全 文 ：与件情报通讯 1 0 9 1年第 9 卷第 4 ! l!j 3 3 (总 2 75 )
· 天然药物进展
落蓝 (大青叶 ) 多倍体子代与亲本的种子凝胶电泳比较
第二军医大学药学院 乔传卓 赵春丽
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十字花科植物落蓝是常用 中药大青叶 、
板蓝根的主要来源 , 全国各地均有 大 量 栽
培 。 我们 ( ` ) 用秋术仙碱处理萌发的种 子 , .成
功地获得了两个落蓝四倍体优质品系 。 本文
对新获得的两个蓓蓝四倍体 .钻系的种子及其
亲本二倍体的种子 , 用盘状凝胶 电泳法进行
了可溶性蛋 白、 过氧 化物同工酶的研究 , 现
很告如下 :
试验方法与结果
1
. 材朴 与制备
将蓓蓝多倍体 A 系、 B 系及亲本二倍体
成熟种子 , 各取 1 9 , 加电极缓冲液 2 m l研磨
匀浆 , 匀浆液转移至离心管 中, 高速离心机以
7 0 0 0转 / 分离心 15 分钟 , 匕清液备用 。 试剂
和凝胶按聚丙烯酚胺凝胶盘状电泳常规制备
( z )
。 分离胶浓度 7 . 5% , }阅隔胶浓度 2 · 5%。
2
。 凝胶 电泳
每支凝胶管加样 .异.液 1 0 0间 , 表面 小 心
加 l 滴含糖澳酚蓝指示剂 , 并 以电极缓冲液
覆盖 。 接通 电源 , 调整电流每管 1 m A , 当指
示剂到达分离胶后 ( 20 分钟 ) , 电流加大至
拣管 2 m A 。 待溟酚蓝行至距末端 1 c m时 ,
停止 电泳 , 即刻取出凝胶柱进行固定染色。
3
. 固定和染 色
叫一解性蛋白的固定 、 染色 : 12 . 5% 三氯
乙酸固 定 30 分钟 , 然后浸入含 2 %的考马斯
亮蓝 R 2 50 的 1 2 , 5%三氯乙酸 中染色 2 小 时 ,
再用 了%酷酸漂洗脱色至背景清晰 。
过氧化物同上酶凝胶枉的固定 、 染色 :
用水漂洗过的凝胶放入 20 m 0I . 2M醋酸 钠 ,
Z m ls m M硫酸锰 , 5 m 10 . 12 %过氧 化 氢
和 5 m l联苯胺一一愈创木酚溶液 ( SOm g 联
苯胺加上 1 35 m g愈创木酚 溶于 25 m l l0 % 醋
酸中 ) 混合液中 , 保温 30 分钟 。 取 出 漂洗
后 , 保存在 2 %醋酸中 , 于暗处保存 。
4
. 结 果
试验重复两次 , 结果 ( 见附图 ) 一致 。
电泳谱带根据染色深浅分为三级 : 色深者为
一级带 , 色浅者为二吸带 , 谱带扩散者为扩
散带 。
( 1 ) 可洛庄蛋 白电泳谱 : 一级带亲本
与两个子代基本相同 , 均为 两 条 , 带 宽 一
致 , 两条带的比 移 值 分 别为 0 . 76 、 0 。 74 、
0
.
7 4和 0 . 5 6 、 0 . 5 4 、 0 . 5 7 。 二纽带 , 子代 A
与亲本较相似 , 带数一样 , 比移值接近 , 只
是在带宽 、 颜 色深浅上略有不同 ; 子代 B 比
亲木少两条比移值为 0 , 91 、 0 . 8 5的带 , 其它
二吸带的宽度 、 颜色 、 比移值等也与亲本差
别较大 。
( 2 ) 过氧化物 同工酶谱 : 亲本和两个
子代的总带数相同 , 均为四条 。 三者都有一
条色兰 、 1司宽 , 比移值相近 l自带 。 其余三条
带等级 、 宽度 、 比侈值均不一样 。
多倍体子代与亲本种子的电泳图
3 4 ( 总2 7 6 )
图 1 一 3
倍体亲本 , 2 .
倍体 B 。
图 4 ~ 6
倍体亲 一大 , 5 .
倍体 B 。
药学情报通讯 1 9 9 1年第 9卷第 4 期
可溶性蛋白电泳谱 : 1 . 二
同源四倍休 A , 3 . 同源四
过氧化物同工酶谱 : 4 . 二
同源四倍体 A , 6 . 同源四
讨 论
以往有不少学者认为 ( 3 ) ,多倍体育种和
杂交育种 、 辐射育种等有所不同 。 一般它并
没有什么 “ 全新性状 ” 发生或重组合 (指同
源多倍体 ) , 而只是原有性状的加强和提高
等 《 “ ) 。 事实上 , 在许多人工同源多倍体育种
研究中发现 , 多倍体子代与亲本之间或多倍
体子代之间 , 可产生形态学或次生代谢产物
一一化学成份 _匕的变异 。 例如 , 有关化学组
分 .上的变异 , 在福录考 P h l o 二 d r u , n , n o n -
id i的栽培品系和它的一个天然变种 P 、 d r u -
m m o n d i i v a r
·
n l e l l i s t e r i一为 人〕 _二同 源 四
倍体中 , 其同源四倍体中有的甚至会产生亲
本所不含有的黄酮类 .成分 《连 ) 。 形态学上的变
异也十分显著 。 卡西亚菇诱发出的同源四 倍
体 , 其子代叶子上 的刺变化很大 , 有三株几乎
是不带刺的 , 它们 的叶缘上也变成了平整的
等 ( 6 ) 。我们 的研究也 表明 , 秘蓝四倍体子代
与二倍体亲不在植株大小 、 叶形 、花 、 叶表皮
组织的气孔 , 花粉粒等形态学上均有不同 。
化学成份靛蓝 、 靛玉红的含量 , 四倍体子代
大大高于亲本 。
目前有关人工同源多倍体变异的报道多
为形态学变异和次生代谢产物的变异 , 有关
染 色体加倍对植物初生代谢的影响 , 尚缺乏
系统的研究 , 本实验通过可溶性蛋白 、 过氧
化物同工酶的凝胶电泳 , 发现多倍体子代与
亲本之间、 多倍体子代之间电泳色带均不相
同 。 我们曾系统地比较落蓝二倍体亲本与二
个四倍体品系根中氨基酸 中组成 , 四倍体子
代与亲本相比也有量的或质 的差异 。 例如 B
沉;系中甘氨酸的含量是亲木的 16 倍 ; 亲本中
含有谷氨酸 、 天冬酞氨 、谷氨酸氨在 B 品系中
缺如 。 这些研究结果较系统地阐明了秋水仙
碱不仅能使染 色休加倍 , 而且也是一种能引
起遗传物质产生变异 的化学诱变剂 。
参 考 文 南丸
1
. 乔传卓等 : 植物学报 1 9 8。 ; 3 1 ( 9 ) : 6 7 8
2
. 弓氏树政等 : 化学通报 1 9 7 3 ; ( 1 ) : 30
3
. 胡 楷 : 西北大学学报 自 然 科 学版 1 9 7 7 ,
( 2 ) ; 4 6
4
. 乔传卓 : 中草药通讯 1 9 7 9 ; ( 1 2 ) : 3 5
石 . B h a t t B : E v i r o n m e n t a l a n d 它 x p e r s m -
e n t a l B o t a n y 1 9 7 7 ; 1 7 , 1 2 1
心 叶 淫 羊 蕾 挥 发 油 成 分 分 析
第二军医大学药学院 未洪平 廖时置 陈海生
心叶淫羊茬 ( E p i m e d i u m b r e v i c o -
r
un m M Xa i饥
·
) 系小桑 抖淫羊蕾属地上部
分全草 。 本草纲 目记载淫羊蕾有 “ 益精气 , -
坚筋骨 、 补腰膝 、 强心力” 等功 较 。 ( ` )为常
用补肾壮阳药 。 目前已从淫羊茬属植物 `补分
离鉴定了28 种黄酮类化合物 , 四种木脂索和
一种生物碱 ( 2 ) 。 有关淫羊蕾挥发油的化学成
分 , 至今尚未见文献报道 。 我们用气相色谱
一质谱法进行了心叶淫羊蕾挥发油 成 分 分
沂 , 共鉴定了 3 0个化学成分以供进一步研究
参考 。
实验与结果
一 、 材 料
心叶淫羊蕾地 上全草经水蒸汽蒸馏法得
到挥发油 。
二 、 方 法