糊精为材料制备姜黄素包合物。测定这些物质的溶解度和体外溶出
度。结果 以 PVP为载体制备的姜黄素固体分散体在人工肠液中溶解度最大 ,随着 PVP加入量的增加 ,姜黄素溶出速度
加快。结论 以 PVP为载体制备姜黄素固体分散体对姜黄素增溶效果最佳 。
关键词:姜黄素;　固体分散体;　包合物;　溶出度
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)02-0416-02
StudyontheDissolutionofCurcumininvitro
HANGang, SUNGuang-li, KONGJing-jing, ZHANGWei-guo
(NorthChinaCoalMedicalColege, Tangshan063000, China)
Abstract:ObjectiveTooptimizethebestincreasingdissolutionconditionofcurcumin.MethodsThesoliddispersionofcurcu-
minwerepreparedwithPVP(K30)andPEG-6000;includecompoundofcurcuminwerepreparedwithβ -CDandHP-β -
CD.ResultsThedissolutionofsoliddispersionofcurcuminwithPVPwasthebestandtherateofdissolutionwasfastthanthe
others.ConclusionThesoliddispersionofcurcuminwithPVPispotentinimprovingthedissolutionofcurcumin.
Keywords:Curcumin;　Soliddispersion;　Includecompound;　Dissolution
　　姜黄素(Cur)是中药姜黄中的有效成分 , 具有抗肿瘤 、抗炎 、
抗氧化 、抗菌 、保肝等多种药理活性 [ 1] 。 近年来对姜黄素的药理
作用报道较多 , 但有关姜黄素制剂的报道较少。其主要原因是姜
黄素几乎不溶于水 ,体内吸收差 , 姜黄素不稳定易降解 [ 2] 。本研
究以聚乙烯吡咯烷酮(PVP), 聚乙二醇(PEG)为载体制备了姜黄
素固体分散体(SD);以 β -环糊精(β -CD), 2-羟丙基 -β -环
糊精(2-HP-β -CD)为材料制备了姜黄素包合物。以溶解度
和溶出速度为评价指标 ,优选对姜黄素增溶的最佳方法。
1　仪器与试剂
1100型高效液相色谱仪(Agilent公司 , 四元梯度泵);AE-
240电子天平(Metler);RE-52A型旋转蒸发仪(上海亚荣生化
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.2