全 文 ：　
复旦学报（医学版）
Ｆｕｄａｎ　Ｕｎｉｖ　Ｊ　Ｍｅｄ　Ｓｃｉ２０１６　Ｓｅｐ．
，４３（５）
　国家自然科学基金（８１３７３８６）；上海市卫生局重点项目（２０１３）
　△Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ　Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｃｋｚｘｙ＠１２６．ｃｏｍ
掌叶半夏提取物对宫颈癌荷瘤小鼠脾脏免疫的作用
黄海霞　张明星　张　萌　卢　冲　彭　靖　李桂玲 △
（复旦大学附属妇产科医院中西医结合科－上海市女性生殖内分泌相关疾病重点实验室　上海　２０００１１）
【摘要】　目的　观察掌叶半夏提取物（Ｐｉｎｅｌｉａ　ｅｘｔｒａｃｔｓ，ＰＥ）对 ＨＰＶ＋ＴＣ－１荷瘤小鼠Ｔ细胞免疫应答的作用。
方法　宫颈癌荷瘤小鼠建模后随分成４组：机对照组（生理盐水，０．２　ｍＬ／ｄ，灌胃）、ＰＥ低剂量组（１０　ｍｇ／ｋｇ，０．２
ｍＬ／ｄ，灌胃）、ＰＥ高剂量组（２０　ｍｇ／ｋｇ，０．２　ｍＬ／ｄ，灌胃）、ＣＤＤＰ组（４　ｍｇ／ｋｇ，０．２　ｍＬ／３　ｄ，腹腔注射）。给药期间
测瘤、描绘肿瘤生长曲线，２１天后处死小鼠并计算抑瘤率，流式细胞术检测脾脏ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ细细胞以及
Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｒｅｇ和Ｔｈ１７亚群的比例。结果　抑瘤率：ＣＤＤＰ组（２９．８２％）＞ＰＥ高剂量组（２１．７３％）＞ＰＥ低剂量
组（８．２３％）；ＰＥ高剂量组和ＣＤＤＰ组ＣＤ４＋和ＣＤ８＋Ｔ细胞比例较阴性对照组均显著增多（Ｐ＜０．０１）；ＰＥ两组
Ｔｈ１比例显著升高、Ｔｈ２和Ｔｈ１７比例显著下降（呈现剂量依赖性），Ｔｒｅｇ亚群分泌ＴＧＦ－!减少，而ＦＯＸＰ３水平
增高。结论　ＰＥ能通过诱导ＣＤ４＋Ｔ细胞向Ｔｈ１型分化，抑制Ｔｈ１／Ｔｈ２漂移，改善Ｔｒｅｇ和Ｔｈ１７的比例，发挥
抗肿瘤免疫作用。
【关键词】　掌叶半夏提取物；　宫颈癌；　ＴＣ－１细胞株；　细胞免疫
【中图分类号】　Ｒ７１１．７４，Ｒ７３７．３３　　【文献标识码】　Ａ　　　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－８４６７．２０１６．０５．００５
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｐｉｎｅｌｉａ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｎ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｄｓ　ｏｆ
ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｃａｎｃｅｒ－ｂｅａｒｉｎｇ　ｍｉｃｅ
ＨＵＡＮＧ　Ｈａｉ－ｘｉａ，ＺＨＡＮＧ　Ｍｉｎｇ－ｘｉｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｍｅｎｇ，ＬＵ　Ｃｈｏｎｇ，ＰＥＮＧ　Ｊｉｎｇ，ＬＩ　Ｇｕｉ－ｌｉｎｇ△
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　ａｎｄ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃｓ　ａｎｄ　Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｆｕｄａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ－
Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｅｍａｌｅ　Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ　Ｒｅｌａｔｅｄ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０００１１，Ｃｈｉｎａ）
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　Ｐｉｎｅｌｉａ　ｅｘｔｒａｃｔｓ（ＰＥ）ｉｎ　Ｔ　ｃｅｌｓ　ｉｍｍｕｎｅ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｏｆ　ｔｈｅ
Ｃ５７ＢＬ／６　ｍｉｃｅ　ｂｅａｒｉｎｇ　ＨＰＶ＋ＴＣ－１　ｔｕｍｏｒ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ａｆｔｅｒ　ｒａｎｄｏｍｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｅｒｖｉｃａｌ
ｃａｎｃｅｒ－ｂｅａｒｉｎｇ　ｍｉｃｅ，ｔｕｍｏｒ　ｖｏｌｕｍｅ　ｗａｓ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｗａｓ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ．Ａｆｔｅｒ
ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ　ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｔｕｍｏｒ，ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　４　ｇｒｏｕｐｓ：ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（ｎｏｒｍａｌ
ｓａｌｉｎｅ，０．２　ｍＬ／ｄ，ｇａｖａｇｅ），ＰＥ－ｌｏｗ　ｇｒｏｕｐ（１０　ｍｇ／ｋｇ，０．２　ｍＬ／ｄ，ｇａｖａｇｅ），ＰＥ－ｈｉｇｈ　ｇｒｏｕｐ（２０　ｍｇ／ｋｇ，０．２
ｍＬ／ｄ，ｇａｖａｇｅ），ａｎｄ　ＣＤＤＰ　ｇｒｏｕｐ（４　ｍｇ／ｋｇ，０．２　ｍＬ／３ｄ，ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ）．Ｂｅｓｉｄｅｓ，ｔｈｅ　ｊｏｂｓ　ｏｆ　ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ
ｔｈｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒｓ　ａｎｄ　ｄｒａｗｉｎｇ　ｔｕｍｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ　ｗｅｒｅ　ｄｏｎｅ．Ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ
ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ　ａｆｔｅｒ　ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ　ｄｏｓｉｎｇ　ｆｏｒ　２１　ｄａｙｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅｓ　ｏｆ　ＣＤ４＋，ＣＤ８＋ Ｔ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　Ｔｈ１，Ｔｈ２，
Ｔｒｅｇ　ａｎｄ　Ｔｈ１７　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｓｐｌｅｅｎ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ．　Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｒｄｅｒ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ
ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ　ｗａｓ：ＣＤＤＰ　ｇｒｏｕｐ（２９．８２％）＞ＰＥ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ （２１．７３％）＞ＰＥ　ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ
（８．２３％）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ　ｏｆ　ＣＤ４＋ａｎｄ　ＣＤ８＋Ｔ　ｃｅｌｓ　ｏｆ　ＰＥ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ
ａｎｄ　ＣＤＤＰ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜０．０１）．Ｉｎ　ｂｏｔｈ　ＰＥ　ｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｔｈ１　ａｎｄ
Ｔｈ１７　ｗｅｒｅ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ，ｗｈｉｌｅ　Ｔｈ２　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ（ｉｎ　ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ）．Ｔｒｅｇ
ｓｕｂｓｅｔｓ　ｓｅｃｒｅｔｅｄ　ｌｅｓｓ　ＴＧＦ－β，ｗｈｉｌｅ　ＦｏｘＰ３ｌｅｖｅｌ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ．　Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｔｈｒｏｕｇｈ　ｉｎｄｕｃｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
４３５
　黄海霞，等．掌叶半夏提取物对宫颈癌荷瘤小鼠脾脏免疫的作用
ｏｆ　ＣＤ４＋ Ｔ　ｃｅｌｓ　ｔｏ　Ｔｈ１　ｍｏｄｅｌ，ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｄｒｉｆｔ　ｏｆ　Ｔｈ１／Ｔｈ２　ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｔｒｅｇ　ａｎｄ　Ｔｈ１７，ＰＥ　ｃｏｕｌｄ　ｐｌａｙ　ａｎ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ．
【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　ｐｉｎｅｌｉａ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒａｃｔｉｏｎ；　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｃａｎｃｅｒ；　ＴＣ－１　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ；　ｃｅｌｕｌａｒ　ｉｍｍｕｎｉｔｙ
＊Ｔｈｉｓ　ｗｏｒｋ　ｗａｓ　ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ（８１３７３８６）ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｋｅｙ　Ｐｒｏｊｅｃｔ　ｏｆ　Ｓｈａｎｇｈａｉ
Ｍｕｎｉｃｉｐａｌ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｂｕｒｅａｕ（２０１３）．
　　宫颈癌是最常见的妇科恶性肿瘤，且发病年龄
逐渐年轻化，严重威胁女性的生命健康。研究表明
高危 型 人 乳 头 瘤 状 病 毒 （ｈｉｇｈ　ｒｉｓｋ　ｈｕｍａｎ
ｐａｐｉｌｏｍａｖｉｒｕｓ，ＨＲ－ＨＰＶ）是宫颈癌发生的最主要
病因，其中大多数宫颈鳞癌与 ＨＰＶ１６型感染有关。
多数宫颈 ＨＰＶ感染可通过机体免疫应答而被清
除，但 ＨＲ－ＨＰＶ能够通过不同方式逃避宿主的免
疫识别，荷瘤机体出现免疫抑制和免疫耐受，主要表
现为脾脏内 ＣＤ４＋和 ＣＤ８＋Ｔ 淋巴细胞比值下
降［１－２］。因此，如何激活和增强机体免疫系统，使其
特异性地抑制肿瘤细胞的生长，是目前肿瘤领域研
究者关注的重点和难点问题。本研究重点关注掌叶
半夏脂溶性提取物（Ｐｉｎｅｌｉａ　ｅｘｔｒａｃｔｓ，ＰＥ）对宫颈癌
荷瘤小鼠的免疫学影响。ＣＤ４＋Ｔ细胞是效应Ｔ细
胞的重要成分，根据所产生的细胞因子和效应细胞
的生物功能特征，分为 Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｒｅｇ和 Ｔｈ１７亚
群。本研究选用ＩＦＮ－和 Ｔ－ｂｅｔ代表 Ｔｈ１、ＩＬ－４，
ＧＡＴＡ３代 表 Ｔｈ２、ＩＬ－１７，ＲｏＲ ｔ代 表 Ｔｈ１７［３］，
ＴＧＦ－!和ＦＯＸＰ３代表调节性Ｔ细胞（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　Ｔ
ｃｅｌ，Ｔｒｅｇ）［４］，通过流式细胞术分析ＰＥ治疗后荷瘤
机体Ｔ细胞亚群的改变，推测ＰＥ能够通过增强有
效的Ｔ细胞免疫应答来抑制宫颈癌的生长，为ＰＥ
用于临床宫颈病变的防治提供实验依据。
材 料 和 方 法
实验材料与试剂　细胞株：ＴＣ－１细胞［ＨＰＶ１６
Ｅ６、Ｅ７和ｒａｓ基因共转化的Ｃ５７ＢＬ／Ｃ（Ｈ－２ｂ）小鼠
肺上皮细胞］由中国科学院上海细胞库提供。动物：
６周龄雌性Ｃ５７ＢＬ／６小鼠购自中科院上海实验动
物中心，动物合格证号：ＳＣＸＫ（沪）２０１２－０００２，饲
养于复旦大学附属妇产科医院动物实验科学部
（ＳＰＦ级）。药物：ＰＥ由中科院上海药物所天然药
化研究室赠送，用二甲基亚砜（ｄｉｍｅｔｈｙｌｓｕｌｆｏｘｉｄｅ，
ＤＭＳＯ，美国Ｓｉｇｍａ公司，Ｄ－２６５０）溶解后稀释于无
菌 生 理 盐 水 中，现 配 现 用；顺 铂 ［ｃｉｓ－
ｄｉａｍｉｎｅｐｌａｔｉｎｕｍ （ＩＩ）ｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ，ＣＤＤＰ，美 国
Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ公司，批号：４７９３０６］，无菌生理盐水
稀释后用。主要耗材及试剂：超净工作台（香港
Ｈｅａｌ　Ｆｏｒｃｅ公司，ｓａｆｅ－１２００），二氧化碳培养箱（香港
Ｈｅａｌ　Ｆｏｒｃｅ公司，９０／ＨＦ２４０），全自动细胞计数仪
（美国Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司，ＴＣ－１０），微量电子天平（德国
Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司，ＢＳＡ２２４Ｓ），绝对原点游标卡尺（桂
林广陆数字测控股份有限公司，型号：１１１－１０１－４０），
Ｂｅｃｋｍａｎ流式细胞仪。ＲＰＭＩ１６４０细胞培养液、磷
酸盐缓冲液（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ，ＰＢＳ）、胎
牛血清、胰蛋白酶、二抗（青－链霉素）均购于美国
ＧＩＢＣＯ公司。免疫荧光抗体：ＦＩＴＣ鼠抗 ＣＤ４５，
ＰｅｒＣＰ鼠抗ＣＤ４，ＡＰＣ鼠抗ＣＤ８，ＢＶ４２１鼠抗ＩＦＮ－
γ，ＡＰＣ 鼠抗ＩＬ－４，ＰＥ 鼠抗ＩＬ－１７，ＢＶ４２１ 鼠抗
ＴＧＦ－β，ＰＥ－Ｔｅｘａｓ鼠抗 Ｔ－ｂｅｔ，Ａｌｅｘａ　Ｆｌｕｏｒ?６４７鼠
抗ＧＡＴＡ３，ＰＥ鼠抗ＲｏＲγｔ，ＢＶ４２１鼠抗ＦＯＸＰ３，
Ｃｅｌ　Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　Ｃｏｃｋｔａｉｌ（含 ＢＦＡ），ＦＯＸＰ３　Ｆｉｘ／
Ｐｅｒｍ缓冲液（４ｘ）均购于北京达科为生物技术有限
公司。免疫组化抗体：鼠抗Ｔ－ｂｅｔ（ａｂ９１１０９）、兔抗
ＧＡＴＡ３（ａｂ１９９４２８）、兔抗ＲＯＲｇａｍａ（ａｂ７８００７）和
鼠抗Ｆｏｘｐ３（ａｂ２００３４）均为英国Ａｂｃａｍ公司产品。
细胞培养 　取出冻存于－８０℃冰箱中的宫颈
癌ＴＣ－１细胞，快速复苏后用ＲＰＭＩ　１６４０培养液（含
１０％胎牛血清 ＋１％ 二抗）培养，置于 ５％ＣＯ２、
３７℃、饱和湿度孵箱常规培养，待细胞处于对数生
长期，用０．２５％胰蛋白酶（含０．０２％ＥＤＴＡ）消化细
胞并常规传代。
荷瘤小鼠建模、分组及药物处理　Ｃ５７ＢＬ／６雌
小鼠适应环境７天后右侧颈背部备皮，取对数生长
期的 ＴＣ－１细胞用０．２５％胰蛋白酶（含０．０２％
ＥＤＴＡ）消化后２２８×ｇ离心３　ｍｉｎ，用无血清ＲＰＭＩ
１６４０培养液配置成１×１０６个／ｍＬ单细胞悬液，消
毒备皮区后用１　ｍＬ注射器每只皮下接种０．２　ｍＬ。
接种后６天瘤体直径长到约６　ｍｍ，随机将其分成４
５３５
复旦学报（医学版）　２０１６年９月，４３（５）　
组（８～１０只／组）并药物处理２１天。阴性对照组：
生理盐水（ＮＳ）０．２　ｍＬ／ｄ，灌胃；ＰＥ低剂量组：１０
ｍｇ／ｋｇ，０．２　ｍＬ／ｄ，灌胃；ＰＥ高剂量组：２０　ｍｇ／ｋｇ，
０．２　ｍＬ／ｄ，灌胃；ＣＤＤＰ阳性对照组：４　ｍｇ／ｋｇ，０．２
ｍＬ，３天腹腔注射１次。
观测指标 　给药后每３天称重１次，用以评估
药物毒性；每５天游标卡尺测量肿瘤大小，制绘肿瘤
生长曲线。计算肿瘤体积（ｍｍ３）＝长径（ｍｍ）×短
径２（ｍｍ）／２。
给药结束后，颈椎脱臼法处死小鼠，７５％酒精消
毒皮肤毛发１０　ｍｉｍ，无菌操作下获取小鼠完整的皮
下移瘤和脾脏，冰上操作，肿瘤拍照、称重并记录，计
算抑瘤率＝（阴性对照组平均瘤重－用药组平均瘤
重）／阴性对照组平均瘤重×１００％。切取１／４瘤块
放入４％甲醛溶液固定后石蜡包埋，ＨＥ染色，２μｍ
连续切片，备用。
制备单细胞悬液 　每只小鼠脾脏独立无菌操
作，置于 ＲＰＭＩ　１６４０培养液（含１０％胎牛血清＋
１％二抗）中研碎，４００目筛网过滤，细胞悬液３２９×ｇ
离心５　ｍｉｎ后ＰＢＳ洗涤２次，每份细胞调整浓度至
６×１０６个／Ｌ后加入适量Ｃｅｌ　Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　Ｃｏｃｋｔａｉｌ，
置于５％ＣＯ２、３７℃、饱和湿度培养箱培养６　ｈ。
样本检测 　每个样本平分３管（Ａ、Ｂ、Ｃ），每组
８个样本，其余样本用于建立空白对照管和单色荧
光素对照管。ＰＢＳ洗涤２次（２２８×ｇ，５　ｍｉｎ），按说
明书用量加入ＣＤ８／ＣＤ４５／ＣＤ４抗体，混匀，４℃避
光静置３０　ｍｉｎ。ＰＢＳ洗涤２次（２２８×ｇ，５　ｍｉｎ），加
入适量ＦＯＸＰ３　Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍ缓冲液（１×），混匀，室温
避光静置３０　ｍｉｎ。ＰＢＳ洗涤２次（２２８×ｇ，５　ｍｉｎ）。
Ａ、Ｂ组按说明书用量分别加入ＩＦＮ－γ／ＩＬ－１７和ＩＬ－
４／ＴＧＦ－β抗体，４℃避光静置３０　ｍｉｎ。Ｃ组继续加
入适量ＦＯＸＰ３　Ｆｉｘ／Ｐｅｒｍ缓冲液（１ｘ），混匀，室温
避光２０　ｍｉｎ，ＰＢＳ洗涤２次（２２８×ｇ，５　ｍｉｎ），按说明
书用量加入 Ｔ－ｂｅｔ／ＧＡＴＡ３／ＲｏＲγｔ／ＦＯＸＰ３抗体，
混匀，４℃避光静置３０　ｍｉｎ。ＰＢＳ洗涤２次（２２８×
ｇ，５　ｍｉｎ），用Ｂｅｃｋｍａｎ流式细胞仪检测和Ｆｌｏｗｊｏ
软件分析。
免疫组化ＳＰ法 　烤片：６０℃烤片２　ｈ。脱蜡
及水化：二甲苯１０　ｍｉｎ×２次，梯度浓度乙醇水化
（１００％乙醇２次，９５％乙醇２次，７５％乙醇１次，各
５　ｍｉｎ），ＰＢＳ洗３　ｍｉｎ×３次。灭活内源性过氧化物
酶：３％Ｈ２Ｏ２ 孵育１０　ｍｉｎ，ＰＢＳ洗３　ｍｉｎ×３次。抗
原修复：电磁炉０．０１　ｍｏｌ／Ｌ的柠檬酸盐缓冲液（ｐＨ
＝６．０）进行抗原修复２５　ｍｉｎ。室温自然冷却，ＰＢＳ
洗３　ｍｉｎ×３次。封闭：滴加封闭液室温孵育２０
ｍｉｎ，甩干，不洗。一抗按说明书稀释后滴加，４℃过
夜，次日室温复温１　ｈ，ＰＢＳ洗３　ｍｉｎ×３次。滴加二
抗，室温孵育１ｈ，ＰＢＳ洗３　ｍｉｎ×３次。光镜下ＤＡＢ
显色满意后，自来水冲洗。苏木精复染２　ｍｉｎ，自来
水冲洗１　ｍｉｎ，１％盐酸乙醇分化１０　ｓ，自来水冲洗２
ｍｉｎ，冰水返蓝２　ｍｉｎ。封片：逆梯度浓度乙醇脱水
后，二甲苯５　ｍｉｎ×２次，中性树胶封片。
统计学处理 　ＩＢＭ　ＳＰＳＳ　１３．０进行统计学分
析，计量资料用ｘ
－
±ｓ表示，组间均数比较采用单因
素方差分析（组间两两比较采用ＬＳＤ－ｔ检验）。Ｐ＜
０．０５为差异有统计学意义。
结　　　果
小鼠成瘤率、肿瘤生长情况及抑瘤率 　小鼠在
接种ＴＣ－１细胞悬液后５～７天即可见明显皮下瘤结
节，成瘤率９７．５％ （３９／４０），结果显示，用药结束后各
组小鼠移植瘤体积和离体瘤重量变化为：阴性对照组
＞ＰＥ低剂量组＞ＰＥ高剂量组＞ＣＤＤＰ组（图１Ａ、
Ｃ），和阴性对照组比较，ＰＥ高剂量组和ＣＤＤＰ组抑瘤
效果较好，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５#。比较各组
小鼠除瘤后净重（给药结束后小鼠体质量－离体瘤重
量）发现，在统计学上ＣＤＤＰ组小鼠净重较其余３组
均显著下降（Ｐ＜０．０１，图１Ｂ），推测与其较强的细胞
毒性有关。肿瘤抑制率比较（表１）：ＣＤＤＰ组＞ＰＥ高
剂量组＞ＰＥ低剂量组。
表１　小鼠肿瘤抑制率
Ｔａｂ　１　Ｔｕｍｏｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
（ｘ±ｓ，ｎ＝８）
Ｇｒｏｕｐｓ
Ｔｕｍｏｒ　ｖｏｌｕｍｅ
（ｍｍ３）
Ｔｕｍｏｒ
ｗｅｉｇｈｔ（ｇ）
ＴＩＲ（％）
Ｃｏｎｔｒｏｌ　 １５７９．９３±４６０．７６　 ３．７１±１．１５ －
ＰＥ－Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　 １４２２．３６±５５６．２３（２） ３．４１±０．９２　 ８．２３
ＰＥ－Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　 １１２０．１５±３３７．５１（１） ２．９８±０．５４　 ２１．７３
ＣＤＤＰ　 １２９６．１７±４８５．６９（１） 　２．６±０．８２（１） ２９．８２
（１）ｖｓ．Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，Ｐ＜０．０５；（２）ｖｓ．ＣＤＤＰ　ｇｒｏｕｐ，Ｐ＜０．０５．ＴＩＲ：
Ｔｕｍｏｒ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｒａｔｅ．
　　各组小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞的比例 　本实验小
鼠接种ＴＣ－１细胞，药物处理２１天后检测淋巴细胞
数发现：阴性对照组＜ＰＥ低剂量组＜ＰＥ高剂量组
＜ＣＤＤＰ组（图２　Ａ）。ＰＥ高剂量组和ＣＤＤＰ组淋
巴细胞数较阴性对照组均显著增多（Ｐ＜０．０１ #，而
６３５
　黄海霞，等．掌叶半夏提取物对宫颈癌荷瘤小鼠脾脏免疫的作用
ＰＥ低剂量组和ＰＥ高剂量组间淋巴细胞总数差异
无统计学意义。进一步分析淋巴细胞群中ＣＤ４＋
和ＣＤ８＋Ｔ细胞比例，发现４组间变化趋势类似淋
巴细胞总数，但阴性对照组和ＰＥ低剂量组间ＣＤ４
＋Ｔ细胞比例无明显差异（图２　Ｂ、Ｃ）。
Ｔｈ１、Ｔｈ２、Ｔｒｅｇ和Ｔｈ１７的水平 　采用流式细
胞术进一步检测Ｔ细胞亚群在各组中的变化。结
果发现，相比于阴性对照组，ＰＥ两组Ｔｈ１比例显著
　　Ａ：Ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｕｒｖｅ；Ｂ：Ｗｅｉｇｈｔ　ｃｈａｌｅｎｇｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｅｌｉｍｉｎａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｔｕｍｏｒ；Ｃ：Ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｎｏｄｅ．
ｖｓ．ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，（１）Ｐ ＜０．０５，（２）Ｐ ＜０．０１．
图１　各组小鼠皮下移植瘤生长情况及体重变化
Ｆｉｇ　１　Ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｓｉｚｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ
　　Ｐｌｏｔ　ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ　ｖａｌｕｅｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｃｅｌｕｌａｒｉｔｙ　ｏｆ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ′ｓ　ｓｌｅｅｐｎ　ｆｒｏｍ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（Ａ）ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＣＤ４
＋ａｎｄ　ＣＤ８＋Ｔ　ｃｅｌｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ（Ｂ，Ｃ）（ｎ＝８　ｆｏｒ　ｅａｃｈ　ｇｒｏｕｐ）．（１）Ｐ ＜０．０５，（２）Ｐ ＜０．０１．
图２　各组小鼠脾脏Ｔ淋巴细胞的比例
Ｆｉｇ　２　Ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ′ｓ　ｓｐｌｅｅｎ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ
升高、Ｔｈ２和 Ｔｈ１７比例显著下降（呈现剂量依赖
性），ＣＤＤＰ组 Ｔｈ１和 Ｔｈ２比例均显著下降（Ｐ＜
０．０１，图３、４）。但ＰＥ低剂量组和阴性对照组ＩＦＮ－
水平及ＰＥ低剂量组和ＰＥ高剂量组ＩＬ－４表达（图
３）差异无统计学意义。相比于阴性对照组，在流式
分析Ｔｒｅｇ亚群时发现，细胞因子ＴＧＦ－!和转录因子
ＦｏｘＰ３水平变化趋势不一致，提示该两类指标在抗
肿瘤中的角色不同。各组间ＴＧＦ－!水平均数比较：
ＣＤＤＰ组＞阴性对照组＞ＰＥ高剂量组＞ＰＥ低剂量
组，ＰＥ组和阴性对照组差异均无统计学意义，但ＰＥ
７３５
复旦学报（医学版）　２０１６年９月，４３（５）　
低剂量组相比ＣＤＤＰ组显著低表达ＴＧＦ－!（Ｐ＜０．
０５）。各组间ＦｏｘＰ３水平均数比较（图４）：ＰＥ高剂
量组＞ＰＥ低剂量组＞阴性对照组＞ＣＤＤＰ组，相比
阴性对照组和ＣＤＤＰ组，ＰＥ低剂量组和ＰＥ高剂量
组均显著高表达ＦｏｘＰ３（Ｐ＜０．０１），呈现剂量依
赖性。
　　Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ａｓ　ＩＦＮ－（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　Ｔｈ１　ｓｕｂｓｅｔ），ＩＬ－４ （ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　Ｔｈ２　ｓｕｂｓｅｔ），ＴＧＦ－β
（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　Ｔｒｅｇ　ｓｕｂｓｅｔ）ａｎｄ　ＩＬ－１７（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　Ｔｈ１７　ｓｕｂｓｅｔ）ｉｎ　ＣＤ４＋ Ｔ　ｃｅｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ′ｓ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ．（１）Ｐ＜０．０５，（２）Ｐ＜０．０１．
图３　给药后ＩＦＮ－、ＩＬ－４、ＴＧＦ－!和ＩＬ－１７水平比较
Ｆｉｇ　３　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ＩＦＮ－γ，ＩＬ－４，ＴＧＦ－βａｎｄ　ＩＬ－１７ｌｅｖｅｌｓ　ａｆｔｅｒ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ
８３５
　黄海霞，等．掌叶半夏提取物对宫颈癌荷瘤小鼠脾脏免疫的作用
　　Ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ　ａｎａｌｙｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ　ａｓ　Ｔ－ｂｅｔ（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　Ｔｈ１　ｓｕｂｓｅｔ），ＧＡＴＡ３（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　Ｔｈ２　ｓｕｂｓｅｔ），ＲｏＲγｔ
（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　Ｔｈ１７　ｓｕｂｓｅｔ）ａｎｄ　Ｆｏｘｐ３（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｅｄ　Ｔｒｅｇ　ｓｕｂｓｅｔ）ｉｎ　ＣＤ４＋ Ｔ　ｃｅｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｃｅ′ｓ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｇｒｏｕｐｓ．（１）Ｐ ＜０．０１．
图４　给药后Ｔ－ｂｅｔ、ＧＡＴＡ３、ＲｏＲγｔ和Ｆｏｘｐ３水平比较
Ｆｉｇ　４　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　Ｔ－ｂｅｔ，ＧＡＴＡ３，ＲｏＲγｔ　ａｎｄ　Ｆｏｘｐ３ｌｅｖｅｌｓ　ａｆｔｅｒ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ
９３５
复旦学报（医学版）　２０１６年９月，４３（５）　
　　病理形态学变化 　ＨＥ染色显示（图５）小鼠荷
瘤后脾脏形态破坏、白髓区淋巴小结结构不清，ＰＥ
低剂量组、ＰＥ高剂量组和ＣＤＤＰ组脾脏形态逐渐
恢复，白髓区淋巴结形态逐渐清楚。免疫组化结果
进一步提示（图５），相比对照组，ＰＥ低剂量组和ＰＥ
高剂量组Ｔ－ｂｅｔ表达显著升高而ＧＡＴＡ３表达明显
下降（均呈现剂量依赖性），ＦｏｘＰ３和 ＲＯＲγｔ表达
也显著下降（Ｐ＜０．０５）。但是组间ＲＯＲγｔ表达差
异无统计学意义。ＣＤＤＰ组Ｔ－ｂｅｔ表达与对照组比
较无明显差异 （Ｐ＞０．０５），ＧＡＴＡ３、ＦｏｘＰ３ 和
ＲＯＲγｔ变化趋势同ＰＥ组（Ｐ＜０．０１）。
　　（１）Ｐ＜０．０５，（２）Ｐ＜０．０１．
图５　小鼠脾脏组织ＨＥ染色和免疫组化结果分析（×４００）
Ｆｉｇ　５　ＨＥ　ｓｔａｉｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｍｉｃｅ′ｓ　ｓｐｌｅｅｎ（×４００）
讨　　　论
宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤，在
发展中国家每年宫颈癌新增病例约１０万，死亡人数
约３万，发病率和死亡率在妇科恶性肿瘤中均占据
首位，且发病年龄逐渐年轻化，严重威胁女性的生命
与健康［５］。研究已明确 ＨＰＶ是宫颈癌发生的主要
病因，宫颈鳞癌多与 ＨＰＶ１６型相关。多数宫颈
ＨＰＶ感染可通过体液和细胞免疫应答而被清除，
但免疫缺陷是高危型 ＨＰＶ感染持续存在的重要特
点，在某些情况下，ＨＰＶ（＋）肿瘤能够通过多种机
０４５
　黄海霞，等．掌叶半夏提取物对宫颈癌荷瘤小鼠脾脏免疫的作用
制逃避机体免疫系统的攻击，如肿瘤细胞免疫原性
下降、产生血清封闭因子、ＣＤ４／ＣＤ８倒置、Ｔｈ１／Ｔｈ２
漂移、分泌免疫抑制因子等［６］。以宫颈癌疫苗为代
表的免疫治疗虽然正在进行临床前或临床试验，但
现阶段疫苗的发展仍面临着一些挑战：肿瘤治疗性
疫苗的作用机制不同于细胞毒药物，其特殊之处在
于诱导特异性抗肿瘤免疫反应须经一定的时间，才
能转化为临床效应；并且复发或转移的患者通常都
接受了多轮治疗，可能影响免疫系统，降低疫苗疗
效［７］；其次，Ｔｒｅｇ产生的免疫抑制［８］也是目前宫颈
癌免疫治疗面临的瓶颈，使得宫颈癌疫苗在最初临
床试验中未获得预想结果。此外，如何提高疫苗的
安全性和免疫原性等问题也是 ＨＰＶ 治疗性疫苗上
市之前亟待解决的问题。
因此，寻找一种能安全有效防治女性宫颈病变
的纯中药制剂，是现阶段国内中药领域的迫切任务。
掌叶半夏，即虎掌（Ｐｉｎｅｌｌｉａ　ｐｅｄａｔｉｓｅｃｔａ　Ｓｃｈｏｔ），天
南星科半夏属植物，取块茎干燥入药，主要分布于河
北和长江流域及西南各地。２０世纪７０年代，复旦
大学附属妇产科医院率先开展掌叶半夏在宫颈癌治
疗方面的临床研究，证实其抑瘤效果确切，且未发现
毒性作用和不良反应［９］。随后，本课题组研究ＰＥ
在体外抑制宫颈癌细胞株增加的作用及机制，证实
ＰＥ可以通过抑制 ＥＲＫ 磷酸化、抑制 Ｂｃｌ－２ 和
ＰＣＮＡ的表达、抑制病毒癌基因Ｅ６的表达、上调抑
癌基因Ｐ５３的表达等途径来抑制宫颈癌细胞株
ＣａＳｋｉ和 ＨｅＬａ的增殖并促进细胞凋亡［１０］。本课题
组进一步证实ＰＥ能够抑制ＣａＳｋｉ裸小鼠皮下移植
瘤的生长，推荐灌胃途径作为体内试验最佳给药
方式［１１］。
本研究关注ＰＥ对正常免疫功能荷瘤小鼠体内
免疫的影响。实验选用宫颈癌ＴＣ－１细胞株种植于
野生型Ｃ５７ＢＬ／６小鼠右侧颈背部皮下，建立正常免
疫功能荷瘤小鼠模型，用于模拟正常机体患 ＨＰＶ
（＋）肿瘤后免疫功能状态的改变。由于中药的抗肿
瘤或免疫作用与剂量有关，对不同动物不同瘤株的
抗肿瘤作用也不同，只有在最佳剂量和最佳给药时
间，才显示出明显活性。因此，本研究设立高低不同
剂量的实验组，成瘤后给药２１天。结果发现，与阴
性对照组比较，ＰＥ高剂量组能够较好地延缓小鼠
皮下移植瘤的生长，ＰＥ高剂量组抑瘤率仅次于
ＣＤＤＰ组。ＣＤＤＰ组用药后小鼠体质量明显下降，
这可能与其作用机制有关：ＣＤＤＰ属细胞周期非特
异性药物，具有细胞毒性，可抑制癌细胞的ＤＮＡ复
制过程，并损伤其细胞膜上结构。本研究还发现ＰＥ
能增强小鼠脾脏Ｔ辅助细胞和细胞毒性Ｔ细胞的
浸润，提示ＰＥ能够增强机体细胞免疫在抗肿瘤中
的关键作用。在宿主体内对肿瘤的免疫应答是细胞
免疫和体液免疫的综合结果，但细胞免疫是抗肿瘤
的主力。ＣＤ８＋ＣＴＬ介导的细胞免疫是肿瘤免疫
的主力，ＣＤ４＋Ｔ细胞主要通过Ｔｈｌ亚群辅助ＣＤ８
＋细胞毒性Ｔ细胞活化，也可通过分泌ＩＬ－４为主的
Ｔｈ２亚群介导抗胞外感染的体液免疫反应，在多种
炎症性疾病、免疫性疾病、肿瘤性疾病等的发生发展
中起到重要作用［１２］。ＣＤ４－Ｔ 细胞亚群新成员
Ｔｈ１７，特征性分泌ＩＬ－１７、表达特异性转录因子
ＲｏＲγｔ，具有强大的促炎作用［１３］。Ｔｒｅｇ分泌抑制性
细胞因子———转化生长因子（ＴＧＦ－!），特征性表达
转录因子Ｆｏｘｐ３，有着强大的免疫调节作用，介导外
周免疫耐受，在肿瘤的发生发展中也发挥着重要
作用［１４］。
在 ＨＰＶ感染阶段，Ｔｈ１／Ｔｈ２、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ比值
保持动态平衡；在子宫颈上皮内瘤变阶段，开始出现
Ｔｈ１／Ｔｈ２、Ｔｈ１７／Ｔｒｅｇ的平衡失调，并随着疾病进
展，失衡加重；在浸润性宫颈癌阶段，机体内存在显
著的免疫失衡，具体表现为：宫颈癌患者外周血中
Ｔｈ１水平明显降低，Ｔｈ２比率上升，Ｔｈ１７、Ｔｒｅｇ比
例上调，并随着疾病进展逐步积聚［１５－１６］。而本研究
发现，ＰＥ可诱导小鼠脾脏 ＣＤ４＋Ｔ 细胞向分泌
ＩＦＮ－的Ｔｈ１型分化，降低分泌特征性ＩＬ－４的Ｔｈ１
型细胞比例，改善Ｔｈ１／Ｔｈ２之间的平衡，同时改善
Ｔｒｅｇ和Ｔｈ１７比例，使Ｔｈ１７细胞分泌ＩＬ－１７减少、
下调特异性转录因子ＲｏＲ ｔ；抑制Ｔｒｅｇ分泌细胞因
子ＴＧＦ－!、下调转录因子Ｆｏｘｐ３。而流式细胞术检
测结果提示ＰＥ上调小鼠脾脏细胞内Ｆｏｘｐ３水平。
众所周知，Ｆｏｘｐ３是外周血ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ的
特异性标志，其在 Ｔｒｅｇ的分化发育及其介导的肿
瘤免疫逃逸中发挥关键作用。但近年来发现，肿瘤
内浸润的Ｆｏｘｐ３＋Ｔ细胞在不同种类的癌症中表现
不同，有研究表明其与肝细胞癌预后不良有关，但能
提示结直肠癌良好预后［１７］。在神经胶质瘤中，
Ｆｏｘｐ３还表达于肿瘤细胞及部分正常组织细胞中，
并发挥抑制肿瘤作用［１８］。因此，对于在移植瘤体内
Ｆｏｘｐ３表达变化趋势对宫颈癌预后的影响，还有待
进一步的研究证实。综上所述，本研究证实ＰＥ能
够通过诱导ＣＤ４＋Ｔ细胞向Ｔｈ１型分化，抑制Ｔｈ２
１４５
复旦学报（医学版）　２０１６年９月，４３（５）　
型分化，在一定程度上改善 Ｔｒｅｇ和 Ｔｈ１７的比例，
使其在抗肿瘤免疫中更好的发挥应答反应，为掌叶
半夏在宫颈癌的临床应用奠定理论基础。
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ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ　ｏｆ　Ｔｈ２２，ｐｕｒｅ　Ｔｈ１７　ａｎｄ　Ｔｈ１　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ＣＩＮ　ａｎｄ
Ｃｅｒｖｉｃａｌ　Ｃａｎｃｅｒ　ａｌｏｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅｉｒ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｖａｒｉａｔｉｏｎ　ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔａｇｅｓ　ｏｆ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＢＭＣ　Ｃａｎｃｅｒ，２０１５，
１５：７１７－７２８．
［１４］　ＰＵＮＴ　Ｓ，ＶＡＮ　ＶＬＩＥＴ　ＭＥ，ＳＰＡＡＮＳ　ＶＭ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｏｘｐ３
（＋）ａｎｄ　ＩＬ－１７（＋）ｃｅｌｓ　ａｒｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ
ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｉｎ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｉｍｍｕｎｏｌ
Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ，２０１５，６４（６）：７４５－７５３．
［１５］　ＢＡＩＳ　ＡＧ，ＢＥＣＫＭＡＮＮ　Ｉ，ＬＩＮＤＥＭＡＮＳ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｓｈｉｆｔ
ｔｏ　ａ　ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ　Ｔｈ２－ｔｙｐｅ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｐａｔｔｅｒｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｔｈｅ
ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｃｅｒｖｉｃａｌ　ｃａｎｃｅｒ　ｂｅｃｏｍｅｓ　ｍａｎｉｆｅｓｔ　ｉｎ
ＣＩＮＩＩＩ　ｌｅｓｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｌｉｎ　Ｐａｔｈｏｌ，２００５，５８（１０）：１０９６
－１１００．
［１６］　ＰＥＧＨＩＮＩ　ＢＣ，ＡＢＤＡＬＬＡ　ＤＲ，ＢＡＲＣＥＬＯＳ　ＡＣＭ，ｅｔ　ａｌ．
Ｌｏｃａｌ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ　ｐｒｏｆｉｌｅｓ　ｏｆ　ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｃｅｒｖｉｃａｌ
ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ　ａｎｄ　ｉｎｖａｓｉｖｅ　ｎｅｏｐｌａｓｉａ ［Ｊ］．Ｈｕｍａｎ
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ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ　 ｖａｌｕｅ　 ｏｆ　 Ｆｏｘｐ３ ＋ ｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｃａｎｃｅｒ：ａ　ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ
［Ｊ］．Ｃｌｉｎ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ．２０１２，１８（１１）：３０２２－３０２９．
［１８］　ＨＥＬＤ－ＦＥＩＮＤＴ　Ｊ，ＨＡＴＴＥＲＭＡＮＮ　Ｋ，ＳＥＢＥＮＳ　Ｓ，ｅｔ
ａｌ．Ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　Ｆｏｒｋｈｅａｄ　ｂｏｘ　Ｐ３（Ｆｏｘｐ３）ｉｓ
ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ　ｉｎ　ｇｌｉｏｍａ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｅｘｐ　Ｃｅｌｌ　Ｒｅｓ，２０１３，３１９（５）：７３１－７３９．
（收稿日期：２０１６－０３－２９；编辑：王蔚）
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