全 文 ：食用菌学报 2009.16(4):39～ 42
收稿日期:2009-10-21原稿;2009-11-01 修改稿
基金项目:国家科技部自然科学基金项目(编号:2006BAD06B08)的部分研究内容
作者简介:杜秀菊(1968-), 女 ,博士 , 副教授 , 主要从事食 、药用菌活性成分的提取 、分离纯化 、结构鉴定和生物活
性的研究 ,发表主笔论文 10 篇。
＊本文通讯作者
文章编号:1005-9873(2009)04-0039-04
金耳菌丝体醇提物体外抗肿瘤抗病毒活性研究
杜秀菊1 , 2 , 潘迎捷3 , 张劲松1＊ , 唐庆九1 , 杨　焱1 , 贾　薇1 , 刘艳芳1
(1 国家食用菌工程技术研究中心 ,农业部应用真菌资源与利用重点开放实验室 ,上海市农业遗传育种重点实验室 ,
上海市农业科学院食用菌研究所 , 上海市农业科学院天然药用资源研究开发中心 , 上海 201106;
2聊城大学生命科学学院 ,山东聊城 252059;3 上海海洋大学 ,上海 200090)
摘　要:采用体外肿瘤细胞株(小鼠白血病细胞株 L1210、人乳腺癌细胞株MCF-7 和人肠腺癌细胞株 SW620)
的增殖抑制试验模型和抗病毒(流感甲型病毒和疱疹病毒)的筛选模型 , 对 3 个金耳(Tremella aurantialba)菌
株菌丝体醇提物活性进行比较研究。抗肿瘤试验结果表明 , 3 种提取物材料在高浓度(200 μg/mL)时 ,对 3 个
供试肿瘤细胞株的细胞增殖均有明显的抑制作用 , 其中以 YK 的抑制活性最高(对 L1210 、SW620 和MCF-7 的
抑制率分别为 89.4%, 75.0%和 64.1%);在中浓度(50 μg/mL)时 , 均表现出一定的抑制作用;而在低浓度
(10 μg/mL)时 ,则均无明显的抑制作用。抗流感甲型病毒和抗疱疹病毒试验结果表明 , 只有 YK 对流感甲型
病毒表现有抗病毒活性 , 但此活性较弱。
关键词:金耳;醇提物;抗肿瘤;抗病毒
　 　金 耳 (Tremel la aurantialba Bandoni et
Zang.),属于担子菌亚门 (Basidiomyco tina),层菌
纲(Hymenomycetes),银耳目(Tremellales),银耳科
(Tremellaceae),银耳属(Tremella)。金耳又名脑
耳 ,表面金黄色 ,是我国传统的珍稀食 、药用菌 ,其
口感润滑细腻 ,是高级宴会上的名贵佳肴 ,同时也
是补益身心 、延年益寿的著名滋补珍品[ 1] 。
目前有关金耳的研究主要集中于金耳多糖 ,
已有多项研究表明 ,金耳多糖具有增强免疫功
能[ 2] 、降血糖[ 3 , 4] 、降血脂[ 4] 、抗氧化[ 5] 、抗肿瘤[ 6]
等功效;但对于金耳菌丝体有机溶剂提取物生物活
性的研究报道较少 ,目前仅有牛四坤等[ 7] 报道过金
耳菌丝体抗凝血的有效部位为正丁醇提取部位 ,而
有关金耳不同菌株菌丝体乙醇提取物的生物活性
目前尚未见报道。本试验对金耳的 3个菌株菌丝
体醇提物的抗肿瘤和抗病毒活性进行了研究。
1　材料与方法
1.1 材料
1.1.1 供试菌种
　　金耳 YN0633 、JK和 YK菌种由上海市农业
科学院食用菌研究所提供。
1.1.2 肿瘤细胞株
　　小鼠白血病细胞株 L1210 、人乳腺癌细胞株
MCF-7和人肠腺癌细胞株 SW620均购自中国科
学院细胞研究所。
1.1.3 培养基
　　母种培养基:PDA 培养基。
液体发酵培养基:蔗糖 2%,玉米粉 1.2%,酵
母膏 0.5%,KH 2PO 4 0.1%,MgSO 4 0.01%。
1.2 试剂
　　5-Fu为 Sigma-Aldrich 公司产品 ,二甲基亚砜
(DMSO)为 AMERSCO 产品 , RPMI-1640 和胎牛
血清(FBS)为 GIBCO 公司产品 ,显色剂 Alamar
Blue为 Biosource 公司产品 ,病毒唑(RBV)为浙江
康裕药业有限公司产品 ,无环鸟苷(ACV)由湖北
科益制药厂生产。其他试剂均为国产分析纯。
1.3 金耳菌丝体培养
　　液体发酵培养基装液量 100 mL/250 mL ,接
种量 10%, 140 r/min , 25 ℃下培养 5 d ,纱布过
滤 ,菌丝体经蒸馏水冲洗数次后 ,冷冻干燥至恒
重 ,称重 ,3次重复。
DOI :10.16488/j.cnki.1005-9873.2009.04.007
食　用　菌　学　报 第 16 卷
1.4 醇提物的制备
　　将不同金耳菌株菌丝体分别用粉碎机粉碎成
粉末状后 ,加入 10倍量的 95%乙醇回流提取6 h
后 ,滤纸过滤取上清 ,400 g离心 10 min去除杂质 ,
上清液用 R210/V850旋转蒸发仪(BǜCHI公司)减
压浓缩 ,冷冻干燥仪(Thermo Savant公司)进行冷
冻干燥 ,得到 3个金耳菌株的菌丝体醇提物 ,称重。
各醇提物分别使用二甲亚砜(DMSO)稀释为 10
μg/mL 、50μg/mL和 200μg/mL。
1.5 金耳醇提物对肿瘤细胞的抑制试验
1.5.1 肿瘤细胞的培养
　　悬浮肿瘤细胞株 L1210:在 37 ℃、含 5%CO2
条件下 ,用 RPMI1640完全培养基传代培养 ,混悬
液 300 g 离心 3 min后 ,去除上清 ,收集细胞。
贴壁肿瘤细胞株SW620和 MCF7:在 37 ℃、
5%CO 2条件下 ,用 RPM I1640 完全培养基传代
培养 ,用 0.25%胰酶或 5%EDTA 溶液消化 ,混
悬液 300 g 离心 3 min后 ,去除上清 ,收集细胞。
1.5.2 抑癌试验
　　将收集的肿瘤细胞均用 RPM I1640完全培养
基稀释到 1×104个/mL。取 199 μL 细胞液接于
96孔板中 ,然后加 1 μL 待测样品 ,阴性对照以
1μL DMSO替代 ,阳性对照以 5-Fu替代 。细胞培
养72 h后 ,分别于 570 nm和 600 nm测定吸光值 ,
每孔加 20 μL显色剂 Alamar Blue , 培养 6 ～ 8 h
后 ,再分别于 570 nm和 600 nm测定吸光值。细
胞抑制率按照 Alamar Blue Assay所给的公式计
算:Inhibition rate (抑制率 , %)={1-[ 117216×
A570(sample)-80856×A600(sample)] /[ 117216×
A570(blank)-80856×A600(blank)]}×100 , 其中
A570(sample)和 A600(sample)为加 Alamar Blue 后
测定的吸光值;A570(blank)和 A600(blank)为加
Alamar Blue前测定的吸光值。各测试样品均设 3
次重复。
1.6 抗病毒活性试验
　　测试样品的抗流感甲型病毒活性和抗疱疹
病毒活性委托国家新药筛选中心(上海)测定。
1.7 统计学分析
　　数据以平均值±标准偏差(mean±standard
deviation)表示 ,统计学检验采用组间 t检验进行处理 ,
n=3。使用STST 统计软件包进行方差统计分析。
2　结果与分析
2.1 不同金耳菌株的菌丝体得率及醇提物得率
　　YK的液体培养菌丝体得率最高(9.1 g/L),
其次为 JK(8.9 g/L), YN0633最低(4.9 g/ L)。
YN0633 、JK 和 YK 的醇提物得率分别为 2.8%、
2.5%和 1.7%。
2.2 金耳菌丝体醇提物对肿瘤细胞的抑制作用
　　金耳菌丝体醇提物对肿瘤细胞的抑制作用
试验结果见表 1 。在高浓度(200μg/mL)时 ,3 个
菌株的菌丝体醇提物对供试癌细胞株的细胞增
殖都有明显的抑制作用:其中 YK 对 3个癌细胞
株 L1210 、SW620和MCF-7的抑制率最高 ,分别
为(89.4 ±8.4)%, (75.0±9.8)%和(64.1 ±
4.3)%,与阳性对照 5-Fu(0.5 μg/mL)相应抑制
率间差异不显著;在中浓度(50 μg/mL)时 , 3 个
供试菌株醇提物均表现出一定的抑制作用:但除
YK 对癌细胞株 SW620抑制率与阳性对照间差
异不显著外 ,其余 8个测试组合的抑制率均显著
低于阳性对照;在低浓度(10 μg/mL)时 ,对癌细
胞株的抑制作用均不明显。
表 1　金耳菌丝体醇提物对肿瘤细胞增殖的抑制作用
Table 1 Inhibition of L1210 , SW620 and MCF-7 cell proliferation by ethanolic extracts of Tremella aurantialba mycelia
菌株
Str ain
提取物浓度
Extr act concentra tion(μg/mL)
抑制率 I nhibition r ate(%)
L12101) SW6201) MCF-71)
YN0633 10 21.7±2.8 e 36.5±1.3 def 30.1±11.1 de
50 47.3±2.3 d 41.9±6.1 cde 44.0±1.5 bcde
200 53.3±1.2 d 48.1±7.8 bcd 60.4±5.1 abc
JK 10 14.3±2.3 e 19.6±3.6 f 21.7±4.5 e
50 60.1±3.1 cd 53.4±3.5 bcd 27.1±6.1 de
200 75.1±4.5 bc 64.5±4.0 ab 49.8±7.7 bcd
YK 10 28.5±6.9 e 25.7±3.2 e f 38.2±12.1 cde
50 75.3±10.2 bc 58.8±6.3 abc 47.1±4.3 bcd
200 89.4±8.4 ab 75.0±9.8 a 64.1±4.3 ab
阳性对照2) Positive control2) 97.7±3.0 a 74.1±5.1 a　 77.1±5.4 a　
1)不同小写字母表示差异显著(P<0.05), 2)阳性对照为 0.5μg/mL 5-Fu
1)Different lower case letters:d ifference s ignificant at P 0.05 , 2)pos it ive cont rol:0.5μg/mL 5-Fu
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第 4 期 杜秀菊 ,等:金耳菌丝体醇提物体外抗肿瘤抗病毒活性研究
2.3 金耳菌丝体醇提物的抗病毒活性的筛选
结果
　　金耳菌丝体乙醇提取物的抗病毒活性见表 2。
YK醇提物具有一定的抗流感甲型病毒活性 ,其病
毒半数抑制浓度(IC50)为577.35μg/mL ,半数有毒
浓度(TC50)>1000 ,表明此提取物的毒性较低 ,选
择指数(SI)>1.73 , 与阳性对照 RBV(SI 为
243.04)比较 ,抗流感甲型病毒活性较弱 ,因此 YK
提取物为低毒低效的抗流感甲型病毒物质;而
YN0635和 JK提取物均未表现出抗流感甲型病毒
活性。抗疱疹病毒筛选结果表明 , 3个菌株对疱疹
病毒 HSV-Ⅰ和 HSV-Ⅱ均无抗病毒活性。
表 2　金耳菌丝体醇提物抗流感甲型病毒和疱疹病毒测试结果
Table 2　Inhibition of A-FLU , HSV-Ⅰ and HSV-Ⅱ viral proliferation by ethanolic extracts of Tremella aurantialba mycelia
样品1)
Sample1)
TC50(μg/mL)
流感甲型病毒2)
A-FLU2)
疱疹病毒2)HSV2)
HSV-Ⅰ HSV-Ⅱ
IC50(μg/mL) SI 3) IC50(μg/mL) SI3) IC50(μg/mL) SI 5)
YN0633 48.11 - - - - - -
JK 288.68 - - - - - -
YK >1 000.00 577.35 >1.73 - - - -
RBV 384.00 1.58 243.04 / / / /
ACV >100.00 / / 1.092 >91.57 1.62 >1.73
1)样品栏中“YN06331” 、“ JK”和“YK”分别代表 YN06331 、JK 和 YK 菌丝体乙醇提取物 , “ RBV”和“ACV”分别为抗流感甲型病毒和抗
疱疹病毒阳性对照;2)表中“ -”表示样品在最大无毒剂量下无抗病毒活性 , “/”表示未测;3)SI =TC 50/ IC50
1)Samples “YN06331” 、“ JK” and “YK” repres en t eth anolic ext racts of s tr ains YN06331 , JK and YK mycelium , respectively , “RBV”
and “ACV” are posi tive con trol samples us ing an ant i-A-FLU and an ant i-HSV tes t , respect ively;2)“-” Samples without an tivi ral
act ivity at high est non-toxic concen trat ion , “/” not d etected;3)SI:selective ind ex , SI =TC50/ IC 50
3　讨论
　　药用真菌是中药宝库中的重要组成部分 。
一般认为 ,药用真菌的抗癌活性成分是多糖类 ,
其中从香菇中提取的香菇多糖已被开发成注射
液用于临床[ 8] ,药用真菌多糖的抗癌机理是通过
调节免疫系统而间接地抑制肿瘤细胞增殖[ 9] ,至
于药用真菌是否含有直接抑制癌细胞的成分尚
无定论[ 10] 。本研究中 3 个菌株菌丝体醇提物在
供试中 、高浓度下对肿瘤细胞株 L1210 、SW620 、
MCF-7细胞增殖均表现出了一定的抑制活性;3
个供试细胞株在同样试验条件下 , 以细胞株
L1210最为敏感 ,受抑制程度最大 ,3个菌株提取
物浓度为 200μg/mL时对其抑制率分别为(53.3
±1.2)%、(75.1±4.5)%和(89.4±8.4)%;而 3
个供试菌株中 ,以 YK醇提物的抑癌细胞增殖活
性最高 , JK 次之 , YN0633 活性最低。3 个供试
菌株的醇提物 ,对疱疹病毒 HSV-Ⅰ和 HSV-Ⅱ均
无抗病毒活性 ,对流感甲型病毒也只有 YK 表现
较弱抗病毒活性 , IC50为 577.35 μg/mL 。
无论从抗肿瘤活性还是从抗病毒活性来看 ,
在 3个供试金耳菌株中 , YK 都是性能比较优良
的菌株。本实验中所选用的醇提物为粗提物 ,可
进一步分离纯化以找到低毒 、高效的产品。
本研究结果为进一步合理开发金耳液体发
酵资源 ,为开发抗肿瘤 、抗病毒的保健品以及药
物提供参考。
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[本文编辑] 　于荣利
Effect of Ethanolic Extracts of Tremella aurantialba Mycelia on
the Proliferation of Selected Tumor Cells and Viruses in vitro
DU Xiuju
1 , 2 , PANG Yingjie3 , ZHANG Jinsong1＊ , TANG Qingjiu1 ,
YANG Yan
1 , JIA Wei1 , LIU Yanfang1
(1National Engineering Resear ch Center of Edible Fungi;Key Laboratory of Applied Mycological Resources and Utilization ,
Ministr y of Agriculture , People s Republic of China;Key Laboratory of Agricultural Genetics and Breeding of Shanghai;
I nstitute of Edible Fungi , Shanghai Academy of Agricultural Sciences , Research Center of Natural Medicinal Resource
of Shanghai Academy of Agricultural Sciences , Shanghai 201106 , China;2College of Life Science , Liaocheng University ,
Liaocheng , Shandong 252059 , China;3Shanghai Ocean University , Shanghai 200090 , China)
Abstract:Ethanolic extr acts of mycelia from thr ee str ains of Tremella aurantialba were tested for in vitro
tumor cell inhibitory eff ects using mur ine leukemia(L1210), human intestinal adenocar cinoma(SW620)and
human breast cancer (MCF-7)cell lines , and for antivir al activity using A-FLU , HSV-Ⅰ and HSV-Ⅱ viral
models.Signif icant inhibition of tumor cell prolif er ation by extr acts of all three mycelial samples was
obse rved at 200 μg/mL concentr ation.H ighest levels of L1210 , SW620 and MCF-7 cell inhibition , observed
with extr acts of str ain YK , were 89.4%, 75.0% and 64.1%, respec tive ly.Lower inhibitory ef fec ts were
re corded at 50 μg/mL concen tr at ions , and only weak inhibition was observed when cell lines were tr eated
with extr act concentr ations of 10 μg/mL.Antivir al activity , in the form of weak e ffe cts against A-FLU
virus , was observed only in the case of eth anolic extr acts of str ain YK mycelium.
Key words:Tremella aurantialba ;ethanol extr acts;antitumor activity;antivir al activity
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