全 文 ：, 雷丸菌株的醋酶同工酶 ,
王 淑芳 徐贵祥
(中国医学科学院药物研究所 )
近年来 ,同工酶已被广泛应用于多种真菌分类及
发育方面 。但有关雷丸菌同工酶的研究还未见有报道 。
我们用不同来源的雷丸菌株 , 在一定的条件下 ,经醋酶
同工酶谱比较 ,初步分析了其亲缘关 系 ,并对培养条
件 、 基质以及保藏期对酶带的影响进行了探讨 。
材料与方法
(一 )供试菌株 由湖北野生雷丸分离到的 0 2 、仇
及 。 , 菌株 ,贵州栽培雷丸分离到的 B . 、 B 。 、 B。 及 B 。 菌
株 。
(二 )样品制备 ( 1 )刮取鼓汁综合琼脂上各菌株
的菌丝层 . (2 )分别挑取深层培养菌液内的菌球及静置
后其液体表面的菌苔 。 (3 )各以数汁 、 土豆汁 、酵母育 、
玉米粉为主的琼脂平板 ,接种 B。 菌株 28 ℃培养 1周 ,
取其菌丝体 。 (4 )舌吐取冰箱保藏半年及 1 年的 B 。 菌丝 ,
与 28 ℃培养 1周的新鲜菌丝对照 ,培养基均为载皮综
合琼脂培养基 : 5纬的鼓汁 1 0 0耐加蔗糖 、 葡萄糖各
19
,
K H :阳 ; 及 M gS O ; 各 0 . 19 ,琼脂 2 9 。
将以上 ( l ) 、 ( 3 ) 、 ( 4 )样品各取 2一 4 克 ,按重量与
体积 l : 2 ,样品 ( 2) 按 2 门 加 T isr 一甘氨酸 p H S . 3 的缓
冲液 。 研磨时加少许石英砂使呈糊状 。 置一 4℃ 至 0℃
提取 24 小时 。 经 2 5 0 0转 /分离心 30 分钟 。 取上清每
m l 加 5 0m g 蔗塘后于一 1 2 ℃下保存 。
(三 )电泳 采用聚丙烯酞胺垂直板电泳 ,分离醋
酶同工酶 . 样品分离胶浓度 7 . 5% , p H S . 9 ,浓缩胶浓度
4%
,
PH 6
.
7 ;电极缓冲液 rT 如一甘氨酸系统 , PH S . 3 ;电流
强度开始用 Zm A /助 , 当指示剂进人分离胶后调为
4m A /。 ,每次在 4℃冰箱内电泳 3 小时 。
(四 )染色 电泳毕取下胶板 ,放人醋酶 同工酶
染液 内染 色 。 染液 以 。. 2 几f N a H ZOP ; 5 0耐 加 .0 2
“ 协 2 1任心 ; 1 0 m l ,加蒸馏水 4 0m l ,溶人 1 0 om 。坚牢兰
R R 盐 ,经过滤后加人含 l %乙酸一 a一蔡醋的丙酮液
Zm l 配制成 。 胶板在染液中 3~ 5分钟即显红褐色 ,时
间长则色带加深 ,以不超过半小时为限 。
结果与讨论
(一 )不同菌株醋酶同工酶谱 野生系及栽培系其
酶谱不完全一致 (图 l ) ,但 3 株栽培系有 5 条带是共
有的 ,说明栽培系之间亲缘关系比较近 。 栽培系和野生
系之间存 3 条相同带 , fR 值分别为 。. 27 、 。 . 38 、 。 . 57 ,
说明它们有共同的遗传基础。此外 ,由于地理分布及环
境条件的变化 ,各菌株又形成自己另外的酶带 。
(二 )不同部位醋酶同工酶谱 深层培养条件下形
成的菌球与静置后液面上形成的菌苔 ,其电泳结果不
完全一样 (图 2) 。 由于样品浓度高 ,酶活性强 ,在两同
源酶带之间 6个样品均呈现褐区 ,褐区中 fR O. 38 的同
源酶带仍较明显 ,其余则不清晰 。褐区外凡是菌苔的样
品均有 1~ 2 条细带 。 B : 与 B S各为 2 条快带 , B 。 为 1 条
慢带 。 看来培养条件不同 ,其生理代谢过程会受到影
响 。菌球主要在溶氧低于表面的液休内生长 ,类似琼
脂固体培养基质内的菌丝 。 液面菌苔则相似于固体培
养基质内的菌丝 。 液面菌苔则相似于固休基质上的气
生菌丝 . 菌球色棕 ,菌苔色白 。 其外观上的不同在酶谱
上也表现出差异 。
二 雹厂门
l 一 ,
田 1 . , 丸
的不同菌株
口曰 〔 一 1口 曰 巨」
「二二二 厂 一勺〔二
图 2 .不同部
位 (液体培养 )
(三 )不同墓质上能酶同工酶谱 B。 菌株在 4种
基质上 ,除主要特征共有酶带外 , 土豆及酵母膏基质上
的菌丝均有 1条快带 (图 3) 。 在中速区酵母膏基质的
菌丝酶带最多 。 根据外源激素可引起同工酶谱变化的
看法 ,我们认为酵母膏含有多种营养成份 ,并含有外源
激素 ,它比其他 3种基质对雷丸菌影响深刻 , 因此同样
条件下它的酶带比其他处理多 。
(四 )不同保截期醋酶同工陇谱 B 。 菌株经不同
保藏期后 ,其醋酶同工酶谱与对照差异较大 。 保藏 1 年
后的老菌丝除慢带区的特征酶带还继续出现外 ,其余
一 1 8 一
金针菇的氨基酸组成
及菌丝体发酵生产的可行性
金荣观 寿诚学
(浙江农业大学园艺系 )
籽壳木屑混合料 4种配方 , 按常规装料 , 灭菌和接种 ,
在 21 士 1℃ 的恒温室中培养 ,发好菌后转人 14 · 5士 1℃
出菇室出菇 , 按常规管理 。 成熟后随机取得混合样品
(包括柄与盖 ) , 烘千待测 。
(三 ) 氮基酸分析 供干样品经 6N cH l 在 1 10 ℃下水解 24 小时后 , 用 日立 8 35 一 50 型氨基酸分析仪测
定 。
金针菇是一种高蛋白低脂肪 , 含多种维生素和矿
物质的保健蔬菜 . 据报道 , 金针菇含有的冬菇素 、 原
黄素 、 多糖体和 rP o n a m in 都有强烈的抗癌作用 , 是一
种辅助抗癌药物 。 因此 , 近年来深受市场的欢迎 , 但
是用常规栽培方法生产子实体 , 周期长产量低 。 .本文
在菌丝体与子实体营养价值比较的基础上 , 进一步探
讨了金针菇菌丝体大规模发酵生产的可行性 。
一 、 材料与方法
(一 〕 菌丝体培养 标准有机培养液组成为 : 2%
葡萄塘 , l %蛋白陈 , 0 . 1写磷酸二氢钾 , 0 , 05 %硫酸
镁 , 必 6 . 0 , 蒸馏水 1 0 毫升 。 50 毫升三角瓶装 10
毫升培养液 , 在 15 磅 、 12 1℃下灭菌 20 分钟 , 冷却后
接种 (菌株为金针菇 8 5 0 8 , 引自桐乡真菌所 ) , 每支斜
面母种转接 4 个摇瓶 , 置旋转式摇床 (转速 1 10 转 /
分 ) 上 2 5℃恒温下培养 , 9天后过滤菌丝体 , 用蒸馏
水洗净 , 在 80 ℃烘箱中烘千后测氨基酸含量 。
(二 ) 子实体培养 用棉籽壳 、 木屑 、 甘蔗渣 、 棉
迢冰贝边爪衫均夕功闰水欢夕劫娜冰
酶带则消失 (图 4 ) , 保藏半年的菌丝在中速区比对照
少 4条酶带 , 但主要特征酶带尚未消失 。 从以上情况
看 , 雷丸菌在不同条件下会有不同的生化过程 。 醋酶
同工酶作为其生理生化的一个指标 ,反应是很灵敏的 ,
也是可行的 , 但应用时必须注意采用一致的条件 , 才
会有较好的重现性 。
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l l l 1 口 - 1
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二 、 结果与分析
氨基酸分析结果表明 ,金针菇菌丝休和子实体都
含有包括人体必需氨基酸 ,如苏氨酸 ,撷氨酸 、 异亮氨
酸 、 亮氨酸和苯丙氨酸等在内的 16 种氨基酸 . 特别是
含有较多量的赖氨酸和精氨酸 ,每 10 克干品中分别
含 1 . 1 6 3~ 1 . 6 2 9 克和 1 . 1 0 1~ 一 5 2 克 ,菌丝体中的含
量高于子实体 。而且 ,氨基酸的总含量菌丝体也高于子
实体 . 菌丝体每 1 0 克干品中总含量为 25 . 54 克 , 子实
体中总含量为 21 . 56 克 。氨基酸相对组成 , 含量最高的
为谷氨酸和天门冬氨酸 ,最低的为胧氨酸 。菌丝体中除
苏氨酸 、 谷氨酸 、 眺氨酸和脯氨酸的相对含量低于子实
体外 ,其余 12 种氨基酸的相对含量都高于子实体 (见
下表 ) 。
盘针菇菌丝体和子实体氮荃酸的含 t
氨 基 酸 占千重 百分率 相对含量百分率
种 类 菌丝休 子实体 菌丝体 子实休
天 门 冬氨 酸 2 . 5 4 1 2 . 1 4 1 9 . 9 4 9 . 9 3
苏 氨 酸 1 . 1 9 0 1 . 0 5 3 4 . 6 6 4 . 8 8
丝 氨 酸 1 . 2 08 0 . 9 5 7 4 . 7 3 4 . 4 4
谷 氨 酸 3 . 5 4 0 3 . 8 4 8 1 3 . 8 5 ] 7 . 8 4
目一 氨 酸 1 . 2 8 6 ] . 0 0 8 5 . 0 3 4 6 7
丙 氨 酸 1 . 5 6 4 1 . 2 4 0 6 . 1 2 5 . 7 5
眺 氨 酸 0 . 1 2 0 0 . 15 0 0 . 4 7 0 . 6 9
撷 氨 酸 1 . 9 2 9 1 . 2 5 3 7 . 5 5 5 . 8 -
异 亮 氨 酸 2 . 1 3 0 1 . 6 0 0 8 . 3 4 7 . 4 2
亮 氨 酸 2 . 5 3 8 1 . 6 6 8 9 . 9 3 7 . 7 3
酪 氨 酸 0 . 8 2 0 0 . 6 5 4 3 . 2 1 3 0 3
苯 丙 氨 酸 1 . 2 6 4 0 . 8 3 8 4 . 9 5 3 . 8 9
赖 氨 酸 1 . 6 2 9 1 . 16 3 6 . 3 5 5 . 3 9
组 氨 酸 0 . 5 7 5 0 . 43 6 2 . 2 5 2 . 0 2
精 氨 . 酸 1 . 5 2 0 1 一0 1 5 . 0 5 5 . 1 1
脯 氨 酸 l , 16 5 1 . 7 5 3 4 . 56 8 . ] 3
三 、 讨 论
土豆 拱皮 醉母 玉米
图 3 . 不同荃质上 B 。 菌株
田` 二二奋石 巨巴吧皇见竺 叫 叫竺 爪旦 , ,
目 . 一【二二
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皿 l【二] 〔二
. 1 气一
对照 半年 一年
图 4 . 不同保存期 B 。 菌株
注 : 杨永春与齐玲敏同志参加部分工作 。
利用简单的碳水化合物 、 氮源和矿物质发酵培养
生产食用菌菌丝体 , 不仅菌丝产量高 、 生产效率高 、 成
本低 、 技术简单 , 而且还可以机械化生产 。 生产所得
的菌丝体和子实体一样 , 含有丰富的氨基酸及 B 族维
生素 , 营养价值很高 ( B城k , 196 0) . 我们用马铃薯葡
萄糖培养液 , 在 25 ℃下培养 9 天后 , 金针菇菌丝体的
干重收获量为 761 . 0毫克 / 1 0 0毫升 ; 以玉米粉为主的
培养液 , 培养 9 天菌丝得率高达 2 . 0 7 9 9 克 / 1 0 0 毫升 。
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