全 文 ：收稿日期：2011- 03- 07
作者简介：陈晓霞（1980-），女，在读博士，主要从事中药炮制及药物分析
工作。
导师简介：贾天柱，男，教授，主要从事中药炮制工作。
文章编号：1002-1124（2011）05-0024-03
Sum 188 No.5
化 学 工 程 师
Chemical Engineer 2011年第 5期
分
析
测
试
百部为止咳平喘类药物，具有润肺下气止咳，
杀虫之功效[ 1 ]。2010版《药典》收载了直立百部、蔓
生百部和对叶百部 3种。但是对 3种百部的定性鉴
别和含量测定均无记录。究其原因主要是百部品种
杂多，且其化学成分差异大，即使是同种百部，其地
域差别引起的化学成分变化也十分显著[2- 4 ]。对于百
部止咳、杀虫功效研究较多，文献报道其主要有效
成分为生物碱类化合物[ 5，6 ]。目前，已经在百部中分
离出 100多种生物碱，其中部分生物碱具有止咳、
杀虫活性，但事实上百部用来止咳、杀虫时是其总
碱共同的作用。而目前对于百部总碱测定方法的研
究文献很少，仅对蔓生百部总碱测定方法研究比较
全面[7 ]。对叶百部和蔓生百部化学成分区别很大，对
于其总碱含量测定方法未见报道，本论文分别对测
定总生物碱最常用那个的 3种方法进行了比较研
究，旨在寻找对叶百部总碱含量测定最适合的方
法，以期能够为《药典》提供依据。
1 实验部分
1.1 仪器、试剂与样品
岛津 U3100紫外可见分光光度计；粉碎机（无锡
新标）；超声仪（深圳迈瑞生物）；旋蒸仪（上海亚荣）。
百部药材购于安徽毫州药材市场，产地为湖
北，经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定为对叶百
部。对叶百部碱对照品购于上海源叶有限公司。雷
氏盐（A.R.上海化学试剂公司)；溴麝香草酚蓝（A.R.
上海化学试剂公司)；溴甲酚绿（A.R.上海化学试剂
公司)；水为双蒸水。
雷氏盐法样品溶液制备：药材粉末 5.0032g，加
入 0.1% HCl超声处理 40min,过滤定容至 50 mL。
酸性染料法：取百部粗粉 0.5026 g，置 100mL
具塞三角烧瓶中，精密加入 50mL甲醇，称定重量，
超声提取 30min，放冷，补足甲醇的重量，过滤，滤液
旋蒸至干，加入一定体积的 4% HCl 以 35%NH3·
H2O调解溶液 pH值至 9~10，沉淀用 CHCl3萃取后
定容至 10mL。
2 方法与结果
对叶百部中总生物碱含量测定方法研究
陈晓霞，张 旭，沈晓庆，贾天柱 *
（辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 116600）
摘 要：对 3种测定对叶百部中总生物碱方法进行了研究比较，结果表明酸性染料溴麝香草酚蓝法灵敏
度最好。以对叶百部碱为对照品，考察了溴麝香草酚蓝法的线性、稳定性、重现性、加样回收率，均符合紫外吸
收法相关规定。以该法测定了对叶百部生品及蜜炙品中总碱的含量，为完善《药典》对叶百部总碱含量测定提
供依据。
关键词：对叶百部；总碱测定
中图分类号：TQ460.7 文献标识码：A
Study on the method to determining of total alkaloids of Stemona tuberose Lour
CHEN Xiao-xia，ZHANG Xu，SHEN Xiao-qing，JIA Tian-zhu*
（College of Pharmacy, Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China）
Abstract：Comparing to three methods on determination total alkaloids of Stemona tuberose Lour, the result
showed bromothymol blue method having the best sensitivity.Using tuberostemonine as the reference substance, the
line range, stability, reproduction and recovery of the bromothymol blue method were excellent for UV determina－
tion. By this method, the total alkaloids of crude and processed Baibu were detected, which would givesupplying
for the pharmacopeia.
Key words：Stemona tuberose Lour；determination of total alkaloids
DOI:10.16247/j.cnki.23-1171/tq.2011.05.001
2.1 试验方法
2.1.1 雷氏盐法 取 25mL雷氏盐样品溶液，加入
新鲜配制的 2%雷氏盐溶液 10mL,置冰箱 4℃过夜，
沉淀在 3000r·min-1离心 10min，弃去上清液，沉淀
以冰水洗涤至无颜色，加入 5mL丙酮溶解，于紫外
可见分光光度计上在 400~600nm范围内扫描测定
其最大吸收波长为 529nm，在该波长下测定其吸光
度值为 0.525。
2.1.2 酸性染料法 酸性染料测定生物碱方法的
原理是酸性染料与生物碱在酸性条件下可以生成
稳定的配合物，其生成物与缓冲液的酸度及酸性染
料加入量有关系。常用的测定生物碱的酸性染料主
要有溴麝香草酚蓝法和溴甲酚绿法，因此，本实验
分别对这两种方法进行了考察。
2.1.2.1 pH值影响 显色反应条件中 pH值条件和
显色剂用量是主要的影响因素，本实验对酸性染料
法中两种方法分别进行了该两个实验条件的选择。
实验过程如下：取 0.3mL酸性染料样品，加入 5mL
不同 pH值磷酸缓冲盐，3mL酸性染料溶液，一定体
积 CHCl3萃取二次，每次振摇 30s，静置 10min，取
CHCl3层定容到 10mL，在 412nm下测定其吸光度
值。结果见表 1。
表 1 不同 pH值对酸性染料法测定百部总生物碱
吸光度值的影响
Tab.1 Effect of pH value on the A of determination of total
alkaloids of Stemona tuberose Lour by acid-dye methods
由表 1可见，A1为溴麝香草酚蓝法测得吸光度
值，A2为溴甲酚绿法测得吸光度值，说明 pH值为 6.
5是溴麝香草酚蓝法测定的最佳酸度条件，pH值为
5.0是溴甲酚绿法测定的最佳酸度条件。
2.1.2.2 显色剂用量 取 0.3mL酸性染料样品，分
别加入上述实验条件最佳 pH值缓冲液 5mL，改变
酸性染料的体积，其他步骤同上，测定其相应的吸
光度值，结果见图 1。
从图 1中可以看出，两种方法均是加入 3mL酸
性染料后其吸光度基本稳定，因此，选用加入 3mL
为显色剂加入的最佳体积。
图 1 酸性染料体积对显色反应吸光度值影响
Fig.1 Effect of acid-dye volume on the UV detection
2.2 3种测定方法灵敏度比较
本实验考察了 3种方法测定的灵敏度，以△A/
△C表示，实验样品为上述实验方法中样品，实验过
程同上述实验。实验结果见表 2。
表 2 不同测定方法灵敏度比较
Tab.2 The sensitivity of different methods
由表 2结果表明，3种测定百部生物碱测定方
法中溴麝香草酚蓝法灵敏度最高，有可能适合测定
对叶百部中总碱的量。
2.3 对叶百部总碱含量测定
上述实验中我们考察了不同方法测定百部总
碱的灵敏度，但是在实际测定过程中除了灵敏度
外，实验方法的线性、稳定性等也很重要。本实验以
对叶百部碱为对照品，按照溴麝香草酚蓝法测定总
碱的过程，进行了系统适用性考察，并对样品的生
品和制品进行了总碱含量测定。
2.3.1 对叶百部碱标准曲线 精密称取对叶百部
碱对照品 1.36mg，以 CHCl3配置成 10mL溶液,分别
吸取 0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3mL对照品溶液，按照
溴麝香草酚蓝法，测定吸光度值，绘制标准曲线，表
明对叶百部碱在 4.08~17.08μg·mL-1 范围内成线
性，其相关系数 R为 0.9991。
pH值
4.0
5.0
6.0
6.5
7.0
7.5
A1
0.321
0.589
0.621
0.747
0.288
0.101
A2
0.352
0.476
0.357
0.258
0.201
0.098
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
A
0 1 2 3 4 5 6
V/mL
溴麝香草酚蓝法
溴甲酚绿法
实验方法
雷氏盐法
溴麝香草酚蓝法
溴甲酚绿法
样品浓度 /g·mL-1
0.5003
0.4548
0.0025
0.0020
0.0025
0.0020
吸光度 /A
0.525
0.461
0.747
0.702
0.476
0.443
灵敏度 / mL·g-1
1.4
90
66
陈晓霞等：对叶百部中总生碱含量测定方法研究2011年第 05期 25
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
A
3 8 13 18
C/μg·mL-1
y=0.0483x- 0.0016
R=0.991
样品
生品
制品
含量 /%
1.03 1.07
0.78 0.76
平均含量 /%
1.05
0.77
图 2 对叶百部碱标准曲线
Fig.2 The standard curve of tuberostemonine
2.3.2 稳定性考察 取 0.7mL对叶百部碱对照品
溶液，按照溴麝香草酚蓝法显色，隔 30min 测定一
次其吸光度值，连续测定 4h，其 RSD为 1.9%，说明
该方法稳定性良好。
2.3.3 精密度考察 精密吸取对照品溶液 5份，按
溴麝香草酚蓝法操作并测定吸光度，结果：吸光度
的 RSD为 1.0％（n=6）。
2.3.4 重现性试验 取药材样品，按供试品溶液的
制备，分别测定吸收度，计算其 RSD为 2.3％（n=6）。
2.3.5 回收率试验 精密称取重现性实验的百部
粗粉，精密加入对叶百部碱按溴麝香草酚蓝法制备
并测定测定吸收度，带入回归方程，计算总生物碱
含量，得平均为回收率 98.5％ ，RSD（％）为 1.2％
（n=6）。
2.3.6 样品含量测定 百部蜜制品按照 10版《药
典》上百部蜜制法制备[ 2 ]，百部生品及蜜制品样品按
照溴麝香草酚蓝法实验方法制备并平行测定两次，
代入回归方程计算总生物碱含量，见表 3。
表 3 百部生品及制品总生物碱含量测定
Tab.3 The centent of total alkaloids in crude
and processed Baibu
3 结论
考察了 3种不同测定百部生物碱的方法，结果
表明溴麝香草酚蓝法灵敏度最高，以对叶百部碱为
标准品，考察了该法的线性、稳定性、精密度、重现
性等，结果表明该方法线性范围宽，稳定性好，精密
度重现性及回收率均符合紫外可见分光光度法规
定。以该方法测定了对叶百部生品和制品的百部总
碱含量，结果表明，制品的生物碱含量比生品含量
低，与文献报道相符[ 8 ]，说明溴麝香草酚蓝法适合百
部中总生物碱含量测定，能为补充《药典》百部碱含
量测定提供一定依据。
参 考 文 献
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［2］ 刘军,郑霞.不同产地对叶百部中生物碱差异［J］.黑龙江中医
药，2009,（3）：45- 46.
［3］ Shu- Ying Peng, Ting Shi, Ya- Zhou Wang, et al. Rapid structural
determination of alkaloids in a crude extract of Stemona saxorum by
high- performance liquid chromatography/electrospray ionization
coupled with tandem mass spectrometry［J］. Rapid Commun. Mass
Spectrom，2009，（23）：3621- 3631.
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Ruedeekorn Wiwattanapatapee1.Quantitative HPLC Determination
and Stability Studies of Pyridostemin in Extracts and Water Dis-
persibleGranuleFormulationsofStemonacurtisii［J］.Chromatographi-
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Roots of Stemona sessilifolia［J］.Chemistry & Biodiversity, 2008,
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26 2011年第 05期陈晓霞等：对叶百部中总生碱含量测定方法研究