全 文 ：收稿日期:2006-12-12;　修订日期:2007-02-12
基金项目:四川省教育厅重点项目(N o. 2003A011);教育部留学回国人员
科研启动基金资助项目
作者简介:刘　雷(1980-),男(汉族),四川彭州人 ,现为四川农业大学农
学院在读硕士研究生 ,主要从事特用植物遗传育种研究工作.
*通讯作者简介:吴　卫 (1970-), 女(汉族),四川汉源人 , 现任四川农业
大学农学院教授 ,博士学位 ,主要从事特用植物遗传育种研究工作.
峨眉山不同海拔高度鱼腥草居群槲皮素含量变化
刘　雷 , 吴　卫* , 郑有良 , 吴　珊
(四川农业大学农学院 ,四川 雅安　625014)
摘要:目的 研究峨眉山不同海拔高度鱼腥草居群槲皮素含量差异。 方法 用 Hypersil ODS C18(5 μm , 4. 0 mm ×250
mm)色谱柱 , 流动相为乙腈:0. 4%磷酸 =45∶55, 调 pH =3, 流速 1. 0 m l /m in,柱温 30℃, 紫外检测波长 370 nm。结果 该
法简便 、快速 、准确 , 可作为鱼腥草中槲皮素的定量分析方法。结论 不同海拔的 9个鱼腥草居群槲皮素含量存在显著差
异 , 其含量与海拔高度及土壤养分含量间相关性均不显著。
关键词:鱼腥草;　槲皮素;　海拔;　土壤养分;　反相高效液相色谱
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)07-1601-02
Variations on theQuercetin Content ofHouttuynia cordata Thunb. Populations from D if-
ferentA ltitudes ofM t. Em ei
L IU Lei, WU W ei* , ZHENG Y ou-liang, WU Shan
(Agronomy College of S ichuan AgriculturalUn iversity, Yaan , Sichuan 625014, Ch ina)
Abstract:Objective To study the diffe rence of quercetin con tent ofH. cordata Thunb. from differen t altitudes of M .t Em e.i
M ethods Quercetin was de te rm ined byH PLC on H ype rsilODS C18(4. 0 mm ×250 mm , 5 μm) a t 30℃ w ith ace tonitrile:0. 4%
phospho ric acid(45∶55), pH =3 as the m ob ile phase. De tection w ave lengh was 370 nm. The flow rate wa s 1. 0 m l /m in. Resu lts
This m e thod is simp le, fast and accu ra te, and can be the quantita tive analy ticm ethod of querce tin conten t o fH. cnda ta. Conclu-
sion The re a re significant differences am ong the que rce tin con tent of 9 popu la tions from different a ltitudes. The correlationship be-
tw een que rcetin conten t and a ltitudes and so il nu trien t are no t significan.t
Key words:Houttuynia cordata Thunb. ;　Que rcetin;　A ltitude;　Soil nutrient;　RP-HPLC
　　鱼腥草是三白草科蕺菜 Hou ttuynia corda ta Thunb. 之全草。
广泛分布于于我国中部 、东南及西南部各省区 ,尤以四川 、湖北 、
湖南 、江苏等省居多。性味辛 、寒 , 具有清热解毒 、消肿排脓 、利尿
通淋之功效。鱼腥草除含挥发油成分外 , 还含大量槲皮素 、槲皮
苷 、异槲皮苷等。其中槲皮素具有祛痰 、止咳平喘 、抗炎 、抗过敏 、
扩张冠脉 、降血脂 、抗心律失常 、抗血小板聚集 、抗氧化 、抗肿瘤等
广泛的药理作用 [ 1] , 其含量是衡量鱼腥草药用价值的重要指标。
峨眉山地处中国四川盆地西南边缘 ,形成于距今 3 000万年
前的喜玛拉雅运动。山体为近南北走向的山脉 ,山顶最高海拔为
3 099 m。峨眉山气候温和 , 云雾多 ,日照少 ,雨量充沛 , 空气相对
湿度大 ,存在着丰富的植物资源。根据我们以前的调查 , 峨眉山
鱼腥草资源非常丰富 ,主要分布在海拔 500 ～ 1 800 m范围内。
近年来 , 国内对鱼腥草的研究报道主要集中在生产栽培 、药
理药效 、临床应用和遗传背景 [ 2 ～ 5]等方面。曾有学者对一些植物
的次生代谢产物与海拔高度间关系进行过研究 [ 6, 7] , 多数结果表
明次生化谢产物与海拔高度间存在显著或极显著的相关性。也
有学者对植物次生代谢产物与土壤养分间的关系进行过研
究 [ 8] , 结果表明土壤养分对植物次生代谢产物的合成量也有显
著影响。先前 , 笔者曾对峨眉山不同海拔高度鱼腥草居群挥发油
成分进行过研究 , 发现挥发油中部分成分与海拔高度和土壤养分
间存在显著相关性 (生态学报 ,待发表)。本研究则采用反相高
效液相色谱法测定了不同海拔 9个鱼腥草居群槲皮素含量 ,探讨
海拔高度及土壤养分与槲皮素含量间的关系 ,通过对次生代谢产
物与海拔高度及土壤养分的综合评价 ,为鱼腥草人工栽培选择适
宜的海拔高度和土壤条件以及进一步的合理开发利用提供一定
的理论依据。
1　仪器与试药
Ag ilent公司 1100型高效液相色谱仪 (含脱气机 、四元梯度
泵 、自动进样器 、柱温箱 、DAD检测器), Sar to rius公司 BP211D型
电子天平 , ICE公司 M ic romax型离心机 , M illipope公司 M illiQ型
纯水仪 。
乙腈为色谱纯 ,由 TEDIA公司提供 , 槲皮素对照品(纯度 >
98%)由 S igm a公司提供 , 其余试剂为分析纯。
表 1　试验材料的采集地点 、海拔高度 、生长期环境及多度
居群 海拔 l /m 生长环境 多度
C4 1 600 黄连地 、田边 、路边 少
C2 1 500 路边 、沟边 中等
C1 1 400 沟边、路边 、林下 中等
C3 1 300 沟边 、路边 中等
D1 1 400 路边 、林下 少
D2 1 200 林下 、茶树下 少
D3 1 000 林下 、 少
D4 750 林下 、 少
D5 500 林下 、田边 少
2　材料与方法
2. 1　试验材料 由于在峨眉山海拔 1 800 m 以上的地区已很难
采集到鱼腥草 ,本试验所有居群的材料均采自海拔 1 800 m 以
下。 9个居群材料和生长地土样于 2005-07-13采自峨眉山西坡。
各居群的海拔高度 、生长环境及多度见表 1。经四川农业大学吴
卫博士鉴定均为 Houttuyn ia cordata Thunb. 。
2. 2　峨眉山鱼腥草生长地土壤养分含量基本情况 峨眉山鱼腥
草生长地土壤养分含量的基本情况见表 2。土样的处理和各种
营养元素的分析参照《土壤农化分析》中的常规方法进行。
2. 3　色谱条件 色谱柱:H ype rsil ODS C18( 5 μm , 4. 0 mm ×250
mm);流动相:乙腈∶0. 4%磷酸 =45∶55, 调 pH =3。 流速:1. 0
m l /m in;柱温:30℃;紫外检测波长:370 nm;槲皮素对照及供试样
品分离色谱图见图 1。
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7 时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期
表 2　峨眉山鱼腥草生长地土壤养分含量
编号 酸碱性
有机质
C /g kg- 1
全氮
C /g kg- 1
碱解氮
C /mg kg- 1
速效磷
C /mg kg- 1
速效钾
C /mg kg-1
有效铁
C /m g kg-1
有效锰
C /mg kg -1
有效铜
C /mg kg- 1
有效锌
C /mg kg- 1
有效硼
C /m g kg-1
有效钼
C /mg kg-1
C1 5. 83 60. 30 2. 30 414. 70 4. 90 141. 82 3. 15 57. 96 2. 30 8. 84 0. 32 0. 28
C2 5. 80 40. 40 2. 10 393. 40 2. 56 111. 95 82. 04 56. 01 9. 68 8. 21 0. 32 0. 22
C3 5. 83 33. 20 1. 40 299. 70 23. 65 179. 25 27. 30 56. 45 25. 11 9. 49 0. 36 0. 22
C4 5. 80 68. 90 3. 00 581. 70 2. 98 171. 07 54. 53 57. 65 4. 46 8. 05 0. 21 0. 17
D1 6. 15 48. 30 3. 70 210. 70 11. 83 58. 26 <0. 01 25. 67 <0. 01 <0. 01 0. 17 0. 21
D2 6. 26 17. 00 1. 47 155. 90 0. 85 64. 16 45. 00 54. 66 1. 36 5. 10 0. 26 0. 15
D3 6. 31 48. 60 2. 90 159. 20 5. 01 124. 60 <0. 01 31. 18 <0. 01 <0. 01 0. 25 /
D4 6. 67 17. 30 1. 90 296. 00 3. 41 109. 09 57. 68 49. 26 1. 96 3. 63 0. 15 0. 19
D5 6. 40 43. 90 2. 60 201. 00 48. 58 172. 46 <0. 01 22. 87 <0. 01 <0. 01 0. 31 0. 19
　　表中所列数据为 3次测定结果的平均值 , “ /”表示因试验原因未检测出
a.槲皮素对照品　 b.供试样品
图 1　槲皮素对照及供试样品分离色谱图
2. 4　标准溶液制备 精密称取槲皮素对照 ,无水乙醇定容至 50
m l, 配成浓度为 224. 3 μg /m l的对照溶液 , 再稀释配成浓度为
22. 43μg /m l的对照溶液。
2. 5　供试样品制备 将干燥后的材料粉碎过 40目筛 , 精密称取 1
g置 50 m l具塞三角瓶 , 加入提取液 (乙醇:25%盐酸 =4∶1)30
m l后超声提取 40 m in,分两次进行 , 20 m in /次 , 中间间隔 10 m in。
取出过滤 ,残渣用提取液洗涤数次 , 定容至 50 m l。 取 1. 0 m l至
1. 5 m l离心管中 , 1 000 r /m in离心 10 m in,取上清液作为供试品
样品。
2. 6　样品测定方法 准确吸取供试品溶液 5 μl, 注入高效液相色
谱仪 , 按上述色谱条件 ,依法测定。
2. 7　线性范围 取浓度为 22. 43 μg /m l和 2243 μg /m l的槲皮素
对照品溶液 , 分别进样 1, 2, 5, 10 μl,按上述色谱条件测定 , 以峰
面积为纵坐标 , 槲皮素的浓度(μg /m l)为横坐标 , 绘制标准曲线 ,
计算得回归方程为:Y =1. 261 458X - 16. 121 8, r=0. 999 7。表明
槲皮素含量在 22. 43 ～ 2 243 ng范围内具有良好的线性关系。
2. 8　精密度试验 精密吸取 22. 43 μg /m l对照品溶液 5 μl, 重复
进样 5次 , 槲皮素峰面积积分值的相对标准偏差 RSD =0. 30%。
2. 9　稳定性试验 精密吸取 22. 43 μg /m l对照品及供试样品溶
液 5μl,分别在 0, 3, 6, 9 h进样测定 , 对照品和供试样品的槲皮素
峰面积相对标准偏差 RSD 分别为 0. 96%和 0. 99%。结果表明对
照品及供试品在 9 h内有良好的稳定性。
2. 10　重复性试验 取同一样品 6份 , 按上述样品制备方法和色
谱条件测定 , 槲皮素含量相对标准偏差 RSD =1. 61%。
2. 11　回收率试验 取已知含量样品加入对照品适量 , 依法测定 ,
结果平均回收率为 101. 19%, RSD为 2. 35%(n=6)。
3　结果与分析
3. 1　峨眉山鱼腥草居群槲皮素含量的基本情况 每份材料按 2. 5
项方法重复 3次 ,分别精密吸取供试品溶液各 5 μl, 按上述色谱
条件测定 , 计算样品中槲皮素含量 ,样品测定的平均结果见表 3。
9个居群材料间槲皮素含量变幅为 0. 24 ～ 2. 36 m g /g, 平均
含量 1. 17 m g /g。方差分析结果表明 ,各居群材料槲皮素含量差
异的 F值为 358. 04,大于 F0. 01 =3. 89, 达极显著水平。从新复极
差法多重比较结果可以发现 , 除 C3与 C4两居群材料的槲皮素
含量差异不显著外 , 其余任意两居群间槲皮素含量的差异均达到
1%的显著水平。
表 3　峨眉山不同海拔高度鱼腥草居群槲皮素含量和多重比较结果
居
群
海拔
l /m
含量
C /mg g - 1
1%
显著水平
居
群
海拔
l /m
含量
C /mg g - 1
1%
显著水平
C1 1 400 2. 36 A C4 1 600 0. 99 E
D2 1 200 1. 83 B D1 1 400 0. 79 F
D5 500 1. 48 C D3 1 000 0. 58 G
C2 1 500 1. 20 D D4 750 0. 24 H
C3 1 300 1. 06 E
3. 2　槲皮素含量与海拔高度间的关系 相关分析结果表明 ,各居
群材料槲皮素含量与海拔高度的相关系数为 0. 215 2,相关性不
显著。
3. 3　槲皮素含量与生长地土壤 pH值和养分含量间关系 槲皮
素含量与其生长地土壤 pH值间的相关系数为 -0. 437 5,未达显
著水平。与有机质和各种养分分的相关性也均不显著。其相关
系数的依次为:有效硼 (0. 607 2)、有效锌 (0. 394 4)、有效锰
(0. 304 6)、全氮( -0. 256 6)、有效钼 (0. 223 8)、有机质 (0. 205
2)、有效铁( -0. 189 9)、速效钾 (0. 087 3)、碱解氮 (0. 035 8)和
有效铜( - 0. 034 8)。
4　讨论
4. 1　 刘文尧等曾利用高效液相色谱法对购于河北安国和北京
的 4份鱼腥草材料进行过槲皮素含量测定 , 其含量变幅为 2. 0 ～
4. 3 mg /g, 平均 3. 4 mg /g。本项目组陈黎等利用相同的方法对来
自全国各地的 26份鱼腥草材料进行了槲皮素含量的测定 , 其含
量变幅为 0. 59 ～ 4. 02 m g /g, 平均 1. 8 mg /g(待发表 )。而本试验
结果表明 , 峨眉山鱼腥草居群槲皮素含量为 0. 24 ～ 2. 36 mg /g, 平
均 1. 17 m g /g, 总体水平偏低。究其原因 ,可能与我国鱼腥草种质
源极为丰富 , 遗传背景各不相同 , 加之不同居生长地生态环境差
异较大有关。
4. 2　 曾有学者对植物次生代谢物与海拔高度及土壤养分含量
等生态因素间的关系进行过研究。结果表明 , 山茛菪中樟柳碱和
总生物碱含量海拔高度的升高而增加 , 东莨菪碱 、山茛菪碱和阿
托品则与海拔高度的相关性不显著;紫菀中的类黄酮的酚类物质
随海拔高度的增加而增加;生长于高海拔 、肥沃砂质土壤的鲜缬
草含油量高 [ 6] ;土壤微量元素会影响杜仲叶中次生代谢物合成
与积累。笔者先前的研究也发现 , 峨眉山不同海拔高度鱼腥草居
群挥发油中乙酸龙脑酯和柠檬烯的含量与海拔高度间存在显著
相关性 ,土壤养分对部分挥发油成分含量也有显著影响(生态学
报 ,待发表 )。本研究则发现 , 鱼腥草槲皮素含量与海拔高度及
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7　
土壤养分含量间相关性均不显著。
4. 3　 本试验所检测的 9个鱼腥草居群位于海拔 500 ～ 1 600 m
间 , 尽管鱼腥草槲皮素含量与海拔高度及土壤养分含量间相关性
均不显著。但试验结果也表明 ,除 C3和 C4两居群槲皮素含量差
异不显著外 , 其余各居群差异均达到 1%的显著水平。即使位于
同一海拔(1 400 m)的两个不同山峪的鱼腥草居群 C1和 D1, 其
槲皮素含量差异也很大 , 分别为 2. 36 mg /g和 0. 79 m g /g。 其产
生原因推测可能与峨眉山地形复杂 , 生态条件变化较大 , 小生境
分化强烈有关。
参考文献:
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收稿日期:2007-01-15;　修订日期:2007-03-07
基金项目:广西中医学院课题(N o. 2005005)
作者简介:张兴燊 (1963-),男(汉族),广西南宁人 ,现任广西中医学院副
教授 ,学士学位 ,主要从事中药药效学研究工作.
古钩藤镇痛抗炎药理作用的实验研究
张兴燊 , 周　芳 , 廖月葵 , 李　丽 , 熊靖云 , 蓝国亮 , 陈武棠 , 韦江惠 , 覃莉萍 , 梁　飞
(广西中医学院 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 研究古钩藤水煎液的镇痛抗炎药理作用。 方法 采用小鼠热板法和扭体法镇痛实验 , 观察古钩藤水煎液的
镇痛作用 , 观察对小鼠毛细血管通透性和二甲苯对小鼠耳廓肿胀的影响 , 观察其抗炎作用。结果 古钩藤水煎液能显著
提高小鼠痛阈值 , 降低毛细血管通透性 , 抑制由二甲苯所致的炎症反应 ,可显著减轻小鼠耳廓肿胀。结论 古钩藤水煎剂
有明显的镇痛和抗炎作用。
关键词:古钩藤;　镇痛抗炎;　药理作用
中图分类号:R285. 5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2007)07-1603-02
A Research on Analges ia and Anti- in flammatory E ffects ofGuGou Teng
ZHANG X ing-shen, ZHOU Fang, LIAO Yue-ku i, L I li, X IONG J ing-yun , LAN G uo-liang, CH EN W u-tang,
WE I Jiang-hu i, Q IN li-ping, L IANG Fei
(Guangx i Traditiona lCh ineseMed ica lUniversity, Nanning 530001, China)
Abstract:Objective To study the anti-inflamm atory and ana lgesia actions o f the Ch inese m ed icine Gu Gou Teng so lu tion.
M ethods The e ffect o fGu Gou Teng so lu tion on analgesia wa s observed w ith the re sponse of w rithe s and ho t - p la te te sts. The
e ffec t of anti - in flamma tion was observed bym ice inflamm a tion m ode ls caused by dim e thy benzene and m icem ode ls w ith re info rce
perm eab ility o f abdom ina l cav ity capillary caused by acetic ac id. R esults Gu Gou Teng so lution had a p rom inent analgesia e ffec.t
It cou ld restra in the capilla ry perm eability re su lted from im flamm a tion by dime thybenzene. Conclusion Gu Gou Teng so lu tion ha s
significan t effec ts of ana lgesia and an ti - inflamm a to ry on experimenta lm ice.
Key words:Gu Gou Teng;　Anti-inflamm ation and ana lgesic te st;　Pharm aco logy
　　古钩藤又名海上霸王 、白叶藤 、牛角藤 、大暗消等等 , 为萝摩
科植物古钩藤 Cryptolepis buchananiiRoem . et Schult的地上部分。
多生于阳坡 , 攀援于其他树上 , 分布于广东 、广西 、云南 、贵州等
地。具有舒筋活络 , 消肿止痛 ,解毒等功效 , 用于治疗腰痛 、腹痛 、
跌打损伤 、骨折 、痈疮 、癣等疾病 [ 1] 。 目前 , 镇痛抗炎作用的药物
多为西药 , 且副作用多 ,而中草药古钩藤民间使用也有这方面的
作用 , 应该是值得研究 、开发的镇痛抗炎药 ,国内外尚无对其这方
面药理作用研究的详细报道。本科技研究小组对古钩藤的镇痛
抗炎作用进行了实验研究 , 旨在对其进一步开发和临床应用提
供一定的理论依据。
1　材料
1. 1　动物 小鼠 , 雌雄兼用 ,体重(20±2) g, 均由广西中医学院
实验动物中心提供 ,动物证号 1104, 根据实验性质和性别分笼喂
养 , 自由采食饮水。
1. 2　仪器 台式离心机;XZB-2B型自控温度热板仪 , 山东省医
学科学院设备供应维修站制造 , 设备号为:3-109-1-7-6;722型光
栅分光光度计 ,上海第三分析仪器厂 , 设备号为:3-109-4-4-93
1. 3　药品与试剂 干燥古钩藤 , 采自广西百色地区田林县郊外;
硫酸罗通定注射液 ,广东省博罗先锋药业集团有限公司生产 , 批
号 020902;醋酸地塞米松 , 浙江仙琚制药股份有限公司生产 , 批
号 040405。
试剂:醋酸 , 长春市化学试剂厂。伊文思蓝 , 上海化学试剂
公司进口分装 , 批号 F-9800。二甲苯 ,齐鲁石化公司研究院试剂
公司。生理盐水 , 济南永宁制药厂。
1. 4 　制备古钩藤水煎剂 古钩藤根和茎各 200 g, 加 8倍水浸泡
1 h, 煎煮 40 m in, 煎煮 2次 ,合并药液过滤浓缩至 200 m l(1. 00g /
m l),按所需要的剂量配成根溶液和茎溶液大剂量均为 30 g /kg,
小剂量均为 15 g /kg,以备用。
2　方法和结果
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2007 VOL. 18 NO. 7 时珍国医国药 2007年第 18卷第 7期