全 文 ：食用菌学报２０１２．１９（２）：９５～９９
收稿日期：２０１２－０４－０１原稿；２０１２－０４－２８修改稿
基金项目：上海市科技兴农重点攻关项目［编号：沪农科攻字（２００９）第２－２号］、国家重点基础研究发展计划－９７３计
划（编号：２０１２ＣＢ７２１１０２）、国家自然科学基金 （编号：３０８３０００２）和香港中文大学李嘉诚健康科学研究所
基金 （编号：７１０３５０６）的部分研究内容
作者简介：潘　伟（１９８５－），男，南京农业大学在读硕士，主要从事食药用菌活性成分的提取、分离纯化、结构鉴定
和生物活性的研究。
＊本文通讯作者　Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｄｓｈａｎｇ＠１６３．ｃｏｍ
文章编号：１００５－９８７３（２０１２）０２－００９５－０５
猴头菌提取物抗氧化活性研究
潘　伟１，２，刘瑞娜１，２，章炉军１，俞康莹１，尚晓冬１＊，赵国屏３，谭　琦１
（１上海市农业科学院食用菌研究所，农业部南方食用菌资源利用重点实验室，国家食用菌工程技术研究中心，
国家食用菌加工技术研发分中心，上海市农业遗传育种重点开放实验室，上海２０１４０３；
２南京农业大学生命科学学院，江苏南京２１００９５；３中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所，上海２０００３２）
摘　要：分别采用还原力测定法、Ｆｅｎｔｏｎ法、２，２－二苯基－１－苦肼基（ＤＰＰＨ）分析法和改良邻苯三酚自氧化法，
对猴头菌子实体水提物和醇提物的总还原力，清除·ＯＨ、ＤＰＰＨ·和Ｏ－２·自由基的能力进行测定。结果表明：醇
提物还原力较强，且还原力大小与浓度成正比；猴头菌水提物和醇提物均有清除·ＯＨ、ＤＰＰＨ·和Ｏ－２·自由基的
能力，且水提物的效果比醇提物好；水提物和醇提物对·ＯＨ、ＤＰＰＨ·和 Ｏ－２·的清除能力依次为 ＤＰＰＨ·、·ＯＨ
和Ｏ－２·，并且在一定浓度范围内，清除率与浓度成正比。
关键词：猴头菌；清除自由基；抗氧化活性
　　人体持续暴露在活性氧与促氧化剂中时，很
容易引起机体组织产生氧化应激，导致代谢性功
能紊乱以及一系列的慢性疾病［１］。食用一些富
含具有抗氧化活性物质的功能性食品可以减轻
机体组织氧化应激或预防损伤。一些合成抗氧
化剂与天然抗氧化剂相比，尽管具有很强的清除
自由基活性，但同时也具有强的毒副作用，因此
人们倾向于从自然界中寻求更安全的抗氧化剂。
ＬＥＥ等［２］从桦褐孔菌（Ｉｎｏｎｏｔｕｓ　ｏｂｌｉｑｕｕｓ）中分离
到一些具有较强活性的抗氧化成分（多酚类化合
物）。ＭＡＵ 等［３］研 究 表 明 灵 芝 （Ｇａｎｏｄｅｒｍａ
ｌｕｃｉｄｕｍ）是很好的天然抗氧化剂。同为食用菌
的猴头菌（Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ）是著名的药膳两
用真菌，具有抗溃疡、抗炎症、抗肿瘤、抗衰老、抗
疲劳、提高机体耐缺氧能力、增加心肌血液输出
量、加速机体血液循环、降血糖、保肝护肝和降血
脂、降血压等作用［４］。笔者通过对猴头菌子实体
的水提物和醇提物总还原力、清除·ＯＨ、２，２－二
苯基－１－苦肼基自由基（ＤＰＰＨ·）及Ｏ－２·自由基的
研究，旨在为其在医药保健方面的利用提供理论
依据。
１　材料与方法
１．１材料
　　猴头菌（Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ）子实体由上海市农业
科学院食用菌研究所提供。
１．２主要试剂与仪器
　　柠檬酸、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＮａＨ２ＰＯ４、六氰合铁酸钾
（铁氰化钾）、醋酸、三氯化铁、维生素Ｃ、ＦｅＳＯ４·
７Ｈ２Ｏ、３０％Ｈ２Ｏ２溶液、水杨酸、无水乙醇、９５％乙
醇等（国药集团化学试剂有限公司），ＤＰＰＨ（美国
Ｓｉｇｍａ公司），实验用水（娃哈哈纯净水）；ｉｎｆｉｎｉｔｅ
Ｍ２００ＰＲＯ酶标仪（瑞士ＴＥＣＡＮ公司）；ＵＶｍｉｎｉ－
１２４０分光光度计（日本ＳＨＩＭＡＤＺＵ公司）。
１．３提取物的制备
１．３．１水提物
　　干燥猴头菌子实体，用粉碎机粉碎，称取５０ｇ
粉末，加１Ｌ蒸馏水超声２０ｍｉｎ，过滤，滤液减压
浓缩，反复３次，合并浓缩液，转至蒸发皿中，
６０℃水浴蒸干，备用。
１．３．２醇提物
　　同样称取５０ｇ猴头菌子实体粉末，加１Ｌ
食　用　菌　学　报 第１９卷
９５％ 乙醇超声 ２０ ｍｉｎ，过滤，其它操作步骤
同１．３．１。
１．４母液制备
　　将猴头菌醇提物和水提物配制成２０ｍｇ／ｍＬ，
作为供试母液。
维生素Ｃ作为阳性对照，称取一定量的维生
素Ｃ定容到浓度为１ｍｇ／ｍＬ，作为对照母液，避
光４℃保存。
１．５ＤＰＰＨ溶液的配置
　　精密称取１９．７ｍｇ　ＤＰＰＨ，用无水乙醇溶解
并定容于２５０ｍＬ容量瓶中，ＤＰＰＨ 浓度为２×
１０－４　ｍｏｌ／Ｌ，避光４℃保存。
１．６总还原力测定
　　按照参考文献［５］操作进行总还原力测定。
１．７·ＯＨ自由基清除活性测定
　　以ＳＭＩＲＯＮＦＦ等［６］的Ｆｅｎｔｏｎ法为基础加以
改进，向试管中分别加入２、４、６、８、１０、１２、１４、
１８ｍｇ／ｍＬ不同 浓度 样 品 ２ ｍＬ，然 后 依 次 加
６ｍｍｏｌ／Ｌ的 ＦｅＳＯ４ 溶 液 ２ ｍＬ，２．４ｍｍｏｌ／Ｌ的
Ｈ２Ｏ２溶 液 ２ ｍＬ，摇 匀，静 置１０ｍｉｎ，再 加 入
６ｍｍｏｌ／Ｌ的水杨酸溶液２ｍＬ摇匀，３７℃水浴
３０ｍｉｎ，１０１６　ｇ离心１０ｍｉｎ，取上清液于５１０ｎｍ处
测吸光度（Ａ）值，以维生素Ｃ作为阳性对照。
清除率Ｓ＝［１－（Ａｉ－Ａｊ）／Ａ０］×１００％
Ａ０：以纯水替代样品的空白对照；Ａｉ：反应液
的Ａ 值；Ａｊ：以纯水替代水杨酸时提取液自身的
Ａ值
１．８ＤＰＰＨ自由基清除活性测定
　　采用ＤＰＰＨ分析法，根据参考文献［７、８］研
究方法加以改良，测定了提取物抗氧化活性。将
１ｍＬ样品加入１ｍＬ的２×１０－４　ｍｏｌ／Ｌ　ＤＰＰＨ无
水乙醇溶液，摇匀，避光放置３０ｍｉｎ，于５１７ｎｍ
处测定其Ａ值，以维生素Ｃ作为阳性对照。
清除率Ｓ＝［１－（Ａｉ－Ａｊ）／Ａ０］×１００％
Ａ０：以纯水替代抗氧化剂的ＤＰＰＨ溶液的Ａ
值；Ａｉ：加了抗氧化剂后ＤＰＰＨ 溶液的Ａ值；Ａｊ：
以无水乙醇替代ＤＰＰＨ 溶液的抗氧化剂溶液的
Ａ值
１．９Ｏ－２·自由基清除能力测定
　　采用改良的邻苯三酚自氧化法［９］。首先根
据下列公式计算邻苯三酚自氧化率。
邻苯三酚自氧化率 ＝ （Ａ４ｍｉｎ－Ａ１ｍｉｎ）／３
Ａ４ｍｉｎ为第４分钟的Ａ值，Ａ１ｍｉｎ为第１分钟的
Ａ值
然后测定加样后邻苯三酚自氧化率：操作方
法同上，加入邻苯三酚前分别加入２、４、６、８、１０、
１２、１４、１８ｍｇ／ｍＬ不同浓度猴头菌水提物、醇提
物。计算加样后邻苯三酚自氧化速率，得出对
Ｏ－２·的抑制率。
抑制率＝［（Ａ０－Ａｉ）∕Ａ０］×１００％
Ａ０：邻苯三酚自氧化率，Ａｉ：加样后的邻苯三
酚自氧化率
２　结果与分析
２．１总还原力大小
　　在２～１８ｍｇ／ｍＬ范围内，水提物总还原力
很低，不随着浓度的增加而增加；醇提物总还原
力随浓度的增加而升高，浓度为１８ｍｇ／ｍＬ时
相当于０．０９ ｍｇ／ｍＬ 维生素 Ｃ 的总还原力
（图１）。
图１　猴头菌提取物总还原力
Ｆｉｇ．１　Ｔｏｔａｌ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ａｎｄ　ｅｔｈａｎｏｌｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ
６９
第２期 潘　伟，等：猴头菌提取物抗氧化活性研究
２．２·ＯＨ自由基清除活性
　　猴头菌水提物在２～１０ｍｇ／ｍＬ范围内对
·ＯＨ自由基的清除率随浓度的升高而增加，当浓
度达到１０ｍｇ／ｍＬ时，清除率为９９．０３％。而醇
提物在一定浓度（２～１８ｍｇ／ｍＬ）对·ＯＨ 的清除
率随浓度的增加几乎不变（图２）。
图２　猴头菌提取物清除·ＯＨ自由基活性
Ｆｉｇ．２　Ｈｙｄｒｏｘｙｌ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ａｎｄ　ｅｔｈａｎｏｌｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ　ｆｒｕｉｔ　ｂｏｄｉｅｓ
２．３ＤＰＰＨ·自由基清除活性
　　随着维生素 Ｃ浓度的增加，对 ＤＰＰＨ·清
除率增强。在试验浓度范围内，维生素 Ｃ浓度
与ＤＰＰＨ·清除率呈现出良好的量效关系。猴
头菌水提物和醇提物对 ＤＰＰＨ·清除率在一定
浓度范围内具有很好的量效关系。水提物对
ＤＰＰＨ·清除效果要明显高于醇提物，２ｍｇ／ｍＬ
的水提物清除率高达９３．３３％，而２ｍｇ／ｍＬ的
醇提物清除率只有３６．８５％（图３）。
２．４Ｏ－２·自由基清除活性
　　在试验浓度２～１８ｍｇ／ｍＬ范围内，猴头菌
水提物和醇提物对 Ｏ－２·的清除率随着提取物
浓度的增加而增加。水提物对 Ｏ－２·的清除效果
明显要高于醇提物（图４）。
图３　猴头菌提取物对ＤＰＰＨ自由基的清除活性
Ｆｉｇ．３　ＤＰＰＨ·ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ａｎｄ　ｅｔｈａｎｏｌｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ
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食　用　菌　学　报 第１９卷
图４　猴头菌提取物清除Ｏ－２·自由基活性
Ｆｉｇ．４　Ｏ－２·ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ａｎｄ　ｅｔｈａｎｏｌｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｏｆ　Ｈ．ｅｒｉｎａｃｅｕｓ
３　讨论
　　１９５６年ＤＥＮＨＡＭ　ＨＡＲＭＡＮ提出衰老的
自由基学说，认为衰老过程中的退行性变化是
由于细胞正常代谢过程中产生的自由基的有害
作用造成的；机体中适量的自由基对细胞分裂、
分化、生长、消炎解毒等生理过程起积极作用，
但过量的自由基则会引起蛋白质变性、酶失活、
多糖降解、ＤＮＡ链断裂、生物膜结构损伤、细胞
解体乃至机体病变和死亡［１０］。已有许多研究指
出，自由基和活性氧是细胞癌变的原始引发机
制［１１，１２］。在本研究中，笔者发现猴头菌子实体
具有清除自由基的功能，这与早期中医的研究
结果相吻合，具有抗衰老、抗氧化等功效。当机
体内的自由基过量，食用猴头菌具有清除一些
自由基功能，降低其负面影响，从而使我们机体
更加健康。本实验中发现，猴头菌醇提物显示
出良好的总还原力，且总还原力大小与浓度成
正比；而水提物则显示出很低的总还原力且不
随浓度的增加而增加。水提物具有很好的清除·
ＯＨ、ＤＰＰＨ·和Ｏ－２·的活性，并且在一定浓度范围
内，清除率与其浓度成正比；在相同的浓度下
（２ｍｇ／ｍＬ），清除ＤＰＰＨ·的能力最强、·ＯＨ次之、
Ｏ－２·最弱。醇提物具有很好的清除ＤＰＰＨ·的能
力，且清除率与其浓度成正比；其次为清除·ＯＨ；
最差的为清除Ｏ－２·。从还原力和清除自由基两个
方面，猴头菌提取物在不同方面表现出各自的活
性，这可能与其所含不同的化学成分有关，而猴
头菌具体哪些成分与其总还原力及对自由基的
清除作用有关还有待进一步研究。
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８９
第２期 潘　伟，等：猴头菌提取物抗氧化活性研究
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Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　Ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ　Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ
Ｆｒｕｉｔ　ＢｏｄｙＥｘｔｒａｃｔｓ
ＰＡＮ　Ｗｅｉ　１，２，ＬＩＵ　Ｒｕｉｎａ１，２，ＺＨＡＮＧ　Ｌｕｊｕｎ１，ＹＵ　Ｋａｎｇｙｉｎｇ１，
ＳＨＡＮＧ　Ｘｉａｏｄｏｎｇ１＊，ＺＨＡＯ　Ｇｕｏｐｉｎｇ３，ＴＡＮ　Ｑｉ　１
（１Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ
Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ（Ｓｏｕｔｈ），Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｐ．Ｒ．Ｃｈｉｎａ；Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ
ｏｆ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ；Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｒ＆Ｄ　Ｃｅｎｔｅｒ　ｆｏｒ　Ｅｄｉｂｌｅ　Ｆｕｎｇｉ　Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ；Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ
Ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｏｆ　Ｓｈａｎｇｈａｉ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０１４０３，Ｃｈｉｎａ；２　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｊｉｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｎａｎｊｉｎｇ，Ｊｉａｎｇｓｕ　２１００９５，Ｃｈｉｎａ；３　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ
Ｅｃｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｆｏｒ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２０００３２，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ａｑｕｅｏｕｓ　ａｎｄ　９５％ （ｖ／ｖ）ｅｔｈａｎｏｌｉｃ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ　ｆｒｕｉｔ
ｂｏｄｉｅｓ，ｐｒｅｐａｒｅｄ　ｂｙ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｔ　６０℃ｆｏｒ　２０ｍｉｎｓ，ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｓｕｒｉｎｇ　ｂｏｔｈ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ
ｐｏｗｅｒ，ａｎｄ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ，ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ．Ｅｔｈａｎｏｌｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ
ａ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｏｔａｌ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｐｏｗｅｒ，ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ，ｗｈｅｒｅａｓ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗｅｒｅ　ｍｏｒｅ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ　ａｔ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ｈｙｄｒｏｘｙｌ，ＤＰＰＨ　ａｎｄ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ａｎｉｏｎ　ｒａｄｉｃａｌｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｈｅｒｉｃｉｕｍ　ｅｒｉｎａｃｅｕｓ；ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
［本文编辑］　马丹丹
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