全 文 ：书诱导凋亡等途径发挥抗肿瘤作用。
肿瘤坏死因子(TNF － α)是迄今为止抗癌活性最强的细胞
因子，可通过诱导凋亡、影响肿瘤血管系统和增强宿主免疫力三
个方面发挥抗肿瘤作用［11］。TNF － α 与其受体结合后使受体三
聚化进形成 DISC(death － inducing signaling complex) ，启动
Caspase的级联反应，使 Caspase － 3、6、7 激活，最终诱导细胞凋
亡［12，13］。抑制 TNF － α的表达可明显降低 caspase － 3 以及 IL － 6
的表达，促进癌细胞的存活［14］。本研究中，GEE 处理荷 H22 肝
癌小鼠后，血清中 TNF － α蛋白含量明显升高。这很可能是 GEE
发挥抗肿瘤作用的另一途径。
综上所述，GEE组分可能通过上调 TNF － α和抑制 IL － 6 蛋
白的表达在体内发挥抗肿瘤作用，但 GEE成分复杂，是否还存在
其它作用靶点有待进一步证实。
参考文献:
［1］ 《全国中草药汇编》编写组．全国中草药汇编，下册，第 2 版［M］．北
京:人民卫生出版社，1996:682．
［2］ 王晓兰，宋佳玉，王建刚．壁虎抗肿瘤作用研究现状［J］． 中国实验
方剂学杂志，2011，17(4) :218．
［3］ 卢天公．中药壁虎的抗肿瘤应用及药理机制研究进展［J］． 中华医
药杂志，2009，9(6) :334．
［4］ Fei Liu，Jian Gang Wang，ShuYing Wang，et al． Antitumor effect and
mechanism of Gecko on human esophageal carcinoma cell lines in vitro
and xenografted sarcoma 180 in Kunming mice［J］． World Gastroen-
terol，2008，14(25) :3990．
［5］ 刘 菲，王淑英，李 艳，等．干壁虎对食管癌细胞和 S180 荷瘤小
鼠的抑制作用［J］．中药材，2008，31(9) :1304．
［6］ 刘 菲，王建刚，席守民，等．中药壁虎抗肿瘤作用的实验研究［J］．
时珍国医国药，2008，19(4) :957．
［7］ Hedge DＲ，Hurt EM，Farrar WL． The role of IL － 6 and STAT3 in in-
flammation and cancer［J］． Eur J Cancer，2005，41(16) :2502．
［8］ Bollrath J，Phesse TJ，von Burstin VA，et al． gp130 － mediated Stat3 ac-
tivation in enterocytes regulates cell survival and cell － cycle progression
during colitis － associated tumorigenesis［J］． Cancer Cell，2009，15
(2) :91．
［9］ Yadav A，Kumar B，Datta J，et al． IL － 6 promotes head and neck tumor
metastasis by inducing epithelial － mesenchymal transition via the JAK
－ STAT3 － SNAIL signaling pathway［J］． Mol Cancer Ｒes，2011，9
(12) :1658．
［10］ Tu B，Du L，Fan QM，et al． STAT3 activation by IL － 6 from mesenchy-
mal stem cells promotes the proliferation and metastasis of osteosarcoma
［J］． Cancer Lett，2012，325(1) :80．
［11］ Baker SJ，Ｒeddy EP． Modulation of Life and Death by the TNF Ｒeceptor
Superfamily［J］． Oncogene，1998，17(25) :3261．
［12］ Sheikh MS，Huang Y． Death receptor activation complexes:it takes two
to activate TNF receptor 1［J］． Cell Cycle，2003，2(6) :550．
［13］ Alvarez S，Blanco A，Fresno M，et al． TNF － α contributes to caspase －
3 independent apoptosis in neuroblastoma cells:role of NFAT［J］．
PLoS One，2011，6(1) :e16100．
［14］ Kaufmann L，Marinescu G，Nazarenko I，et al． LiCl induces TNF － α
and FasL production，thereby stimulating apoptosis in cancer cells［J］．
Cell Commun Signal，2011，9:15．
收稿日期:2012-08-27; 修订日期:2013-03-06
基金项目:江西省自然科学基金项目资助( No． 2007GQY0114)
作者简介:姜登钊( 1982-) ，男( 汉族) ，山东威海人，现任九江学院基础医学院讲师，博士学位，主要从事中药药代动力学研究工作．
* 通讯作者简介:管华诗( 1939-) ，男( 汉族) ，山东德州人，现任中国工程院院士，学士学位，主要从事海洋糖化学与糖生物学研究工作．
对叶百部多糖的相对分子质量测定及单糖组成分析
姜登钊1，刘见见1，李辉敏1，管华诗2 *
(1．江西省系统生物医学重点实验室，江西 九江 332000;
2．中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室，山东 青岛 266003)
摘要:目的 提取纯化对叶百部多糖，并对其相对分子质量及单糖组成进行研究。方法 采用乙醇沉淀、DEAE －纤维素离
子交换层析和 Sepharose CL － 6B凝胶过滤层析法从对叶百部中纯化得到水溶性多糖，命名为 STP － 1，分子筛层析法测定
其分子质量，柱前衍生气相色谱法对其单糖组成进行研究。结果 STP － 1 的分子量为 4． 2 × 104Da，单糖组成包含鼠李糖
( Ｒha) 、阿拉伯糖( Ara) 、木糖( Xyl) 、葡萄糖( Glu) 和半乳糖( Gal) ，其摩尔比为 2． 35∶ 1． 78∶ 1: 15． 09∶ 13． 56。结论 对
叶百部多糖为五种单糖组成的中性杂多糖，以葡萄糖和半乳糖为主。
关键词:对叶百部多糖; 分子质量; 单糖组成
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 05． 051
中图分类号:Ｒ284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2013) 05-1144-03
Polysaccharides from Stemona tuberosa Lour: Determination of Molecular Weights and
Monosaccharide Compositions
JIANG Deng-zhao1，LIU Jian-jian 1，LI Hui-min1，GUAN Hua-shi2 *
( 1． Key Laboratory of Jiangxi University for the Systems Biology Clinical Application，Jiujiang 332000，China; 2．
Key Laboratory of Marine Drugs，Ministry of Education，Ocean University of China，Qingdao 266003，China)
Abstract: Objective To extract and isolate Polysaccharides from Stemona tuberosa Lour．，and study its molecular weight and
monosaccharide compositions．Methods A water － soluble polysaccharide was isolated from Stemona tuberosa Lour． sequentially
through water extraction，ethanol precipitation，ion exchange chromatography and gel permeation chromatography． The molecular
·4411·
时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5
书mass of STP － 1 was determined by gel filtration chromatography and its monosaccharide compositions were determined by pre －
column derivatization Gas Chromatography． Ｒesults he molecular weight of STP was about 4． 2 × 104 Da ，which was composed of
Ｒha，Ara，Xyl，Glu and Gal with molar ratio of 2． 35∶ 1． 78∶ 1∶ 15． 09∶ 13． 56． Conclusion STP － 1 was aneutral heteropolysac-
charide which was composed of five monosaccharides，of which Glu and Gal were the top two．
Key words: STP; Molecular weight; Monosaccharide composition
百部始载于《名医别录》，历代本草均有记载。该药性甘，味
苦、微温，归肺经，有润肺止咳、杀虫灭虱的功效。在 2010 版《中
国药典》中，百部科(Stemonaceae)植物直立百部 Stemona sessilifo-
lia (Miq．)Miq．、蔓生百部 S． japonica (Blume)Miq．和对叶百部
S． tuberosa Lour．的干燥块根均作为正品百部入药［1］。目前对于
对叶百部的次级代谢产物研究已有较多报道［2 ～ 5］，本研究小组对
对叶百部根的无机元素和氨基酸也进行了研究［6］，并对对叶百
部的多糖成分的抗氧化作用进行了研究，结果表明对叶百部多糖
对自由基的清除作用存在明显的量效关系，具有较好的抗氧化活
性［7］。为了进一步阐明百部多糖的构效关系，本研究对叶百部
粗多糖(STP)进行纯化，测定其相对分子质量并采用柱前衍生气
相色谱法对其单糖组成进行分析，为百部多糖类成分的进一步研
究奠定基础。
1 材料
1． 1 材料与试剂 中药百部产自广西柳州，由中国海洋大学刘红
兵副教授鉴定为对叶百部 Stemona tuberosa Lour．的根。
标准单糖为 E． Merck 公司产品，葡聚糖(Dextran)系列标准
品为 Fluka 产品，肌醇，甲醇、三氟乙酸(TFA)、醋酸酐、盐酸羟
胺，苯酚，吡啶，葡萄糖，3，5 －二硝基水杨酸盐(DNS) ，亚硫酸钠，
氢氧化钠，酒石酸钾钠和无水硫酸钠均为分析纯。
实验选用肌醇六乙酰酯为内标，自制，具体操作为:称取 1． 0 g
肌醇，加入 1． 5 g盐酸羟胺，15 ml醋酸酐和 3 ml吡啶，在 90℃水浴
反应 2 h并不时摇动。待溶液中无不溶物后，将反应液置于冰水
中，使肌醇六乙酰酯结晶析出［8］。晶体滤出后用 20 ml 蒸馏水洗
涤，然后 100℃烘干备用。气相色谱检测肌醇六乙酰酯为单峰。
1． 2 仪器 VAＲIAN CP － 3800 型气相色谱仪(配氢火焰离子化
检测器)。
2 方法
2． 1 对叶百部粗多糖的提取 对叶百部药材 50 ℃恒温干燥，粉
碎过 60 目筛。称取 100 g药材粉末，以料液比(m/V)1∶ 30，沸水
回流提取 3 次，每次 2 h，收集提取液，离心过滤，将滤液浓缩为
100 ml，加入 300 ml 无水乙醇进行醇沉，放置过夜后，过滤，沉淀
以 Sevage法除蛋白后复溶，再以 75%乙醇进行沉淀，沉淀经无水
乙醇，丙酮反复洗涤后得到对叶百部多糖，对得到的多糖进行透
析 48 h后，将样品浓缩，冷冻干燥后得到对叶百部粗多糖(STP)。
2． 2 百部多糖的纯化 称取对叶百部粗多糖 500 mg，蒸馏水(10
ml)溶解，离心(8 000 r /min，15 min，4 ℃) ，上清液上 DEAE －纤
维素柱(2． 6 cm × 30 cm)。依次以 0 ～ 1 mol /L NaCl 溶液洗脱。
流速 0． 5 ml /min，自动部分收集器收集洗脱液，每管 5 ml，采用苯
酚 －硫酸法检测糖分布，按照吸收峰收集样品，透析，冻干。经
Sepharose Cl － 6B分子筛层析柱(2． 6 cm × 100 cm)进一步纯化。
以 0． 9 g /100 mlNaCl溶液洗脱，流速为 0． 4 ml /min，根据糖分布
收集洗脱液，透析，冻干。
2． 3 相对分子质量测定 多糖的平均分子质量测定采用 Seph-
arose CL － 6B 凝胶柱(1． 6 cm × 100 cm)层析法［9］，以 0． 9 g /
100mlNaCl洗脱，流速 0． 2 ml /min。以各标准葡聚糖分子质
量的对数为纵坐标(lgM) ，洗脱体积为横坐标(t) ，绘制标准
曲线。多糖样品 5 mg同样条件上柱洗脱，根据洗脱体积计算
样品的分子质量。
2． 4 单糖组成分析 取纯化后的百部多糖 5 mg 置于安培管
中，加入 0． 4 ml蒸馏水溶解，再加入等体积的 4． 0 mol /L 三氟
醋酸，充氮气封管后置于 110℃水解 3 h。将水解液减压蒸
干，然后加入 1． 5 ml甲醇溶解，再减压蒸干，重复 3 次以除尽
残余的三氟醋酸。
向水解产物中加入 5． 0 mg 盐酸羟胺和 3． 5 mg 内标肌醇六
乙酰酯，用 0． 5 ml吡啶溶解后 90 ℃震荡反应 30 min。反应完成
取出后冷却至室温，加入 0． 25 ml 醋酸酐，在 90℃下再反应 30
min进行乙酰化［10］。反应产物直接进行气相色谱分析。
气相色谱条件:色谱柱为 VAＲIAN CP － Sil 5 CB (25 m ×0． 53
mm，液膜厚 0． 25μm) ，FID 检测温度为 300℃，进样口温度为
270℃。柱温采用程序升温，先在 140℃保持 3 min，然后以 7℃ /min
的速度升至 210 ℃。H2 做载气兼燃气，30 ml /min，N2 流速 30 ml /
min，Ar流速 300 ml /min。
标准单糖相对校正因子测定:精确称取标准单糖，分别加入相
同量的内标物，按上述方法制备样品的糖腈乙酸酯衍生物并进行
气相色谱层析，计算相对校正因子。校正因子按下式计算:K =
Wi* As /(Ws
* Ai) (Wi －内标的质量(mg) ;Ws －标准品的质量
(mg) ;As －标准品的峰面积;Ai －内标的峰面积)。结果见表 1。
表 1 标准单糖的校正因子
标准单糖 校正因子 K
鼠李糖 3． 984 3
阿拉伯糖 3． 105 9
木糖 3． 811 3
葡萄糖 3． 739 6
半乳糖 3． 540 1
百部多糖单糖含量测定:按上述方法对百部多糖中的单糖组
分进行气相色谱分析，待测品中的单糖的质量按下式计算:Wx =
Wi
* Ax /(K
* Ai) (Wx －样品中单糖的质量(mg) ;Wi －内标的质
量(mg) ;Ax －标准品的峰面积;Ai －内标的峰面积)。
3 结果
3． 1 多糖的分离纯化 对叶百部经热水提取，乙醇沉淀获得粗多
糖。粗多糖经 DEAE －纤维素离子交换层析柱层析，依次以 0 ～
1． 0 mol /L NaCl洗脱，分离得到 2 个洗脱峰(图 1) ，其中蒸馏水洗
脱部分的量最多(峰 1) ，不同浓度氯化钠梯度洗脱获得一个低的
洗脱峰(峰 2) ，说明对叶百部多糖以中性糖为主。峰 1 部分经
SepharoseC L － 6B凝胶过滤层析进一步纯化，洗脱峰为单一对称
峰，表明其组分均一(图 2)。洗脱液经透析、冻干后得纯化多糖，
命名为 STP － 1。STP － 1 为白色纤维状疏松固体，易溶于水，不
溶于丙酮、乙醇等有机溶剂。峰 2 部分因糖含量较低，未作进一
步纯化。
图 1 对叶百部粗多糖 DEAE －纤维素离子交换柱层析
3． 2 STP － 1 分子量测定 以标准葡聚糖分子量的对数值(LgM)
与洗脱体积(t)进行回归，得线性回归方程为:Lg M = － 2． 3514t
·5411·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期
书+ 216． 25(Ｒ2 = 0． 994 0) ，由标准曲线可知 STP － 1 其分子量约
为 4． 2 × 104Da。
3． 3 STP － 1 单糖组成 如图 3 所示，在 CP － Sil 5 CB 色谱柱上
7 种标准单糖及内标能完全分离。图 4 中 STP － 1 中单糖种类的
定性采用与标准单糖的色谱保留时间相对照的方法［11］。根据谱
图对比，STP － 1 中的单糖组成为鼠李糖，阿拉伯糖，木糖，葡萄糖
和半乳糖。利用标准单糖校正因子对 STP － 1 中的单糖含量进行
计算，计算结果为 STP － 1 中的单糖摩尔比为鼠李糖:阿拉伯糖:
木糖:葡萄糖:半乳糖 = 2． 35 ∶ 1． 78 ∶ 1 ∶ 15． 09 ∶ 13． 56。
图 2 对叶百部多糖 SepharoseC L － 6B分子筛层析
［1］鼠李糖［2］岩藻糖［3］阿拉伯糖［4］木糖
［5］甘露糖［6］葡萄糖［7］半乳糖［8］内标
图 3 标准单糖糖腈乙酰酯衍生物气相色谱图
［1］鼠李糖［2］岩藻糖［3］阿拉伯糖［4］木糖
［5］甘露糖［6］葡萄糖［7］半乳糖［8］内标
图 4 STP － 1 水解后糖腈乙酰酯衍生物气相色谱图
4 讨论
多糖是药用植物最重要的活性成分之一。植物多糖以其广
泛的治疗作用和极低的细胞毒性，在医药、食品、化妆品和环境治
理等领域具有广阔的应用前景。近年来，一些天然植物多糖的抗
氧化活性引起人们的广泛关注。从天然植物中寻找新的清除体
内自由基的抗氧剂，是现代医药和功能食品行业发展的新方向。
作为一种常用的止咳平喘中药，百部的研究主要是集中在其小分
子尤其是生物碱类成分的结构与功效方面，对其多糖成分的研究
很少报道［7，12］。本研究小组在前期研究中发现对叶百部多糖对
DPPH·，超氧阴离子自由基及羟基自由基均具有一定的清除作
用，其清除超氧阴离子自由基能力与维生素 C 相当，清除羟基自
由基能力强于维生素 C，清除 DPPH·能力远远弱于维生素 C［7］。
多糖的结构与活性的关系十分密切，多糖抗氧化活性受其单
糖组成、分子质量和空间构象等的影响［13，14］，低分子质量的多糖
具有更强的抗氧化活性［15］。本研究在前期研究基础上，提取纯
化了对叶百部中的多糖成分，并对其分子量范围和单糖组成进行
研究，研究结果表明对叶百部多糖中的主要成分分子量范围在
4． 2 × 104Da左右，为一低分子量多糖，由五种单糖组成，并以葡
萄糖和半乳糖为主。对叶百部多糖的抗氧化活性可能与其较低
的分子量及含有较多的葡萄糖和半乳糖残基相关，对其抗氧化活
性及其结构之间的构效关系将会进一步研究。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京:中国医药科技出版社，
2010:123．
［2］ Jiang ＲW，Hon PM，But PP，et al． Isolation and stereochemistry of two
new alkaloids from Stemona tuberose［J］． Tetrahedron，2002，58 (33) :
6705．
［3］ Chung HS，Hon PM，Lin G，et al． Antitussive activity of Stemona alka-
loids from Stemona tuberose［J］． Planta Med，2003，69 (10) :914．
［4］ Jiang ＲW，Hon PM，Zhou Y，et al． Alkaloids and Chemical Diversity of
Stemona tuberose［J］． J Nat Prod，2006，69 (5) :749．
［5］ Lin LG，Li KM，Tang CP，et al． Antitussive Stemoninine Alkaloids from
the Ｒoots of Stemona tuberose［J］． J Nat Prod，2008，71(6) :1107．
［6］ 姜登钊，刘红兵，李国强，等．对叶百部根的无机元素与氨基酸成分
分析［J］．中国海洋大学学报，2008，36(6) :902．
［7］ 姜登钊，吴家忠，李辉敏．对叶百部多糖的提取及其抗氧化活性研
究［J］．时珍国医国药，2012，23(6) :1467．
［8］ 陈 永，安洪庆，宋 利，等．红毛五加多糖中单糖组成的气相色谱
分析［J］．江苏中医药，2008，40 (1) :65．
［9］ Yang ZN，Li SY，Zhang X，et al． Capsular and slimepolysaccharide pro-
duction by Lactobacillus rhamnosus JAAS8 isolated from Chinese
sauerkraut:potential application in fermented milk products［J］． Journal
of Bioscience and Bioengineering，2010，110(1) :53．
［10］ 李铁林，吴昌贤，张燕霞．糖和糖醇的气相色谱分析研究:Ⅱ．糖腈
乙酰酯衍生物气相色谱分析的改进［J］．分析化学，1982，10 (5) :
272．
［11］ 武汉大学．仪器分析［M］．北京:高等教育出版社，2002:379．
［12］ 王明艳，杨 凡，李 燕，等． 响应面法优化百部多糖提取条件研
究［J］．食品科学，2009，30(6) :80．
［13］ Jin Y，Zhang L N，Zhang M，et al． Antitumor activities of heteropolysac-
charides of Poria cocos mycelia from different strains and culture media
［J］． Carbohydrate Ｒesearch，2003，338(14) :1517．
［14］ Chen HX，Lu XM，Qu ZS，et al． Glycosidase inhibitory activity and an-
tioxidant properties of a polysaccharide from the mushroom Inonotus
obliquus［J］． Journal of Food Biochemistry，2010，34(1) :179．
［15］ Chen HX，Zhang M，Qu ZS，et al． Antioxidant activities of different frac-
tions of polysaccharide conjugates from green tea (Camellia Sinensis)
［J］． Food Chemistry，2008，106(2) :559．
·6411·
时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 5 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 5