全 文 ：书65
汲广全1，2，邓 靖1，2，莫正昌1，2，杨 娟2，*
(1.贵州大学生命科学学院，贵州贵阳 550025;
2.贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳 550002)
摘 要:采用二苯代苦味基肼自由基(DPPH·)法和水杨酸法两种常用的体外抗氧化活性评价方法，分别以石油醚、氯
仿、乙酸乙酯、正丁醇和水作为样品提取剂，对槲蕨不同极性溶剂提取物抗氧化能力进行分析，以抗坏血酸(VC)作阳
性对照。结果表明，除粗多糖外，槲蕨各部分提取物都表现出较强的清除 DPPH·活性。其中乙酸乙酯提取物对
DPPH·自由基的清除能力最强，半清除率浓度为 0.032mg /mL;槲蕨水提部分和粗多糖具有一定的清除羟基自由基的
能力，但要弱于 VC。
关键词:槲蕨，提取物，抗氧化能力，清除自由基
Study on antioxidant activity of Drynaria fortune extracts in vitro
JI Guang－quan1，2，DENG Jing1，2，MO Zheng－chang1，2，YANG Juan2，*
(1.College of Life Science，Guizhou University，Guiyang 550025，China;
2.Key Laboratory of Chemistry for Natural Products，Chinese Science Academy of Guizhou Province，Guiyang 550002，China)
Abstract:DPPH·(2，2－diphenyl－1－picrylhydrazyl)method and salicylic acid method were used to evaluate the
antioxidant activities in vitro of petroleum ether，chloroform，ethyl acetate，n － butanol and water extracts from
Drynaria fortunei.The results showed that except crude polysaccharide，the extracts had good scavenging activities
for DPPH radical.Especially，ethyl acetates extracts showed a higher activity and its half elimination ratio(IC50)was
0.032mg /mL.Water extracts and crude polysaccharide showed certain hydroxyl radical scavenging activity，but the
antioxidant activitie was weaker than that of VC.
Key words:Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm;extracts;antioxidant activity;free radical scavenging
中图分类号:TS201.2 文献标识码:A 文 章 编 号:1002－0306(2010)08－0065－03
收稿日期:2009－06－25 * 通讯联系人
作者简介:汲广全(1982－) ，男，在读硕士，研究方向:药食资源利用。
基金项目:国家自然科学基金(30760297) ;国家重点基础研究发展计
划(2009CB526512)。
槲蕨为槲蕨科植物槲蕨［Drynaria fortunei
(Kunze)J.Sm］的干燥根茎，又名爬岩姜、骨碎补，具
有补肾、活血、止血的功能。现代药理研究表明，槲
蕨对骨的发育生长具有促进作用，能增加骨痂厚度，
提高骨折愈合质量，防治药物中毒性耳鸣，并具有降
血脂、强心、镇静作用［1－4］。目前，人们普遍认为天然
抗氧化物可抑制自由基反应，最终可能改善健康，减
少癌症、心血管疾病和减缓衰老［5］。天然物质抗氧化
研究在医药学［6］、保健与功能食品［7］、美容养颜护
肤［8］等研究领域均具有非常重要的意义。槲蕨化学
成分主要含有黄烷类化合物、三萜类化合物［9］。关于
槲蕨提取物及其主要成分的抗氧化活性目前还尚未
见报道，本实验通过对槲蕨提取物体外抗氧化活性
进行评价，为今后更好地开发利用这一药用资源提
供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
药材 于 2008 年 6 月购自贵州省贵阳市万东桥
药材市场，经贵阳中医学院孙庆文副教授鉴定为槲
蕨科植物槲蕨［Drynaria fortunei(Kunze)J.Sm］的干燥
根茎;二苯代苦味基肼自由基(DPPH·) 百灵威公
司;VC、无水乙醇、H2O2、水杨酸、硫酸亚铁 均为国
产分析纯试剂。
HP－8453 型紫外可见分光光度计 惠普公司;
JA2003 精密电子天平 上海恒平科学仪器有限公
司;DK－98－11 电热恒温水浴锅 天津市泰斯特仪器
有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 样品提取与制备 称取槲蕨干燥根茎 1.2kg，
粉碎后用 80%乙醇回流提取 7 次，每次 2h，乙醇提取
液减压浓缩至无醇味，得槲蕨总醇提物。取槲蕨总
醇提物 20g，用水混悬均匀后倒入分液漏斗中，按2∶1
体积比依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃
取。各萃取液及正丁醇萃取后剩下的水层部分分别
减压浓缩至固体，真空干燥后分别得到石油醚提取
物 1.7g、氯仿提取物 3.2g、乙酸乙酯提取物 2.4g、正丁
醇提取物 3.4g 以及水层部分 2.9g，各提取部分作为
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表 1 槲蕨提取物对 DPPH·清除活性的 IC50值
样品 VC 对照 乙酸乙酯提取物 氯仿提取物 正丁醇提取物 水层部分 石油醚提取物
IC50(mg /mL) 0.0072 0.032 0.042 0.043 0.078 0.093
待测样品置于干燥器中保存备用。
将乙醇浸提后的槲蕨药材残渣在室温下挥干乙
醇，加入残渣质量 10 倍的蒸馏水，在沸水浴下回流
提取 7 次，每次 2h。提取液过滤，滤液合并，浓缩至
小体积，加入 95%乙醇沉淀滤液中多糖(乙醇最终浓
度不小于 80%)。沉淀真空干燥后得槲蕨水提粗多
糖 170g，作为待测样品置于干燥器中保存备用。
1.2.2 槲蕨提取物抗氧化活性的测定
1.2.2.1 对 DPPH·自由基清除能力的测定［10］
DPPH·自由基是一种稳定的自由基，在有机溶剂中
呈紫色，在 517nm 波长有较大吸收。当加入抗氧化
剂时，一部分自由基被清除掉，使在该波长下吸收减
弱，可借此来评价某物质的抗氧化活性。准确称取
各萃取物 50mg，用无水乙醇溶解并定容于 25mL 容
量瓶;准确称取正丁醇萃取后的水层部分和粗多糖
各 50mg，蒸馏水溶解并定容于 25mL 容量瓶，配制得
2mg /mL的样品，再以该质量浓度为基础配制成各所
需样品浓度;以无水乙醇配制 0.16mol /L DPPH·，置
于棕色容量瓶中。取 3mL样品溶液加入 3mL DPPH·
溶液于 25℃水浴中加热 15min 后，在 517nm 测得试
样吸光度(Ai) ，取 3mL 蒸馏水代替样品测得空白吸
光度(A0) ，以 3mL样品中加入 3mL蒸馏水测得样品
本底吸光度(Aj) ，其中(Ai)每个样品质量浓度做三
个平行，取平均值。以抗坏血酸作阳性对照，按下式
计算清除率:K(%)=［A0 －(Ai－Aj) ］/A0 × 100%。
1.2.2.2 对羟基自由基清除能力的测定［11］ 采用
Fenton反应，利用 H2O2 与 Fe
2 +混合产生·OH 自由
基，在该体系中加入水杨酸捕捉·OH 并产生有色物
质，该物质在 510nm 处有最大吸收。准确称取各萃
取物 50mg，用无水乙醇溶解并定容于 25mL 容量瓶;
准确称取粗多糖 50mg，蒸馏水溶解并定容于 25mL
容量瓶，配制得质量浓度 2mg /mL 的各样品，再以该
质量浓度配制成所需样品浓度。依次加入样品
4mL，9mmol /L FeSO4 0.5mL，9mmol /L 水杨酸 0.5mL，
8.8mmol /L H2O2 0.5mL，该体系于 37℃水浴中加热
30min，于 510nm测定得样品吸光度(Ai) ，将体系中
的样品改为加入 4mL 蒸馏水，测定得空白对照吸光
度(A0) ，当向体系中加入 0.5mL 蒸馏水代替
8.8mmol /L H2O2 时，测定得样品本底吸光度(Aj) ，其
中(Ai)每个质量浓度做三个平行，取平均值，以抗坏
血酸作阳性对照，按下式计算清除率:K(%)=
［A0－(Ai－Aj) ］/A0 × 100%。
2 结果与分析
2.1 对 DPPH·自由基的清除作用
由图 1 可以看出，各个部分对 DPPH·自由基都
表现出一定程度的清除能力，其中乙酸乙酯、氯仿和
正丁醇提取部分在浓度为 0.025～0.1mg /mL 时具有
明显的量效关系，而石油醚和水提部分在 0.025 ～
0.2mg /mL时具有明显的量效关系。清除能力大小依
次为 VC ＞乙酸乙酯部分 ＞氯仿部分 ＞正丁醇部分 ＞
水提部分 ＞石油醚部分 ＞粗多糖。尤其是乙酸乙酯部
分的量效关系曲线斜率较大，与 VC 接近，表明该部分
提取物成分对 DPPH·自由基具有较高的清除率。
图 1 槲蕨提取物对 DPPH·自由基的清除作用
从表 1 可以看出，槲蕨提取物对 DPPH·自由基
的半清除率浓度(IC50)大小依次是 VC ＜乙酸乙酯提
取物 ＜氯仿提取物≈正丁醇提取物 ＜水层部分 ＜石
油醚提取物。尤其是乙酸乙酯部分的 IC50值较接近
VC 的，提示该部分提取物具有良好的应用价值。
由于粗多糖清除 DPPH·自由基的活性较低，多
糖底色的影响比较大，因此未对高浓度多糖样品进
行测定，也未能测出 IC50。
2.2 对羟基自由基的清除作用
羟基自由基(·OH)被公认是生物系统中最具
活性的活性氧，能导致生物体内 DNA、蛋白质和脂质
氧化损伤。因此，我们同时采用 Fenton 反应方法测
定了槲蕨中水溶性粗多糖和水提部分对羟基自由基
的清除能力。从图 2 可以发现，粗多糖清除羟基自
由基的能力要稍好于水层部分，但粗多糖清除羟基
自由基的活性要远低于 VC，其他提取物对羟基自由
基没有清除作用。
图 2 槲蕨提取物对·OH自由基的清除作用
3 讨论
从实验所选的两种体外抗氧化活性评价方法中
可以看出，槲蕨提取物对 DPPH·自由基的清除能力
要优于羟基自由基。在同一个抗氧化评价指标中，
不同溶剂提取物的抗氧化能力存在较大差异。在对
DPPH·自由基的清除作用中，提取溶剂极性中等的
乙酸乙酯、氯仿和较大极性的正丁醇部分提取物的
抗氧化能力大于低极性的石油醚部分、高极性的水
部分和粗多糖。要弄清槲蕨各提取物抗氧化能力存
在的差异，需要进一步对各部分的成分进行研究。
(下转第 69 页)
69
表 2 样品在不同温度下的感官表现
样品 感官表现
A样 到实验结束，即过期后第 185d，各方面仍符合广式月饼的感官要求
B样 油脂呈深黄色，蛋黄心硬，其他方面仍符合广式月饼的感官要求
C样 实验开始阶段
，即过期后第 168d，各方面仍符合广式月饼的感官要求。到实验结束，即过期后第 258d，
莲蓉馅料呈暗红色，馅料靠近饼皮处出现局部僵粒，粘聚性和咀嚼性的强度下降
子反应的副作用也增强，结果导致过氧化值显著
增大。
2.3 酸败与广式月饼风味的关系
由表 2 分析可知，除了存放时间长短和温度变
化等导致样品色泽变暗外，其他方面仍符合广式月
饼的感官要求。也就是说，酸价超标的样品(B 样)
的口感未发生不良变化。所以，酸价不能正确反映
广式月饼中脂肪氧化酸败的程度。
3 讨论与结论
研究结果表明，广式月饼酸价和过氧化值的变
化规律与储存时间、温度变化有一定的相关性，即存
放时间越长，储存温度越高，广式月饼的酸价及其过
氧化值升高越快。低温储存，酸价和过氧化值变化
很小。高温储存必然对酸价、过氧化值产生不利影
响。时间的延长和温度的升高会影响油脂的新鲜
度，导致感官发生不同程度的恶化。但是，酸价超标
的样品，其品质经感官评价发现口感并无发生不良
变化。酸价不能准确地反映广式月饼在储存过程中
的油脂氧化问题。因此，在考虑放宽酸价标准范围
的同时，应协同其他方法或指标对广式腊味的质量
进行全面的监控。
参考文献
［1］国家质检总局，国家标准化委员会 .《月饼》国家标准(GB
19855－2005) ［S］.北京:中国标准化，2006:5.
［2］邬海雄 .广式月饼的生产技术［J］.广州食品工业科技，
2004，20(4) :92－94.
［3］T H阿普尔怀特 .贝雷:油脂化学与工艺学(第三册，第四
版) ［M］.秦洪万，厉秋岳，谢锡怡译 .北京:轻工业出版
社，1991.
［4］何洁仪，马林，杨阳，等 .广式月饼卫生质量控制的研究
［J］.华南预防医学，2004，20(1) :40－42.
［5］丁纯孝译 .油脂食品的劣化及其防止［M］.北京:商业部
科技情报研究所，1985.
［6］姚广训 .油脂的氧化变质［J］.油脂科技，1981(6，增刊) :
2l0－2l6.
［7］朱加虹 .浅谈油脂酸败及其过氧化值测定［J］.食品工业，
2001(3) :44－45.
［8］朱美芳 .临海市 1998－2001 年糕点卫生质量检测［J］.浙
江预防医学，2002，14(10) :26.
［9］覃秀丽，黄海燕，王洪强 .2001－2O02 年象州县糕点酸价及
过氧化值检测结果分析［J］.广西预防医学，2003，9(3):
166－167.
［10］李蓉，黄河青，李红光 .西安市 2000－2002 年市售月饼检
测结果［J］.中国卫生检验杂志，2003，13(2) :227.
［11］张禄生，袁文彬，张华，等 .食品油脂过氧化值测定方法
的研究［J］.粮油与油脂，2007(7) :35.
［12］管正超，刘有照 .影响油脂过氧化值的几点因素［J］.中
国油脂，1992(2) :53－55.
［13］李云捷，陆艳，钱彩虹 .从“月饼”看食品安全问题［J］.农
业工程技术:农产品加工，2007(8) :34－35.
［14］谢达平 .食品生物化学［M］.北京:中国农业出版
社，2004.
［15］孙丽琴，孙立君，郑刚 .不同的存放条件对油脂酸价和过
氧化值的影响［J］.粮油检测与加工，2007(2) :45－46.
［16］陈炳卿 .营养与食品卫生学［M］.北京:人民出版社，
1993:77－78.
［17］郑永裕 .油脂过氧化值测定影响因素的实验研究［J］.漳
州职业技术学院学报，2006，8(3) :27－29.
［18］GB /T 7099－2003《糕点、面包卫生标准》［S］.
［19］王叔淳 .食品卫生检验技术［M］.北京:化学工业出版
社，1988:179.
［20］GB /T5009.56－1996 中华人民共和国国家标准糕点卫生
标准的分析方法［S］
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
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参考文献
［1］马克昌，高子范，冯坤，等 .槲蕨提取液对小鸡骨发育的促
进作用［J］.中医正骨，1990，2(4) :7－9.
［2］周铜水，周汉荣 .槲蕨对大鼠实验性骨损伤愈合的影响
［J］.中草药，1994，25(5) :249－250.
［3］王重远，刘莉，任晓燕，等 .槲蕨对链霉素耳毒性解毒作用
的实验研究［J］.中华耳鼻咽喉科志，1989，24(2) :79－81.
［4］王敖格，王维信 .槲蕨对家兔组织内脂质含量的影响［J］.
中医志，1981，22(7) :67－70.
［5］Bae S H，Suh H J. Antioxidant activities of five different
mulberry cultivars in Korea［J］. Food Science and Technology，
2007，40(6) :955－962.
［6］杨锦华，李博，籍保平 .我国常见食用和药用植物的抗氧
化性研究［J］.食品科学，2006，27(6) :87－91.
［7］严奉伟，朱建飞，吴谋成 .功能食品清除自由基活性评价
方法及其进展［J］.长安大学学报:自然科学版，2006，3(4) :
214－217.
［8］余世望，肖小年，范青生 .60 种药食两用植物抗氧化作用
研究［J］.食品科学，1995，16(11) :3－5.
［9］吴新安，赵毅民 .槲蕨化学成分研究［J］.中国中药杂志，
2005，30(6) :443－444.
［10］高春燕，田呈瑞，周默 .枸杞多糖体外清除自由基活性研
究［J］.三峡大学学报:自然科学版，2005(5) :456－458.
［11］刘春兰，刘海青，邓义红，等 .沙棘叶水溶性多糖的分离
纯化及体外清除自由基活性研［J］.中药材，2006(2) :
151－154.