全 文 ：收稿日期:2006 - 02 - 22.
基金项目:恩施州科技局重点科研项目(2003A0507).
作者简介:武芸(1971 - ),女 ,硕士,主要从事天然产物的提取和分离等方面的相关工作.
五鹤续断中总生物碱的质量分数分析
武　芸 1 ,丁　莉 2 ,张　驰1
(1. 湖北省生物资源保护与利用重点实验室 湖北民族学院生物技术研究所 ,湖北 ,恩施 445000;
2. 湖北民族学院 生命科学与技术学院 , 湖北 恩施 445000)
摘要:采用索氏提取法对不同生长时期的五鹤续断中总生物碱进行提取并分离 , 探讨用紫外分光光度法测定
总生物碱质量分数的方法.结果表明:随着生长年限的增加 , 其根中总生物碱的质量分数积累呈现出递增趋势. 但
是茎 、叶中总生物碱的质量分数很低. 因此 ,三年生的五鹤续断根为较好的药材 , 具有较好的药用价值和开发价值.
关键词:五鹤续断;总生物碱;紫外分光光度法
中图分类号:Q946. 88 文献标识码:A 文章编号:1008 - 8423(2006)02 - 0199 -03
五鹤续断属于川续断科植物(D ipsacus asper),多年生草本 ,药用部位为其干燥根 [ 1] .五鹤续断经过加工
后具有根条粗 ,无头尾 ,质柔软 ,墨绿色(俗称乌梅色)菊花心 ,气微 ,味微苦 ,微甜而涩的品质特色 ,尤其是
“乌梅花心”的特征享誉国内外 [ 2] .五鹤续断生长在海拔 1 200 ～ 2 500m的高寒地区 ,具有耐严寒 、喜湿润等
特征 ,无病虫害等特点 ,是上等的中药原料.其有效成分主要有皂甙 、挥发油类 、生物碱类 、维生素 E和蔗糖
等 ,它具有补肝益肾 ,续接筋骨 ,抗骨质疏松 ,止血安胎等功效 ,临床上主要用于治疗腰膝酸软 、跌打损伤 、骨
折 [ 3] 、腰椎骨质增生 、先兆性流产和习惯性流产 [ 4]等症状[ 5] .
随着世界范围内 “回归自然 ”热潮的兴起 ,天然药物及中药的需求会逐渐扩大.人们非常关注生活质量 ,
尤其是关注与健康长寿有关的医疗和保健消费.因此 ,中药及天然药物产业蕴涵着巨大的市场潜力.生物碱
是天然产的含氮有机化合物 ,是一类存在于中药中的重要化学成分.五鹤续断中的总生物碱 ,在临床上可用
来治疗先兆性流产和习惯性流产等症状 [ 4] ,其作用机理其机理主要在于五鹤续断总生物碱能显著抑制子宫
平滑肌的自发收缩活动 ,因此 ,本文对五鹤续断总生物碱进行了提取 、分离和测定等基础性分析 ,并对其方法
进行了探讨 ,为五鹤续断的综合开发与利用提供理论基础.
1　材料与方法
1. 1　取样及样品预处理
本实验所用五鹤续断均采自恩施自治州鹤峰县走马镇万寺坪道地药材五鹤续断 GAP研究及种植基地 ,
采用随机取样的方法 ,分别取一年生 、二年生 、三年生和野生的新鲜植株各 10株 (其根生长三年以后基本上
都已木质化 ,不能作为药用 ),用无离子水将其根 、茎 、叶分别洗净 ,切碎后放在 105℃的烘箱里杀青 30m in至
1 h后 ,于 80℃下烘至恒重 ,将各样品用粉碎机打磨成粉末 ,过 200目筛 ,装于试剂瓶中 ,贴上标签备用.
1. 2　主要仪器及试剂
索氏提取器 , 756MC -紫外分光光度计 , PHS - 3C酸度计 , SHZ -D循环水式真空泵 ,电热恒温干燥箱 ,
电子天平(上海天平仪器厂 ),粉粹机 ,水浴锅等.
咖啡因 ,溴甲酚绿 ,邻苯二甲酸氢钾 ,无水乙醇 ,氯仿 ,乙醚等试剂均为分析纯.
1. 3　实验方法
药典[ 6]记载总生物碱质量分数的测定采用氨水碱化后氯仿提取 ,本实验在此原理的基础上进行.
采用索氏提取法对五鹤续断中总生物碱进行提取并分离. 步骤:准确称取五鹤续断干粉 25 g装入索氏
第 24卷第 2期　　　　 　　　　　　　　　湖北民族学院学报(自然科学版)　　　　　　　　　 　　　　Vo.l 24　No. 2
2006年 6月　　　　　　　　　 Journa l o fHubei Institute for Na tionalities(Natura l Science Edition)　　　　　　　　　 Jun. 2006
提取器中 ,用 90%的无水乙醇 100m l进行提取.加热提取 10 h后 ,将提取物用蒸馏水稀释到 200m l,然后用 6
mo l /L的盐酸溶液调节其 pH值为 3 ～ 3. 5,搅拌均匀后 ,抽滤 ,再往所得滤液中加入体积分数 10%的氨水 ,并
调节其 pH值为 8 ～ 9,用氯仿萃取两次 ,每次 25m .l将所得氯仿萃取液蒸馏后所得的黄色液体即为溶有生物
碱的粗品.
将生物碱粗品溶于 200m l蒸馏水中 ,用 6mo l /LHC l溶液调节其 pH值为 3 ～ 3. 5,然后用乙醚洗涤两次 ,
每次 10m l,弃去乙醚层 ,然后在水层中用体积分数 10%的氨水调节 pH值为 10左右.再用氯仿萃取二次 ,方
法同上.所得氯仿液进行蒸馏即可得总生物碱精品 ,将其定溶为 4m l待测 ,采用紫外分光光度法进行测定.
2　结果与分析
2. 1　标准曲线的绘制
2. 1. 1　标准溶液的配制　配制浓度为 7. 2×10- 4mo l /L, pH值为 4.42的溴甲酚氯缓冲液:用电子天平精密
称取溴甲酚氯 125mg,用浓度为 0.2mo l /LN aOH溶液 12.50m l溶解后 ,加入邻苯二甲酸氢钾 2.55 g,加少量
蒸馏水溶解后 ,转移至 250m l容量瓶中.用蒸馏水稀释至刻度 ,摇匀后校正其 pH值为 4.42;配制浓度为 1.0
mg /m l的咖啡因溶液:用电子天平精密称取咖啡因 0.5 g,加少量蒸馏水溶解后 ,转移至 500m l容量瓶中并定
溶即可.
2. 1. 2　最大吸收波长的选择　分别准确移取五鹤续断总生物碱精品液和咖啡因溶液各 0. 08m l到 10m l的
比色管中 ,再分别加入 1m l溴甲酚氯缓冲液和 2m l无水乙醇 ,用蒸馏水稀释至刻度 ,摇匀 ,用空白对照液作
参比 ,在 200 ～ 700 nm波长范围内进行光谱扫描 ,结果前两者在 516 nm处均有最大吸收值 ,而空白对照液在
516 nm处无最大吸收值. 可见 ,咖啡因与溴甲酚绿形成的络合物和所提取的总生物碱与溴甲酚绿形成的络
合物的最大吸收峰均为 516 nm ,因此 ,本实验选用 516 nm作为测定波长.
2. 1. 3　标准曲线的绘制　以咖啡因溶液作为标准液 ,按照上述方法加入无水乙醇和溴甲酚氯缓冲液 ,以试
剂空白作对照 ,在波长为 516 nm处测定其吸光度 ,结果得出回归方程为 y=0. 803 2+0. 351 7x,相关系数 r=
0. 997 8,溶液浓度与其吸光度有良好的线性关系.
2. 2　五鹤续断总生物碱测定方法的探讨
2. 2. 1　提取时间对总生物碱质量分数的影响　采用索氏提取法提取总生物碱的过程中 ,提取时间的长短与
所得到的生物碱总量有很大的关系. 按照上述实验方法 ,将不同时间下提取所得到的总生物碱用紫外分光光
度法测定 ,其结果见图 1.由此可知 ,索氏提取 10 h时其吸光度最大.所得总生物碱量最多 ,提取效率最高. 因
此 ,本实验选择提取时间为 10 h.
2. 2. 2　提取总生物碱酸度的影响　采用紫外分光光度法测定总生物碱的过程中 ,酸度值对其测定结果也有
影响. 用索氏提取法加热提取 10 h,将所得的浸膏用蒸馏水稀释至 500m l,将其平均分成 5等份 ,每份 100m l,
用浓度为 6mo l /LHC l溶液分别调至不同的酸度(用 PHS - 3C型酸度计测定其 pH值 ),然后分别抽滤.再向
滤液中加入体积分数 10%的氨水 ,使其 pH值为 8. 92(用酸度计控制 ). 然后按照实验方法分离 、提取 、精制
生物碱.测定其吸光度 ,结果表明(见图 2):当 pH值为 3. 03时其吸光度最大 ,因此 ,本实验酸化值选择 pH
为 3 ～ 3. 5.
图 1　提取时间对其总生物碱质量分数的影响 图 2　pH值对总生物碱质量分数的影响
F ig. 1　The extraction and sepa ra tion o f a lkaloids
from Wu -H e D ipsacus in d iffe rent hours
F ig. 2　The ex trac tion and separa tion o f a lka lo ids
from W u -H e D ipsacus in different pH
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　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　湖北民族学院学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　　 　 　　第 24卷
2. 3　不同生长期的五鹤续断总生物碱的质量分数的分析
研究结果显示:在人工种植的五鹤续断根中 ,三年生根中的总生物碱质量分数大于二年生根中的总生物
碱的质量分数 ,二者又大于一年生根中的总生物碱的质量分数.而野生的五鹤续断根中总生物碱的质量分数
接近人工种植的二年生根中总生物碱的质量分数 ,因为采集的野生根样品的具体生长年限是未知的 ,但从它
们的形态(具有茎和茎生叶 )和根的木质化程度可知 ,它们的生长年限在二年或三年 (见图 3). 这表明:在一
定生长年限内 ,人工种植的不同生长年限的五鹤续断根中总生物碱质量分数的变化具有一定的规律性 ,即随
着生长年限的增加 ,其根中总生物碱的质量分数积累呈现递增趋势.
图 3　五鹤续断总生物碱的平均质量分数
F ig. 3　The con tent o f A lka loids inWu -H e D ipscaus
与其根相比较 ,五鹤续断茎 、叶中总生物
碱的质量分数要低得多 ,这也是五鹤续断药用
部位为根的主要原因之一.这说明:五鹤续断在
生长过程中所形成的总生物碱主要积累在根
部 ,并且三年生根中总生物碱的质量分数最高.
3　讨论
采用索氏提取法提取分离总生物碱的过程
中 ,提取时间 、酸化时的 pH值对其结果都有影响 ,结果显示提取 10 h和 pH 3时为最佳.在用紫外分光光度
法测定五鹤续断中总生物碱的质量分数时 ,溴甲酚绿是良好的显色剂 ,反应快 ,灵敏度高 ,方法简便.
从总生物碱测定结果表明 ,五鹤续断含有丰富的总生物碱 ,而五鹤续断在生长过程中所形成的总生物碱
主要积累在根部 ,随着生长年限的增加 ,其根中总生物碱的质量分数积累呈现递增趋势.可见 ,用于临床中药
材或用于提取五鹤续断总生物碱的原料应以人工种植的三年生的五鹤续断根为最佳.
参考文献:
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[ 4] 　龚晓健 ,季晖 ,王青 ,等.川续断总生物碱对妊娠大鼠子宫的抗致痉及抗流产作用 [ J] .中国药科大学学报 , 1997, 29(6):459 ～ 461.
[ 5] 　全国中草药汇编写组.全国中草药汇编(下册)[M ] .北京:人民卫生出版社 , 2000.
[ 6] 　国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[ S] .北京:化学工业出版社 , 2000.
Analysis of the TotalA lkalo ids Contents ofWu -He
D ipsacus in D ifferentGrow ing Years
WU Yun
1 , D ING Li2 , ZHANG Chi1
(1. Key Laboratory of Bio log ic Pe sou rces R ro tec tion and U tiliza tion o fH ubei P rov ince, Enshi 445000, China;
2. Co llege of Bioscience and Techno logy, H ubei Institute fo rNa tiona lities, Enshi 445000, China)
Abstract:The ex traction and separation o f to tal alka lo ids from Wu -He D ipsacus by continuous ex traction are de-
scribed. Then the ana lysis o f the quan tity o f alka loids is carried ou t by UV me thod. Furthe rmore, the dete rm ination
me thod o f alka lo ids is discussed. Results show the to tal alkalo ids conten ts in crease w ithWu -He D ipsacus grow ing
longer years. But the con tents of alkaloids in the stalk and in the leaves are much lowe r. So theWu -He D ipsacus
roots that have g rown for there yea rs is be tter.
Key words:W u -He d ipsacus;a lkalo ids;UV
201
第 2期　　　　　　　　　　　　　　武　芸等:五鹤续断中总生物碱的质量分数分析