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不同寄主植物对菟丝子、南方菟丝子多糖含量的影响



全 文 :• 2005 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年 9月第 26 卷第 9 期 CJTCMP , September 2011, Vol . 26, No. 9
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Research,2009,20(12):2944-2946
(收稿日期:2010年7月11日)
不同寄主植物对菟丝子、南方菟丝子多糖
含量的影响
林慧彬1,杨金平2,林建强3
(1山东省中医药研究院中药资源研究室,济南 250014;2滨州市结核肿瘤医院,滨州 251700;
3山东大学微生物技术国家重点实验室,济南 250100 )
摘要:目的:研究不同寄主上的菟丝子、南方菟丝子中多糖的含量。方法:用苯酚-浓硫酸法测定含量。
结果:寄生于大豆上的菟丝子及南方菟丝子多糖含量较高。菟丝子及南方菟丝子种间多糖的含量差异不明显。
随着菟丝子种子成熟程度的增加,多糖及可溶性糖的含量均增加。 结论:寄主植物影响菟丝子及南方菟丝子中
多糖的含量。
关键词: 菟丝子;南方菟丝子;寄主;多糖
基金资助:山东省自然科学基金项目(No.ZR2009CM054)
Infl uence of hosts on polysaccharide content in C. chinensis and C. australia
LIN Hui-bin1, YANG Jin-ping2, LIN Jian-qiang3
(1Research Laboratory of Chinese Medicinal Resources, Shandong Institute of TCM, Jinan 250014, China; 2Binzhou Hospital of
Tuberculosis and Cancer, Binzhou 251700, China; 3School of Life Sciences, State Key Lab of Microbial Technology, Shandong
University, Jinan 250100, China)
Abstract: Objective: To study the contents of polysaccharide of C. chinensis and C.australia growing in different hosts.
Method: The samples were determined by the method of phenol-concentrated sulphuric acid. Results: Polysaccharide contents of C.
chinensis and C. australia growing in Glycine max (L.) Merr. were higher than those growing in other plants. The polysaccharide
content had no obvious difference between C.chinensis and C. australis. The contents of polysaccharide and reducing sugar
·论著·
通讯作者:林建强,济南市山大南路27号山东大学微生物技术国家重点实验室,邮编:250100,电话:0531-88365218
E-mail:Jianqianglin@sdu.edu.cn
• 2006 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年 9月第 26 卷第 9 期 CJTCMP , September 2011, Vol . 26, No. 9
菟丝子是常用中药,具有滋补肝肾、固精缩尿、
安胎明目的作用,常用于肾虚腰痛、尿频、带下、视力
衰退、脾肾虚泻、胎动不安等症。药理试验证实,菟
丝子多糖是其有效成分之一,具有明显的抗衰老作
用,作用机制与其增强免疫功能,清除氧自由基及抗
脂质过氧化等作用有关[1-2]。笔者曾经报道了山东菟
丝子属(Cuscuta Linn.)4种菟丝子的多糖含量研究[3],
进一步研究发现,菟丝子中的多糖含量除了与品种
有很大关系外,与寄主植物、生长状况等因素有密切
关系。为了进一步考查影响菟丝子质量的因素,笔者
进行了以下实验研究。
材料
1. 药物 样品分别采自山东济南、临沂等地,经
笔者鉴定为菟丝子(Cuscuta chinensis Lam.)和南方
菟丝子(C. australis R. Br.),并对寄主植物进行鉴
定。将样品晒干后,搓出种子,除去杂质后备用。
2. 仪器与试剂 岛津UV-265FW分光光度计;
D-无水葡萄糖对照品(中国药品生物制品检定所,供
含量测定用,批号:0833-9501);浓硫酸(莱阳康德
试剂有限公司,批号:090211)优级纯;苯酚(宜兴
辉煌化学试剂厂,批号:081220)、无水乙醇(天津广
成化学试剂有限公司,批号:081027)等试剂均为分
析纯。
方法和结果
1. 可溶性糖提取条件的优选 取菟丝子样品
(编号:20508)约0.5g,4份,脱脂处理后挥干溶剂,
精密称定,置三角瓶中。采用超声提取法,用80%乙
醇为溶剂,在60℃条件下,以溶剂量、超声时间、提
取次数为考察因素进行实验(表1),提取液定容于
100mL容量瓶中。精确吸取提取液各0.2mL于试管
中,加入蒸馏水1.8mL、6%苯酚1mL、浓硫酸5mL,摇
匀,放置2min,于沸水浴中加热15min,迅速冷至室
温,在490nm处测吸收度,计算可溶性糖含量。结果
见表2。
子粗粉用80%乙醇80mL,分2次60℃超声提取,每次
30min。
2. 多糖提取条件的优选 将提取可溶性糖后的
药粉残渣及滤纸定量转移至烧瓶中,各加入蒸馏水
一定量回流提取,以溶剂量、回流提取时间、提取次
数为考察因素进行正交实验(表3)。回流提取液定
容于250mL容量瓶中。精确吸取提取液各0.5mL于试
管中,加入蒸馏水1.5mL、6%苯酚1mL、浓硫酸5mL,
摇匀,放置2min,于沸水浴中加热15min,迅速冷至室
温,在490nm测吸收度,计算多糖含量。结果见表4。
表3 多糖回流提取的因素水平表
因素水平
1
2
提取时间A(min)
30
60
提取次数B
1
2
溶剂量C(mL)
100
200
表4 多糖回流提取的 L4(23)正交试验设计及结果
试验号
1
2
3
4
均值1
均值2
极差
时间A
1
1
2
2
5.080
5.070
0.010
次数B
1
2
1
2
4.715
5.435
0.720
溶剂量C
1
2
2
1
5.025
5.125
0.100
多糖含量(%)
4.67
5.49
4.76
5.38
-
-
-
表2 可溶性糖超声提取的 L4(23)正交试验设计及结果
试验号
1
2
3
4
均值1
均值2
极差
时间A
1
1
2
2
3.985
3.940
0.045
次数B
1
2
1
2
3.715
4.210
0.495
溶剂量C
1
2
2
1
3.865
4.060
0.195
可溶性糖含量(%)
3.64
4.33
3.79
4.09
-
-
-
表1 可溶性糖超声提取的因素水平表
因素水平
1
2
提取时间A(min)
30
60
提取次数B
1
2
溶剂量C(mL)
60
80
increased with the seed mature degree. Conclusion: The hosts infl uenced polysaccharide content of C. chinensis and C. australia.
Key words: C. chinensis; C. australia; Host; Polysaccharide
Fund assistance: Shandong Provincial Natural Science Foundation of China (No. ZR2009CM054)
方差分析显示各因素的影响均不显著。由表2可
见,提取次数的影响在3个因素中较为明显,优选的
菟丝子可溶性糖的最佳提取条件为A1B2C2。即菟丝
方差分析显示各因素的影响均不显著,由表4可
见,提取次数的影响较为明显,其次是溶剂用量。菟
丝子多糖的最佳提取条件为A1B2C2。即经80%乙醇
提取后的菟丝子粗粉,用蒸馏水200mL分2次回流提
取,每次30min。
3. 糖的测定
3.1 标准曲线的制备 称取干燥至恒重的葡萄
• 2007 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年 9月第 26 卷第 9 期 CJTCMP , September 2011, Vol . 26, No. 9
表5 菟丝子及南方菟丝子多糖及可溶性糖含量比较
编号
20508
20401
20308
20302
20307
20303
20305
20209
20008
20309
20528
20513
97013
20501
20516
20503
20512
20502
植物名
菟丝子
南方菟丝子
寄主植物
黄芩(栽培)
Scutelliaria baicalensis Georgi
黄芩(栽培)
S. baicalensis Georgi
黄芩(栽培)
S. baicalensis Georgi
达呼里胡枝子(野生)
Lespedeza davurica (Laxm.) Schindl.
徐长卿(栽培)
Cynanchum paniculatum (Bge.) Kitag
甘野菊(野生)
Dendranthema lavandulifolium
(Fisch. ex Trautv.) Ling et Shin
猪毛菜(野生)
Salsola collina Pall.
蓬子菜(野生)
Galium verum L.
葎草(野生)
Humulus scandens (lour.) Merr.
绿豆(栽培)
Phaseolus radiatus L.
大豆(栽培)
Glycine max (L.) Merr.
醴肠(野生)
Eclipta prostrata (L.) L. Mant.
大豆(栽培)
Glycine max (L.) Merr.
酸枣(野生)
Ziziphus jujuba Mill.
秋苦荬菜(野生)
Ixeris denticulata (Houtt.) Stebb.
小花山桃草(野生)
Gaura parvifl ora Douglas
牛膝(栽培)
Achyrnthes bidentata Bl.
山绿豆(野生)
Phaseolus minimus Roxb.
多糖含量 (%)
5.99
6.60
9.70
5.25
6.08
4.39
6.91
10.28
8.73
7.95
10.81
5.83
10.05
8.62
9.71
4.53
6.42
6.98
可溶性糖含量 (%)
4.37
5.00
5.13
6.17
3.73
6.91
6.51
6.16
6.26
7.79
3.62
10.37
6.88
5.68
4.24
9.19
5.24
3.68
成熟程度
5-7成熟
近成熟
成熟
基本成熟
基本成熟
6-8成熟
近成熟
成熟
成熟
基本成熟
成熟
近成熟
成熟
成熟
近成熟
基本成熟
基本成熟
近成熟
产地
蒙阴
蒙阴
蒙阴
蒙阴
蒙阴
蒙阴
蒙阴
济南绣川
济南绣川
济南绣川
济南章丘
济南章丘
济南赵家庄
济南南郊
济南章丘
济南南郊
济南章丘
济南南郊
糖对照品约0.5g,精密称定。置500mL容量瓶中,
用少量蒸馏水溶解后,稀释至刻度。分别取1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL于100mL容量瓶中,加蒸
馏水至刻度。各吸取葡萄糖标准溶液及空白蒸馏
水2mL,加新配制的6%苯酚1mL,置冰浴中,加浓
硫酸5mL,振荡混匀后放置2min,再置沸水浴中加
热15min,迅速冷却至室温,在波长490nm处测定
吸收度,以吸收度A对浓度C作标准曲线,回归方
程为:C=11.901A+0.00632,r=0.9998。线性范围为
0.0103-0.0609mg/mL。
3.2 精密度试验 精确吸取对照品溶液2mL,共
取5份,照“3.1”项下方法操作,在490nm处测吸收
度,结果RSD为2.12%。
3.3 稳定性试验 精确吸取20508号供试品溶液
2mL,照“3.1”项下方法,在0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h
分别测定吸收度。结果表明,显色后室温放置0-3h
内吸收度稳定,RSD为2.65%。
3.4 加样回收率试验 称取20508号样品粗粉约
• 2008 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年 9月第 26 卷第 9 期 CJTCMP , September 2011, Vol . 26, No. 9
0.5g,共5份,精密称定,分别加入葡萄糖一定量,按
样品液制备与测定方法操作,计算回收率,结果平均
回收率为97.37%,RSD为3.05%。
3.5 样品制备和含量测定 各菟丝子样品经粉
碎,过40目筛,80℃烘1h,取约0.5g,精密称定。加
石油醚(60℃-90℃)110mL,回流脱脂1h。挥干石油
醚,药粉置圆底烧瓶中,各加80%乙醇40mL,超声
0.5h,滤过,重复操作1次,定容于100mL容量瓶中。
精密吸取0.2mL于试管中,加入蒸馏水1.8mL、6%苯
酚1mL、浓硫酸5mL,摇匀,放置2min,于沸水浴中加
热15min,迅速冷至室温,在490nm处测吸收度[4]。计
算各样品中可溶性糖的含量,结果见表5。
将过滤后的滤纸和残渣同置圆底烧瓶中,各加入
100mL蒸馏水,回流提取0.5h,滤过,重复操作1次,
定容于250mL容量瓶中。精确吸取0.5mL,加蒸馏水
1.5mL,6%苯酚1mL、浓硫酸5mL,摇匀,放置2min,于
沸水浴中加热15min,迅速冷至室温,在490nm处测吸
收度。计算各样品多糖含量,结果见表5。
结果显示不同寄主植物上的菟丝子中多糖的含量
范围在4.39%-10.81%,可溶性糖含量在3.62%-7.79%。
不同寄主的南方菟丝子中多糖及可溶性糖的含量范围
分别是4.53%-10.05%及3.68%-10.37%。以寄生于大豆
上的菟丝子中多糖含量最高,达10.81%。寄生于大豆
上的南方菟丝子多糖含量也较高,为10.05%,总糖
含量最高,为16.93%。菟丝子与南方菟丝子种间多糖
及可溶性糖的含量差异不明显。
讨论
1. 寄主植物对菟丝子的质量及药效有影响 曾
有报道,因服用寄生于马桑(Coriaria nepalensis
Wall.)上的菟丝子而发生中毒的事件[5]。菟丝子中多
糖成分与其功效有相关性。本研究首次考查了寄主
植物对菟丝子多糖的影响,对于提高菟丝子药材的
质量具有重要意义。
2. 不同寄主植物对菟丝子及南方菟丝子的多糖
及可溶性糖含量有影响 寄生于蓬子菜、大豆及黄
芩上的菟丝子多糖含量较高,寄生于大豆、秋苦荬菜
上的南方菟丝子多糖含量高。寄生于甘野菊上的菟
丝子及寄生于小花山桃草上的南方菟丝子多糖含量
较低。不同寄主植物上的菟丝子及南方菟丝子中多
糖及可溶性糖的含量可相差1-2倍。菟丝子中多糖含
量可能与寄主植物的养料供应有关,植株相对较大
的寄主植物养分供应较充分,菟丝子长势好,籽粒饱
满,多糖含量较高;而生于较小植株上的菟丝子,由
于养分供应不充分,菟丝子中多糖含量往往偏低。
3. 菟丝子的生长发育程度对多糖及可溶性糖含
量有影响 寄生于黄芩上的菟丝子,随着种子成熟
程度的增加,多糖及可溶性糖的含量均增加,药材质
量也随之提高。
菟丝子药材目前仍以野生为主,随着它在药品
及保健品中使用量的不断增加,药材供不应求,价格
不断上扬。因此,进行菟丝子药材的规范化种植势在
必行。本研究为种植菟丝子中寄主植物的选择提供
了依据。
参 考 文 献
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