全 文 ：EDIBLEFUNGI食用菌 2008(2)
野生假蜜环菌生物学特性
贺新生 吴钰娟
(西南科技大学生命科学与工程学院,四川绵阳621010)
摘 要 采用固体培养方法研究天然原料、碳源、氮源、pH值、
温度对假蜜环菌菌丝体生长的影响,及出菇试验。菌丝体生长
最佳的天然原料是麦麸、栎树枝、木屑等的热水提取液;最佳碳
源是可溶性淀粉、葡萄糖;最佳氮源是蛋白胨、酵母浸膏。适宜
温度是5~35°C,最适为20~25°C;适宜的pH范围是4~10,最适
为6.0~8.0。出菇培养料最适配方为麦麸比木屑为7∶13。子实体
形成的温度是18~28°C,最适温度是20~25°C,空气相对湿度为
80%~90%。
关键词 假蜜环菌 形态特征 生理特征固体培养
文章编号 1000-8357(2008)02-0019-03
假蜜环菌 Armilariatabescens(Scop.)Emel,中文别名亮
菌(江苏)、树秋(河南)、青杠菌、青杠钻(四川),又称小蜜环
菌、烁蘑、根索蘑。为亚洲特有菌种,是药食兼用菌。夏秋季在
树干基部或根部丛生,引起梨、桃等很多种树木根腐病。该种
类全球广泛分布。
该菌有很高的经济价值,乙醇、乙酸乙酯提取得到假蜜环
菌甲素、假蜜环菌乙素、假蜜环菌丙素。水提或碱提法得到杂
多糖 ATM3、AT-HW和AT-AC。菌丝或假蜜环菌甲素用于治
疗急性胆囊炎及慢性胆囊炎急性发作,对急性传染性肝炎,迁
延性肝炎,慢性肝炎有较好疗效。杂多糖组分体外实验证实
能抑制小鼠 S180肿瘤的生长和增强巨噬细胞的活性。多糖
具有抗肿瘤和免疫调节活性,对霉菌毒素具有一定解毒作用。
刘大岭(2004)等报道,假蜜环菌菌丝产量在第 6天可达
到最大值。在培养初期加入微量钴元素有利于刺激糖代谢提
高菌体对糖的利用率,主要是缩短延滞期。假蜜环菌对蔗糖
和葡萄糖利用率较高,进入指数生长期后需不断补加碳源。
合适的 C∶N有助于提高菌丝体产量,最佳培养基配方为:葡
萄糖 1%,蔗糖 1%,酵母浸膏 1%,KH2PO40.1%,MgSO4
0.05%,钴0.1mg/L。
对该菌的菌丝体生理特性和子实体生长条件、菌种生产
技术和子实体的商业化栽培技术的报道都很少。为了开发本
地珍稀野生蕈菌资源,采集野生假蜜环菌子实体,进行分离纯
化,获得该菌生长中所需营养及对环境要求的相关数据,为其
人工栽培提供理论参考。
1 材料与方法
1.1 供试菌株 假蜜环菌 Armilariatabescens,野生子实体
采自绵阳市青义邓家坡,采集日期:2005年 8月 23日。采集
者:王茂。常规方法分离得到纯菌丝,菌株编号:At.823。
1.2 试验方法
1.2.1 菌丝生长特性试验
1.2.1.1 天然提取物对菌丝生长的影响试验 基础培养基中
收稿日期:2007-06-26
表5 16个杂交菌株的栽培性状、农艺性状、单瓶产量和生物转化率比较
晰,菌盖直径适中。因此无论从产量还是从口感和栽培性状,
H11都是最优秀的。
3 讨 论
3.1 工厂化栽培真姬菇,菌株直接决定该企业的经济效益
的好坏,而菌株的优劣主要表现在产量、生产周期和稳定
性,产量越高,周期越短,菌种越稳定生产,则经济效益就越
好。而 H11单瓶产量高,生产周期比其两个亲本的生产周期
都短 2～3d,其抗病能力也不错;但是 H11最适的培养基配
方和最适的栽培环境的参数还不清楚,为取得最高的产量
和最佳的品质,有必要在大规模投产前进行中试来摸清这
些数据。
3.2 H11是由交配型为 A1B2的 3132号的 46号单核菌株
与交配型为 A3B4的 2632号的 102号单核株杂交得到的,是
不是符合这两种交配型的其它单核株杂交都能得到高产菌
株,这一点还需继续验证。
3.3 出菇实验结果显示:有的杂交菌株的子实体微苦,有的
不苦,有的颜色为土黄色,有的则为褐色,这些性状的遗传是
数量遗传还是质量遗传,控制这些性状的基因与真姬菇的交
配型基因有没有连锁关系,这些都有待继续研究。
参 考 文 献
[1] 王志强.真姬菇高产优质栽培技术[J].食用菌,2006(3):58-60.
[2] 上官舟建,林汝楷,张运茂.真姬菇生物学特性的研究[J].食用菌
学报,2004,11(4):1-7.
[3] 傅菌生,蔡衍山,柯丽娜,等.金福菇的交配型研究[J].食用菌学
报,2007,14(3):10-12.
[4] 叶 明 ,汪咏梅 ,潘迎捷.不同品种香菇交配型基因的确定[J].
安徽机电学院学报,2000,15(3):55-58.
[5] 张 敏,陈 平.香菇交配型基因的分析与应用研究进展[J].辽
宁农业科学,2005(3):45-47.
杂交菌
株编号
菌柄长度
/mm
菌盖直径
/mm
菌盖厚度
/mm
菌盖
颜色
口感
单瓶产
量/g
生物转化
率/%
H1 53.0 22.0 8.3 褐色 微苦 172.0 72
H2 48.1 36.0 7.5 土黄色 不苦 158.1 66
H3 46.5 24.1 7.8 土黄色 不苦 146.0 61
H4 61.0 26.4 9.1 土黄色 不苦 182.5 76
H5 38.6 21.0 7.8 褐色 微苦 166.0 69
H6 55.4 25.0 10.0 土黄色 不苦 175.1 73
H7 50.3 24.0 9.5 褐色 微苦 180.0 75
H8 56.8 21.2 9.0 土黄色 不苦 193.0 81
H9 65.1 20.0 9.0 土黄色 不苦 177.0 74
H10 49.3 35.0 9.4 土黄色 不苦 184.5 77
H11 59.9 24.0 10.1 土黄色 不苦 219.0 91
H12 58.5 20.5 8.0 土黄色 不苦 208.0 87
H13 52.6 20.8 7.0 褐色 微苦 170.8 71
H14 56.5 23.0 8.5 土黄色 微苦 174.2 73
H15 45.4 33.0 8.2 褐色 微苦 167.0 69
H16 60.0 16.9 7.0 土黄色 不苦 189.0 79
19- -
EDIBLEFUNGI食用菌 2008(2)
分别加入 200g麸皮、栎树树叶、栎树树枝、木屑、玉米、泥、马
铃薯、松针等8种天然原料的热水提取液1000mL。基础培养
基配方:葡萄糖 20g,蛋白胨 5g,KH2PO41.0g,K2HPO40.5g,
琼脂20g。
1.2.1.2 菌丝对碳源的选择试验 用葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、
乳糖、纤维素、可溶性淀粉作碳源。碳源20g,蛋白胨5g,琼脂
20g,KH2PO41.0g,K2HPO40.5g,加水 1000mL,pH自然。装
入平底试管制成固体培养基,接种,培养观察。重复5次。
1.2.1.3 菌丝对氮源的选择试验 用蛋白胨、酵母粉、尿素、
(NH4)2SO4、KNO3、NH4Cl、NH4HCO3作氮源。可溶性淀粉20g,
氮源5g,琼脂20g,KH2PO41.0g,K2HPO40.5g,pH自然。装入
平底试管制成固体培养基,接种,培养观察。重复5次。
1.2.1.4 菌丝对培养基 pH的选择试验 用基础培养基,1%
HCl和 1%NaOH调 pH,各处理的 pH从 4~10,共 8个处理,
装入固体平底试管。重复5次。
1.2.1.5 菌丝对温度的选择试验 培养基:用麸皮 200g制备
的1000mL热水提取液,葡萄糖20g,琼脂20g,KH2PO41.0g,
K2HPO40.5g,平板培养。温度从 5~40℃,级差 5℃,共 8个处
理。观测菌落直径,重复5次。
1.2.2 出菇试验 设 9个配方:①木屑 100%;②木屑 95%,
麸皮 5%;③木屑 90%,麸皮 10%;④木屑 85%,麸皮 15%;⑤
木屑80%,麸皮20%;⑥木屑 75%,麸皮 25%;⑦木屑 70%,麸
皮30%;⑧木屑65%,麸皮35%;⑨木屑60%,麸皮40%。含水
量 65%,pH自然。装在 500mL罐头瓶,0.15~0.20MPa灭菌
1h,接种25℃培养。重复3次,每重复10~15瓶。观察菌丝体
生长和子实体发育情况。
2 结果与分析
2.1 形态特征
2.1.1 子实体形态特征 子实体中等大。菌盖直径2.8~8.5cm,
幼时扁半球形,后渐平展,有时边缘稍翻起,蜜黄色或黄褐色,
老后锈褐色,中部色深有纤毛状小鳞片,不粘。菌肉白色或带
乳黄色。菌褶白色至污白色,或稍带暗肉粉色,稍稀,近延生,
不等长。菌柄长2~13cm,粗0.3~0.9cm,上部污白色,中部以
下灰褐色至黑褐色,有时扭曲,具平伏丝状纤毛,内部松软变
至空心,无菌环(图1)。孢子印近白色。孢子无色,光滑,宽椭
圆形至近卵圆形,7.5~10*m×5.3~7.5*m。
2.1.2 菌丝体的形态特征 菌丝体在暗处发荧光。在生长初
期菌丝呈纯白色,生长旺盛期呈淡黄色,能分泌出琥珀色液
体,生长后期黄褐色至全褐色。气生菌丝弱,均匀或不均匀,稠
密,略具爬壁性,基内菌索发达。菌丝索生长初期呈细条状,旺
盛时期呈块状,长势呈树枝形态,颜色由黄色逐渐变为黄棕
色,表面光滑,菌丝索黄色至黄棕色,根状扁平,不发荧光,如
图2所示。
菌丝显微特征:纤细不均匀,有分枝和隔膜,直径 2.0~
2.5*m,无明显锁状联合。
2.2 菌丝生长特性
2.2.1 天然提取物对菌丝生长的影响 试验结果如图 3,
8种天然原料培养基中,麸皮、栎树枝、木屑培养基中菌丝索
生长最旺盛。菌丝索分枝状,菌索发达,布满试管内的培养基,
在试管接种面上也形成菌皮。第50天,菌丝索到达试管底部,
长满培养基。
麸皮培养基上菌丝长速最快、长势最好,其次是栎树枝、
木屑、松针、栎树叶、马铃薯培养基,在添加玉米和泥土培养基
上菌丝长速最慢。
2.2.2 碳源对菌丝生长的影响 At.823在葡萄糖、麦芽糖、可
溶性淀粉中有菌丝索生长,在蔗糖、乳糖、纤维素中没有。第
63天,菌丝索已经到达试管底部。在蔗糖、乳糖、纤维素培养
基切面上,菌丝有一定量的生长,能够布满培养基切面,但菌
丝不能向下生长出现菌丝索。
2.2.3 氮源对菌丝生长的影响 At.823在酵母浸膏、蛋白胨
中有菌丝索生长,在尿素 、硫酸铵、氯化铵、硝酸铵 、碳酸铵这
5种氮源中无菌丝索生长。
2.2.4 pH对菌丝体生长的影响 在 pH为 4、5时,培养基呈
液态状态,pH为 7、8、9、10时培养基呈固体状态,菌丝索在
pH6、7、8时长势很好,在 pH9、10长势一般,在 pH4、5时菌
丝呈菌丝团状向下扩展生长。第63天时,最长的菌丝索已经
到达试管底部。生长速度最快为pH6、7、8的培养基,其次是
在pH4、5、9、10。
方差分析 F=7.84**>F0.01=3.43结果表明,7种不同 pH值
的培养基对菌丝索的生长有着极显著影响。pH值(x)与生长
长度(y,cm)的动态关系是:y=-8.8472+3.435x-0.2183x2。对方
程求解,当 x=7.87时,ymax=4.67达到最大,表明最适宜假蜜环
菌菌丝生长的 pH值为 7.87。菌丝体适宜生长的 pH范围为
4~10,最适宜的pH值为6~8。
2.2.5 温度对菌丝生长的影响 在 10~30℃范围内,适合菌
丝生长,当温度<5℃或>35℃时,无法生长。在第21天时,25~
30℃生长速度及长势最好,其次是10~20℃。方差分析F=7.08
>F0.01=4.58,结果表明,温度对菌丝索的生长有极显著影响。温
度(x,℃)与生长长度(y,cm)的动态关系是:y=-2.2+0.36x-
0.008x2。当 x=22.5时,ymax=1.85,表明最适宜菌丝生长的温度
是22.5℃。适宜菌丝生长的温度范围为10~30℃,最适温度为
图1 假蜜环菌子实体
表2 假蜜环菌菌丝索
20- -
EDIBLEFUNGI食用菌 2008(2)
金针菇菌丝航天诱变效应的研究
张 诚 陈柳萌 沈爱喜 陈庆隆 胡中娥 涂寿兰
(江西省农业科学院农业应用微生物研究所,江西南昌330200)
摘 要 试验对航天菌株与地面对照菌株进行了比较,主要进
行了拮抗试验、菌丝生长速度试验及栽培试验。研究结果表明,
金针菇航天菌株与原始菌株之间存在一定程度的变异,航天菌
株的产量均比原始菌株高且早熟。航天诱变为选育金针菇优良
菌株提供了新途径。
关键词 金针菇 航天育种 特性变异
文章编号 1000-8357(2008)02-0021-02
收稿日期:2007-11-19
生物种质通过航天搭载,在太空环境的强辐射、高真空、
微重力、超速度、高洁净等因素的复合作用下,会引起生理变
异和遗传变异,因而成为育种的新途径。已有研究表明,许多
农作物经过太空航天搭载以后,植株变异率均大幅度增加,具
有明显的诱变效应。研究将金针菇菌丝经试验卫星航天搭载
后,与地面对照菌株进行了比较,研究航天诱变对高等担子菌
金针菇的影响。
1 材料与方法
1.1 供试菌株 白色金针菇菌株江山白,由江西省农科院农
业应用微生物研究所保藏提供。该菌株经试验卫星航天搭载处
理后,经过前期试验,我们初步选择了7个菌株,分别编号为:
42-31、43-15、43-18、22-44、21-36、FV-2、FV-4。对照为(CK)。
20~25℃。
2.3 子实体培养
2.3.1 配方对菌丝体生长的影响 结果如表 1。At.823在配
方①中不生长,在配方②、③中生长极其缓慢,在配方④中生
长缓慢,在配方⑤、⑥、⑦、⑨生长均匀,在配方⑧中生长最旺
盛。方差分析结果,F=10.67>F0.01=3.26,各配方对菌丝的长速
有着极显著影响。
2.3.2 琼脂培养基上出菇 试验发现在琼脂基础培养基中有
明显的子实体形成(图 3)。表明 At.823能够在实验室条件
下出菇,出菇的温度为15℃,空气湿度为80%左右,光照条件暗
淡。
3 小结与讨论
试验表明,麸皮、栎树枝、木屑等天然物提取液非常适合
菌丝生长,在有麸皮提取液的培养基中,菌丝索呈现出较大的
块状,分枝特别发达。该菌适合的碳源、氮源的选择都比较狭
窄,如可溶性淀粉、葡萄糖、麦芽糖;适合的氮源是酵母浸膏、
蛋白胨。该菌在蔗糖、乳糖、纤维素、尿素、硫酸铵、氯化铵、硝
酸铵 、碳酸铵中无菌丝索出现。对以上无菌丝索出现的培养
基重复试验,排除操作误差,结果相同。在蔗糖、乳糖、纤维素
培养基切面上,菌丝有一定量的生长,能够布满培养基切面,
但菌丝不能向下生长出现菌丝索。在尿素、硫酸铵、氯化铵、硝
酸铵 、碳酸铵等氮源培养基中,菌丝体在培养基切面都无任
何生长迹象。而刘大岭(2004)等报道,假蜜环菌对蔗糖和葡萄
糖利用率较高。这种差异可能是因为刘大岭采用液体深层发
酵,笔者用的培养基为琼脂固体培养基,可能蔗糖在固体培养
基中不利于假蜜环菌的吸收。
该菌对培养基 pH值的选择非常广泛,菌丝体适宜生长
的pH4~10,最适宜的pH6~8。该菌适宜菌丝生长的温度10~
30℃,最适温度为 20~25℃,低于 5℃,高于 30℃,菌丝体会死
亡。该菌种对出菇的要求很高,在出菇试验中,容易被污染,在
实验室条件下,不容易出菇。
参 考 文 献
[1] KirkPM,CannonPF,DavidJC,StalpersJA.2001.Dictionaryofthe
Fungi.9thEdition.CABIPublishing.
[2] 秦国夫,赵 俊,田淑敏.中国蜜环菌的新生物种[J].菌物系统,
2000,19(4):509-514.
[3] 章灵华,肖培根.药用真菌中生物活性多糖的研究[J].中草药,
1992,23(2):95.
[4]NagaiK,TanakaJ,Synthesisandantitumoractivitiesofmitomyein
C (1-3)-beta-D-glucanconjugate[J].Chem.Pharm.Bul.Tokyo,
1992,40(8):986.
[5] 方积年,叶淳渠,吴淑云,等.亮菌多糖的研究 1.ATM3组分的分
离纯化及其性质[J].生物化学与生物物理学报,1984,16(3):22.
[6] LiuDL,YaoDS,LingR,etal.Production,purificationand
characterization ofan intracelar aflatoxin-detoxifizy from
Armilarelatabesens (E-20)[J].FoodandChemicalToxicology,
2001(39):461-466.
[7] KiboT.PolysaccharidesinfungiXXIX.Structuralfeaturesoftwo
antitumorpolysaccharidesfromthefruitingbodiesofArmilarela
tabesens[J].ChemicalandPharmaceuticalBuletin.Tokyo,1992,40
(8):2212-2214.
[8] 刘大岭,张 静,冉艳红,等.假蜜环菌液体深层发酵条件的研究
[J].生物技术,2004,14(3):47-48.
[9] 戴明华,邹文欣,郁文焕.假蜜环菌产胞外多糖发酵的初步研究
[J].南京大学学报,1995,31(3):436-442.
表1 不同配方对菌丝长势长速
图3 琼脂培养基上假蜜环菌子实体
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
配方号 长势 颜色 菌丝长速/(mm·d-1)
① + 白 0
② + 白 0.1
③ + 白 0.2
④ + 白 0.3
⑤ + 白 0.4
⑥ ++ 白 0.7
⑦ +++ 白 0.8
⑧ ++++ 白 1.1
⑨ ++++ 白 2.2
21- -