全 文 ：收稿日期:2002-02-02初稿;2002-03-12修改稿
基金项目:陕西省教育厅重点科研计划资助项目:松茸的驯化培养与菌类产品的深加工(99JK014)
　食用菌学报　2002.9(2):1 ～ 4
　Acta Edulis Fungi
文章编号:1005-9873(2002)02-01-04
不同地区四种松茸子实体可溶性蛋白的电泳分析
周选围1 　　林　娟2
(1陕西理工学院陕西省资源生物重点实验室 , 陕西汉中　723000)
(2四川大学生命科学学院 ,四川成都　610064)
摘　要　以西南地区不同产地的 4 个松茸子实体为材料 , 用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳分
析了其可溶性蛋白。结果表明 ,采自不同地区的松茸子实体可溶性蛋白的电泳图谱谱带间存在差
异。其中 , 采自四川通江和重庆的松茸子实体谱带相似 , 采自云南凯顺与云南昌明的松茸子实体
谱带相似。而采自四川通江和重庆的松茸子实体与采自云南凯顺和昌明的松茸子实体 , 其谱带间
差异较大。
关键词　松茸;可溶性蛋白;电泳图谱
中图分类号:S646.15;S601　　　　文献标识码:A
松茸〔 Tricholoma matsutake(S.Ito et Imai)Sing .〕属担子菌亚门 ,层菌纲 ,伞菌目 ,口蘑
科 ,口蘑属 。其菌肉肥厚 ,具有香气 ,味道鲜美 ,是名贵的野生食用菌。松茸除含有蛋白质 、脂
肪和多种人体必须的氨基酸外 ,还含有维生素B1 、B2 、C和 PP ,具有强身 、益肠胃 、止痛 、理气化
痰之功效〔1〕 。近年来 ,随着现代生物技术的发展 ,人们对生物种间和种内不同菌株的分类和鉴
别由原来的表型特征评价发展到从 DNA 水平(如 RAPD分析〔2〕)和蛋白质水平(如同工酶分
析〔3〕和可溶性蛋白分析〔4〕)进行鉴别。同工酶分析易受生理因素和环境条件的影响 ,稳定性较
差 ,而可溶性蛋白分析则不受上述因素的影响 。可溶性蛋白种类的差异 ,近年来常作为一种分
子标记用以区别生物种间或种内的差异〔5〕 。由于松茸及其近缘种外形相似不易区别〔6〕 ,因而 ,
进行松茸子实体可溶性蛋白的电泳分析有一定的实际意义 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　松茸子实体　样品 1采自四川通江 ,样品 2采自云南凯顺 ,样品 3采自云南昌明 ,样品
4采自重庆。
1.1.2　仪器与试剂　电泳仪 Electrophoresis Power Supply-EPS 1001系瑞典 Amersham Pharma-
cia Biotech公司产品;DYY-Ⅲ型电泳槽系北京六一仪器厂产品;蛋白质分子量标准(14 ～
66KD)购自上海华舜生物工程有限公司 。
1.2　方法
DOI:10.16488/j.cnki.1005-9873.2002.02.001
1.2.1　可溶性蛋白的提取　取0.5g 烘干的松茸子实体粉末 ,加入 5mL 中性蛋白提取液(Tris
6%,甘氨酸 28.8%),在冰浴上研磨成匀浆状后 ,移至离心管内 , 4℃静置过夜后 ,以5000r min
离心 20min ,取上清液备用。
1.2.2　可溶性蛋白质浓度的测定　按 Bradford法〔7〕测定可溶性蛋白质浓度 ,以牛血清白蛋白
(BSA)作为标准。
1.2.3　垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳　配制 2 倍浓度的样品缓冲液〔0.5mol L T ris-HCl
(pH6.8)2.0mL ,甘油 2.0mL , 20%(w v)十二烷基磺酸钠(SDS)2.0mL , 0.1%(w v)溴酚蓝
0.5mL ,2-α-巯基乙醇 1.0mL ,重蒸水 2.5mL〕,上样前先将样品与样品缓冲液等体积混合 ,
再在沸水浴上煮 4min ,10000r min离心 5min ,上样量为 30μL 可溶性蛋白液 。
采用 Laemmli不连续系统〔8〕 ,胶板厚度 1mm ,浓缩胶长 2.5cm ,分离胶长 10cm ,分离胶浓
度 12%,浓缩胶浓度 4%。电泳条件:浓缩胶每块电泳板 10mA ,分离胶每块电泳板 20mA。
2　结果
2.1　不同产地松茸可溶性蛋白
的含量
2.1.1 蛋白质标准曲线的制作　
以BSA为标准蛋白 ,将 BSA配成
0.5mg mL 的标准溶液。然后按
下列梯度稀释 BSA:先在每 10mL
小瓶中分别加入 BSA 0 、5 、10 、15 、
20μL , 再分别加入 0.15 mmol L
NaCI 100 、95 、90 、85 、80μL ,总体积
100μL。在每瓶中加入 1mL0.01%
考马斯亮蓝 G-250 ,振荡摇匀 ,室
温下放置 2min ,在 754 分光光度
计上测OD595值 ,并作图。标准曲
线见图 1。
2.1.2　松茸可溶性蛋白的测定
　松茸可溶性蛋白的测定结果
见表 1和表 2。样品 1和样品 4
的可溶性蛋白含量较高 , 样品 2
和样品 3 的可溶性蛋白含量较
低。
2.2　SDS单向电泳
不同产地松茸子实体可溶性
蛋白的电泳图谱见图 2。不同产
图 1　蛋白质标准曲线
Fig.1　Standard curve of the protein
表 1　不同产地松茸子实体可溶性蛋白的OD595值
Table 1　The OD595 value of the soluble protein(SP)in
T.matsutake fruitbodies col lected at different areas
样品
Samples
可溶性蛋白的 OD595值
OD 595 value of the SP
可溶性蛋白的平均OD595值
Average OD595 value of the SP
1 0.813 0.815 0.780 0.803
2 0.219 0.218 0.216 0.218
3 0.311 0.310 0.292 0.304
4 0.902 0.898 0.900 0.900
表 2　不同产地松茸子实体的可溶性蛋白含量
Table 2　Total soluble protein content of
T.matsutake fruitbodies col lected at different areas
样品
Samples
可溶性蛋白浓度(μg μL)
Concent ration of
the SP(μg μL)
可溶性蛋白体积(mL)
Volume of
the SP(mL)
可溶性蛋白总量(mg)
Total content of
the SP(mg)
可溶性蛋白百分含量(%)
Percent of
the SP(%)
1 2.27 3 6.81 1.36
2 0.62 3 1.86 0.37
3 0.87 3 2.61 0.52
4 2.54 3 37.61 1.52
地的 4个子实体之间 ,有两条谱带在位置 、宽窄 、浓淡等方面是一致的 ,说明这些子实体有一定
的亲缘关系及相同的种性 。在这 4个子实体中 ,样品 1与样品 4的谱带数较多 ,有 16条 ,而且
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两者的谱带相似;样品 2和样品 3的谱带数较少 ,只有 5条。在这5条电泳谱带中 ,除 Rf 0.414和
Rf0.579这两条谱带与样品 1和样品 4中 Rf值相同的两条谱带在位置 、宽窄 、浓淡等方面一
致外 ,另两条谱带(Rf 0.936和 Rf 0.179)与样品 1和样品4中 Rf值相同的两条谱带只是在位
置上相同 ,而在宽窄 、浓淡上均有差异;一
条谱带(Rf 0.936)在样品 1与样品 4的图
谱上颜色深 ,在样品 2和样品 3 的图谱上
颜色浅;一条谱带(Rf 0.179)在样品 1 和
样品 4的图谱上颜色浅 ,在样品 2 和样品
3的图谱上颜色深;还有一条谱带(Rf 0.
254)是样品 2和样品 3特有的谱带 。
按公式 S =2Nab (Na+Nb)(Nab 为
两菌株间 Rf值相同的谱带;Na 及 Nb 为
两菌株各自的总谱带数)计算各菌株间的
相似系数 ,样品 1和样品 4的谱带数相同 ,
相似系数为 1 ,样品 2 和样品 3 的谱带数
相同 ,相似系数也为 1;样品 1和样品 4与
样品 2和样品 3的相似系数为 0.38。
3　讨论
菌株间可溶性蛋白电泳图谱的差异反
应了它们之间遗传上的差异。本研究中的
1:样品 1 , 2:样品 2 , 3:样品 3 , 4:样品 4
1:Sample 1 , 2:Sam ple 2 , 3:Sample 3 , 4:S ample 4.
图 2　不同产地松茸子实体可溶性蛋白的电泳谱图
Fig.2　Electrophoretogram of the soluble protein of 4
T.matsutake fruitbodies col lected at different areas
4个菌株采自西南地区不同生态环境 ,观察子实体的形态后发现 ,采自四川通江与采自重庆的
子实体相似 ,均较小 ,颜色偏灰;而采自云南凯顺和云南昌明的子实体相似 ,均较大 ,颜色偏白 。
从可溶性蛋白含量上看 ,采自四川通江与重庆的松茸子实体可溶性蛋白含量高 ,而采自云南凯
顺和云南昌明的松茸子实体可溶性蛋白含量低 ,形态学上和可溶性蛋白含量上的差异与可溶
性蛋白电泳图谱上的差异是一致的 。目前 ,采用现代生物学技术鉴别真菌菌株间的亲缘关系
已有许多报道 ,对松茸分类的研究可见 Hwang SK(1998)〔9〕 ,MartinF(1999)〔10〕和曾东方(2000)〔11〕
的报道。还未见应用可溶性蛋白对松茸菌株进行鉴别的报道。
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Electrophoretic Analysis of Soluble Protein in Four
Tricholoma matsutake Fruitbodies Collected at Different Areas
Zhou Xuanwei
1　　Lin Juan2
(1 Shanxi Key Labo rato ry of Bio-Resources , Shanxi College of Science and Engineering , Hanzhong　723000)
(2 College o f Life Science , Sichuan University , Chengdu　610064)
Abstract　The soluble pro tein of four Tricholoma matsutake fruitbodies collected at different areas was analy-
sed w ith orthogonal slab poly acry lamide gel electropho resis.The result showed that the electropho re tog ram of T.
matsutake fruitbodies collected at Tongjiang of Sichuan and Chongqing was the same , and the electrophoretog ram of
T.matsutake fruitbodies collected at Kaishun and Changming of Yunnan was also the same;w hile the electro-
phoretog ram of T.matsutake fruitbodies collected at Tong jiang of Sichuan and Chongqing was different to the elec-
tropho retog ram of T.matsutake fruitbodies collected at Kaishun and Changming of Yunnan.
Key words　 Tricholoma matsutake , Soluble pro tein , Electrophoretogram.
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