全 文 ：解 剖 学 通 报 1 9 8 3年 6卷 1期
农吉利硷对人肝癌细胞株停药
前后的长期影响
杜翠芝
(青
咎玉珍
岛 医 学
张玉江
院 )
为 了探讨农吉利硷 (野百合硷 、 单猪屎豆硷 、 M no oc r to la ine )抗癌 、 致毒作用 的 原 理 ,
我们曾观察过不同浓度农吉利硷对人肝癌细胞株的某些影响 (` ) 。 结果表明农吉利硷对人肝 癌
细胞株的影响与文献中 (么一 “ )该药物及其同类化合物对人胚肝细胞株 、 大 鼠再生肝细胞 以及 体
内给药对实验动物肝组织的有关影响一致 。 其影响程度随着药物剂量的增加和作用时间的延
长而加剧 。 为进一步探讨这些影响的规律及其意义 , 我们又观察了农吉利硷对该细胞株在停
药前后细胞学某些方面的变化 。
农吉利硷 、 B E L一 7 4 02 人肝癌细胞株及培养液均与以前的报导相同 (` 、 。 )。 6 万细胞八 毫
升培养液分装于加有两张小玻片的培养瓶内 (用于细胞计数的培养瓶不加小玻片 ) 。 于接种后
的第三天随机将培养瓶分为对照组和实验组 , 后者又按每毫升培养液所含农吉利硷的最终浓
度分为 1 0 微克 、 30 0 微克 、 ’ 50 0 微克三组 。 加药后继续培养 , 每三天换液一次 , 七天 传 代
一次 。 在换液传代时均分别按上述相应浓度加药 , 业在传代时加入 2 张小玻片 , 于传代的第
四天取 出玻片 , 一张用 H 、 E 染色 , 另一张用甲绿— 派罗宁染色 。 在光镜下观 察 细胞 形态 、 有丝分裂数 , 业在加药后逐日观察活细胞的生长情况及每周进行活细胞照相一次 。 未加
玻片的各组细胞均在每周传代时进行细胞计数 , 以计算细胞的生长数 。
观 察 与 结 果
一 、 H 、 E 染色片和活细胞形态学的光镜观察
对照组细胞绝大多数为多边形上皮样的细胞 ,排列规则而紧密 , 边界清晰 、 大小均匀 (图
版 1 ) 。
1 0 微克组在加药的第一周 , 细胞形态与对照组 比较无明显差异 , 但也有些细胞的胞 质
内颗粒增多 。 在加药的第二周细胞体积增大 , 大小不均 、 排列紊乱 , 多边形上皮 样 细 胞 减
少 , 畸形细胞和单核或多核 巨细胞增多 , 有些细胞质内出现水样空泡和嗜伊红小体 , 显示细
胞在逐渐衰退 。 上述这些变化随着药物作用时间的延长而 日益明显 , 培养到 40 天 时 , 大 部
分细胞脱落 , 仅见到少数残留的畸形细胞贴在瓶上 。
本文承陆光庭教授 . 邹国祥付教授审校 . 谨致谢忱 l
3 0 微克组和 50 微克组在加药的第一周 , 细胞就出现上述 1 0 微克组第二周时的形 态
变化 , 业随药物作用时间的加长而变化更加剧烈 , 50 0微克组较 3 0 微克组的 变 化 更 为显
著 。 这两组的部分细胞的空泡变性 、 细胞固缩和细胞破碎均较 1 0 微克组明显增 多 。 30 0 微
克组培养到 28 天 , 50 0 微克组培养到 21 天 , 细胞即大部分脱落 。
各组细胞形态变化的基本特点是 , 药物作用的初期细胞和细胞核的 体 积 均 增 大 (图 版
2 )
, 继之上皮样多边形细胞减少 、 畸形和多核或单核巨细胞增多 、 细胞大小不均 (图版 3 、
6
、
7 )
。 在加药的早期可见有的细胞质内有许多小空泡 , 在加药的后期多为几个或一 个大
空泡 (图版 4 、 8 ) , 最后可见到大量核深染固缩和破碎细胞 (图版 5 、 9 ) 。
二 、 药物对细胞分裂数的影响
用光镜目镜网格分别计数各组染色玻片上 1 0 0 0 个细胞中有丝分裂的细胞数 。 可见 药 物
剂量越大和药物作用时间越长有丝分裂数越低 。
三 、 药物对细胞生长数的影响
各组细胞用血球计数盘计数细胞每周的生长数 。 可见细胞生长的数目随药物浓度的增加
和作用时间的延长而减少 。
四 、 停药后该细胞株的形态变化
各组细胞在药物作用 10 天后停药 , 用不含该药物的同种培养液继续培养 , 观察其 细 胞
形态变化 。 3 0 微克组和 50 0 微克组在加药传代后的第 10 天细胞退变已极为明 显 。 停 药 后
各组细胞继续退变 、 细胞数 目不断减少 , 直到停药后的第 10 天 , 只有极少数细胞 贴 瓶 , 这
些贴瓶的细胞大小不均 , 多数为畸形细胞 , 偶尔也可以见到极少数多边形上皮样的细胞 , 之
后 , 为减少对细胞的损害 , 延长换液和传代的期限 。 到停药后的第 17 天 , 在退变的畸 形大
细胞之 间见有散在少数体积小 、 边界不清的小细胞 (图版 1 0 ) 。 此后在退变的畸形大 细 胞 之
间逐渐可 以见到少数边界清晰的梭形和多边形小细胞 , 业 日渐增多 , 到停药后第 25 天 这 些
多边形细胞即生长成片 (图版 1 1 、 1 2 ) 。 这些生长成片的细胞后来经过传代 , 在形态上与对照
组无何差异 。
讨 论
本实验观察表 明 , 农吉利硷对人肝癌细胞株长期影响与所报导的短期影响的实验结果相
一致 , 这进一步证明影响的程度乃取决于药物的浓度和作用的时间 、 这种药物对该细胞株的
影响主要表现为细胞体积增大和有丝分裂数及生长数下降 , 多边形上皮样细胞 数 减 少 , 畸
形和多核或单核巨细胞增多 , 水样空泡变性 , 细胞深染固缩和细 胞破 碎 。 这 些 变 化 与 文
献 (` 一 7 )中关于该药物及其同类化合物对培养的人胚肝细胞株和大鼠再生肝细胞的 影 响 相 一
致 。
药物作用 10 天后停药 , 各组细胞继续退变 , 细胞数 目日渐减少 , 到停药后的 10 天 , 除
见到退变畸形细胞外 , 还可见到极少数多边形上皮样细胞 。 这时停止换液和传代 , 直到停药
后的 17 天时 , 在固定的观察部位内 , 见到退变畸形的大细胞仍贴在瓶上 , 到 25 天尚模糊可
见 。 但在 17 天时残 留的极少数多边形细胞被小梭形或多边形小细胞替代 。 因此推测残 留 的
多边形上皮样细胞可能是 G 。 期细胞 , 经过一段时间又进入增殖周期 , 分裂成为小梭形或多
边形细胞。 这种小细胞很像对照组传代的第二天所见到分裂形成的新细胞的形态 。 有文献报
导 ) (s肿瘤组织的细胞 , 业不都是同时处于增殖状态 , 而往往是 由三种细胞群组成 : 一为增殖
细胞群 , 它不停的进行增殖 , 对抗癌药物的作用敏感 ; 二为暂不增殖的细胞群 ( G 。 期细胞 ) ,
处于暂时或一时不增殖的休止状态 , 但一旦条件改变即可进行增殖 , 这群细胞对抗癌药物不
敏感 , 是放疗 、 化疗后复发的祸根 ; 三为失去增殖能力的细胞群 。 因此 , 可以认为在停药后
的 2 0 多天中 , 在退变畸形细胞之间 , 残留的多边形上皮样的细胞可能就是处于上述的 G 。 期
细胞 。 这种 G 。 期细胞在停药后经过一时期的培养进入增殖周 期 , 不 断 分 裂 增 殖 生 长 成
片 。 那些退变的畸形细胞可能是处于增殖期的细胞群 , 在药物作用下退变死亡 。 故可 以认为
该细胞株也可 以分为增殖细胞群和暂不增殖的细胞群 以及失去增殖能力的细胞群 。 看来该药
物很可能只作用于增殖的那部分细胞群 , 而 G 。 期细胞对此药物不敏感 。 从实验结果来 看 ,
这种药物对该细胞株的作用与某些抗癌药物一样 , 不容易在短期内消灭所有的癌细胞 , 而宜
采用长期用药 。 为了避免大剂量用药对机体的毒性影响 , 也可 以采取中小剂量长期或间歇性
用药 , 这样有利于消灭 G 。 期细胞 , 以减少或防止化疗后肿瘤复发的可能性 。
参 考 文 献
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S u l lm a n S F e t a l : hT
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P e t e r s o n J E : E fe
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