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菌物学报
jwxt@im.ac.cn 22 January 2016, 35(1): 68‐76
Http://journals.im.ac.cn Mycosystema ISSN1672‐6472 CN11‐5180/Q
Tel: +86‐10‐64807521 Copyright © 2016 Institute of Microbiology, CAS. All rights reserved.
研究论文 Research paper DOI: 10.13346/j.mycosystema.140173
基金项目：上海市农业科学院青年科技基金[沪农青年科技 2012(04)]
Supported by Youth Science Fund Project of Shanghai Academy of Agricultural Science [Youth Science of Shanghai Agriculture,
2012(04)].
*Corresponding author. E‐mail: yangyan@saas.sh.cn
Received: 2014‐07‐16, accepted: 2014‐11‐11
猴头菌不同发育阶段产生的多糖结构特征及免疫活性
唐川 1, 2 吴迪 1 杨焱 1* 刘艳芳 1 周帅 1 颜梦秋 1 唐传红 1
1 农业部南方食用菌资源利用重点实验室 国家食用菌工程技术研究中心 上海市农业科学院食用菌研究所 上海 201403
2 上海师范大学生命与环境科学学院 上海 200234
摘 要：采收猴头菌 Hericium erinaceus 7 个不同发育阶段的子实体，经热水浸提后分别采用 20%、50%、70%的乙醇终浓
度进行分级沉淀，获得 21 个多糖组分，对它们的结构特征及体外免疫活性进行了研究。结果表明，在猴头菌发育过程中，
多糖总得率呈现先增大后减小的趋势，在第 5 阶段达到最大值 0.92%。20%醇沉的多糖含量也呈先增大后减小的趋势，在
第 5 阶段达到最大值 42.87%，其大分子量多糖（1 000–5 000kDa）所占比例最高。50%、70%醇沉多糖均为小分子量多糖，
约为 10–40kDa。获得的猴头菌多糖组分中，单糖组成多以岩藻糖、半乳糖、葡萄糖和甘露糖为主（相对比例存在一定差
异）；另外，第 1 阶段 20%、70%醇沉多糖还含有少量的核糖，第 7 阶段 20%醇沉多糖含有一定量的鼠李糖；7 个时期 50%
醇沉多糖均含有一定量的葡萄糖醛酸。所得多糖样品均具有刺激巨噬细胞释放 NO 的活性，其中 20%醇沉多糖的活性优于
50% 和 70% 醇沉多糖，在 50μg/mL 时就表现出显著的体外免疫活性。此外，在第 5 阶段即中菌刺期产生的多糖活性最优，
说明在此阶段采摘可以获得最佳的猴头菌多糖原材料。本研究为猴头菌生长发育过程中活性多糖的动态形成研究提供了
一定的理论基础。
关键词：猴头菌，生长发育，多糖形成，结构特征，体外免疫活性
Structural properties and immunological activities of polysaccharides from
Hericium erinaceus fruiting bodies in different development stages
TANG Chuan1, 2 WU Di1 YANG Yan1* LIU Yan‐Fang1 ZHOU Shuai1 YAN Meng‐Qiu1
TANG Chuan‐Hong1
1Key Laboratory of Resources and Utilization of Edible Fungi (South), Ministry of Agriculture; National Engineering Research
Center of Edible Fungi; Institute of Edible Fungi, Shanghai Academy of Agricultural Sciences, Shanghai 201403, China
2College of Life and Environmental Sciences, Shanghai Normal University, Shanghai 200234, China
Abstract: Fruiting bodies of Hericium erinaceus harvested at seven different growth stages were extracted by hot water and
唐川 等 /猴头菌不同发育阶段产生的多糖结构特征及免疫活性
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graded ethanol precipitation to final concentration of 20%, 50% and 70%, and 21 crude polysaccharide fractions were obtained.
Then structural properties and immunity activities in vitro of polysaccharides were studied. Results showed that in the whole
developmental stages of H. erinaceus fruiting bodies, the overall yield of polysaccharides appeared an increasing trend at first
then decreasing after the fifth stage. At fifth stage the maximum yield was 0.92%. Polysaccharide content of 20% ethanol
precipitation also showed an increasing trend at first then decreasing, and the maximum polysaccharide content was 42.87% at
the fifth phase, in which high molecular weight polysaccharides (1 000–5 000kDa) had the highest proportion. Polysaccharide
molecular weights of 50% and 70% alcohol precipitation were all small, ranging from 10 to 40kDa. Most of the H. erinaceus
polysaccharides obtained consisted of fucose, galactose, glucose and mannose, while some differences in the relative
proportions existed. The polysaccharides of 20%, 70% ethanol precipitations contained a small amount of ribose at the first
stage and 20% ethanol precipitation contained some rhamnose at the seventh stage. All stages of 50% alcohol precipitation
polysaccharides contained a certain amount of glucuronic acid. All the 21 fractions of polysaccharide could significantly
stimulate macrophages to release NO in vitro, and activity of polysaccharides of 20% ethanol precipitation was better than that
of 50% and 70% ethanol precipitation, which showed good immune activity in vitro at 50μg/mL. Results showed that the
activities of polysaccharides at the fifth stage were best, indicating best medicinal and health protection effects, and the
polysaccharides at this stage could be regarded as the best materials for production of health products. Our findings provided a
theoretical basis for the study of polysaccharide dynamic formation during the development of H. erinaceus fruiting bodies.
Key words: Hericium erinaceus, growth, polysaccharide formation, structural properties, in vitro immunological activity
猴头菌 Hericium erinaceus (Bull). Pers.属于担
子菌门 Basidiomycota，伞菌纲 Agaricomycetes，红
菇目 Russulales，猴头科 Hericiaceae，广泛生在我
国北方，特别是在蒙古栎 Quercus mongolica 上常
见，造成主干心材白色腐朽（戴玉成 2010，2012）。
猴头菌是著名的药食兼用菌（戴玉成和杨祝良
2008；戴玉成等 2010），其性平、味甘、入药利五
脏、助消化，临床上用于治疗神经衰弱、胃炎及
胃溃疡等（杨焱等 2000；Dong et al. 2006）。多糖
作为猴头菌的主要功能成分之一，具有提高免疫
力、抗肿瘤、降血糖、抗突变、抗衰老等功效（Sheu
et al. 2013）。
目前，对食用菌不同生长发育阶段多糖的研究
主要集中在灵芝上（宝萍萍等 2011），有关猴头菌
发育阶段多糖的研究较少。真菌的生长发育是一个
复杂的生命过程，不同生长发育阶段涉及到新陈代
谢、激素调控、营养物质合成及转运、细胞分裂及
分化、信号转导等多个代谢途径的协同调控
（Webster & Weber 2007）。有研究表明，多糖的生
物活性与多糖含量、蛋白含量、分子量分布及化学
组成等理化性质有关（Camelini et al. 2005），同时
这些理化性质与子实体的发育关系显著（Liu et al.
2012）。李巧珍等（2011）对华中猴头发育阶段粗
多糖含量、蛋白质含量、体外免疫活性的研究发现
在小菌刺期采收，能获得口感较好的子实体，中
菌刺期采收可以作为优质的保健品或药品的原
料，而有关发育过程中分级沉淀多糖的分子量分
布与生物活性的关系涉及较少，也缺乏系统全面
的报道。
本研究以新鲜的猴头菌为原材料，经水提、乙
醇分级沉淀，对不同发育阶段多糖进行初步分离。
比较各多糖组分中多糖含量、单糖组成、分子量分
布及体外刺激巨噬细胞活性的差异，为选择免疫活
性较好的多糖组分提供依据，以期为猴头菌生长发
育过程中多糖形成及多糖构效关系的研究提供理
论基础。
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1 材料与方法
1.1 材料
供试菌株猴头 0605，由上海市农业科学院食
用菌研究所提供。猴头菌 H. erinaceus 子实体，于
2012年 8月–2012 年 11 月在上海市农业科学院食
用菌研究所国森生物科技有限公司进行常规袋料
栽培出菇。按李巧珍等（2011）的方法将猴头菌
子实体生长过程划分为 7 个阶段，依次命名为 H1、
H2……H6、H7（图 1），并对这 7 个阶段进行取样，
所采集的子实体直接用于多糖的制备。
1.2 试剂和仪器
葡聚糖标准品和单糖标准品为 Sigma‐Aldrich
公司产品；DMEM 培养基、RPMI 1640 培养基、胎
牛血清、胰酶为 Gibco 公司产品；青霉素、链霉素
为 Amersco 产品；细菌脂多糖（lipopolysaccharide，
LPS）为 Sigma 公司产品。RAW264.7 细胞株（小鼠
巨噬细胞株）购自 ATCC（American Type Culture
Collection）。其他试剂均为国产分析纯。
OPTi Brix54 数 显 手 持 式 折 光 仪 ， 英 国
Bellingham+Stanley（B+S）公司；Synergy HT 酶标
仪，Bio‐TEK 公司；R210 旋转蒸发仪，BUCHI 公司；
Allegra 25R Centrifuge 离心机，Beckman 公司；
Waters e2695 高效液相系统，Waters 公司；八角度
激光光散射仪及粘度检测器，Wyatt 公司；ICS2500
离子色谱仪，Dionex 公司。
1.3 猴头菌不同发育阶段多糖组分的制备
取适量 7 个生长发育阶段的猴头菌子实体鲜
品，按料液比 1:1.5（W:V）加入蒸馏水，100℃提
取 2h，提取 2 次，合并提取液，浓缩到可溶性固
形物 16°Brix，9 803×g 离心 15min。上清添加无水
乙醇，使乙醇终浓度达到 20%，在 4℃静置 12h，
离心，收集沉淀，用蒸馏水溶解，冻干，获得的多
糖依猴头菌 7 个生长发育阶段依次命名为 H1P20、
H2P20……H6P20、H7P20；上清液继续加适量乙醇，
按上述方法调节乙醇终浓度分别达到 50%、70%，
获得的多糖分别命名为 H1P50、H2P50……H6P50、
H7P50 和 H1P70、H2P70…… H6P70、H7P70。
1.4 多糖含量和蛋白含量的测定
以 D‐葡萄糖和牛血清白蛋白（BSA）为对照品，
采用苯酚‐硫酸法和 Thermo Scientific 公司的 BCA
蛋白浓度定量试剂盒（Wiechelma et al. 1988），测
图 1 猴头菌不同生长发育阶段子实体形态特征 H1–H7：猴头菌生长发育的 7 个阶段；H1：现蕾期；H2：无菌刺期；H3：
分裂期；H4：小菌刺期；H5：中菌刺期；H6：成熟期；H7：成熟后期.
Fig. 1 Morphological characteristics of Hericium erinaceus fruiting bodies at different growth stages. H1–H7: The seven stages of
growth and development of H. erinaceus fruiting bodies; H1: Bud‐forming stage; H2: Stage without spine; H3: Split stage; H4:
Small spine stage; H5: Moderate spine stage; H6: Mature stage; H7: Post‐mature stage.
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定多糖组分中多糖含量和蛋白含量。
多糖得率＝粗多糖的质量(g)/子实体的质量(g)×多糖
含量×100%
1.5 HPSEC‐MALLS‐RI 联用分析多糖分子量分布
1.5.1 样品的制备和处理：称取 5mg 样品，溶解于
1mL 流动相中，流动相为含 0.05mol/L 的 NaH2PO4
和 0.15mol/L 的 NaNO3溶液（pH 7，0.02%叠氮钠），
配制成浓度 5mg/mL 的溶液。用 12 000×g 离心
20min 后取上清液，经 0.22μm 的水相微孔膜过滤
后进行 HPSEC‐MALLS‐RI 分析。
1.5.2 色谱分析条件：分析柱选 TSK PWXL6000 和
TSK PWXL3000 凝胶色谱柱串联后分析，流速为
0.5mL/min，色谱柱温用柱温箱恒定在 35℃；激光
检测器光源波长选用 623.8nm。多糖在溶液中的折
光指数增量（dn/dc）按照 0.146mL/g 计算。
1.5.3 数据处理：使用 Astra（version 6.1.1，Wyatt
Technology，Santa Barbara，CA）数据分析软件对
光散射数据进行采集和分析，计算分子量。
1.6 单糖组成分析
1.6.1 高效阴离子交换色谱法测定不同阶段多糖
组分的单糖组成：取 2mg 多糖样品加入 2mol/L 三
氟乙酸（TFA）3mL，在 110℃下水解 4h。溶液减
压蒸干，然后加入 3mL 甲醇蒸干，重复以上操作
4–5 次，完全除去 TFA。用超纯水溶解定容至 100mL
容量瓶，上样测定。
1.6.2 标准品：D‐Gal、D‐Glc、D‐Ara、L‐Fuc、L‐Rha、
D‐Man、D‐Xyl、D‐Fru、Rib、D‐GluA 和 D‐GalA 混标。
1.6.3 色谱条件：CarboPac PA‐20 阴离子交换柱
（ 150mm×3mm i.d. ）， 进 样 量 25μL ， 流 速
0.45mL/min，柱温 30℃，流动相为超纯水和
0.25mol/L NaOH（Zhang et al. 2010）。
1.7 体外刺激巨噬细胞释放 NO 的活性试验
称取一定量透析过（分子量 3.5kDa，3d）的
猴头多糖，于灭过菌的 Eppendorf 离心管中，在无
菌条件下用 PBS 配成 5mg/mL 的溶液，12 000×g
离心 30min，无菌操作台中将上清转入灭菌管中，
再用 PBS 将样品稀释至 0.5mg/mL、2mg/mL、
5mg/mL（作用终浓度为 50、200和 500μg/mL），
参照乔艳茹等（ 2010）的方法测定巨噬细胞
RAW264.7的 NO 产量。
2 结果与分析
2.1 不同发育阶段猴头菌多糖组分得率、多糖含量
及蛋白含量
不同发育阶段猴头菌经沸水提取后采用 20%、
50%、70%的乙醇分级沉淀，共得到 21 个粗多糖样
品。多糖总得率呈现先增大后减小的趋势，第 5
发育阶段达到最大值 0.92%（图 2）。20%醇沉多糖，
多糖含量也呈现先增大后减小的趋势，第 5 阶段达
到最大值 42.87%。蛋白含量在第 1 和第 2 阶段分
别为 36.01%和 37.50%，远远高于别的发育阶段；
也说明发育初期蛋白产生的较多，中后期大分子量
多糖的代谢过程为先合成再分解。而 50%醇沉多
糖，多糖含量基本呈增大趋势，第 6 阶段达到最大
值 40.93%，而蛋白含量都偏低，有利于多糖的分
离纯化；70%醇沉多糖，第 7 阶段得率最高为
0.44%，整个发育阶段这部分多糖含量及蛋白含量
差异不明显。
2.2 不同发育阶段多糖的分子量分布
采用 HPSEC‐MALLS‐RI 联用分析猴头菌不同发
育阶段各多糖组分的分子量，并使用 Astra 数据分
析软件进行计算（表 1，表 2，表 3）。相同醇沉浓
度下，猴头菌 7 个生长发育阶段多糖的分子量及其
分布趋势相近，但各组分所占比例差异明显。20%
醇沉多糖主要含有 2 个峰，其中 Peak1 分子量在
3 000kDa 左右，该组分多糖所占比例先增大后减
小，第 5 阶段达到最大值 64.20%；Peak2 的分子量
在 100–900kDa 之间，各发育阶段差异显著。50%
醇沉多糖只有一个对称的主峰，纯度较高，分子量
呈先增大后减小的趋势，在 20–40kDa 之间。另外，
50%醇沉多糖的多分散性指数接近于 1，说明样品
的分子量组分相对均一，容易得到纯的猴头菌多
糖。而 70%醇沉多糖含有两个峰，Peak1 分子量在
30kDa 左右；Peak2 分子量在 15kDa 左右，该组分
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图 2 不同发育阶段猴头菌多糖得率（A）、多糖含量（B）
及蛋白含量（C）的测定 H1–H7：猴头菌生长发育的 7
个阶段.
Fig. 2 Determination of yields (A) and content (B) of
polysaccharides, protein content (C) in extracts of Hericium
erinaceus fruiting bodies harvested at different growth stages.
H1–H7 represents the seven stages of growth and
development of H. erinaceus fruiting bodies.
多糖所占比例第 3阶段和第7阶段较其他组分差异
明显，分别为 74.70%和 71.00%，低于其他发育阶
段。结果也表明，50%与 70%醇沉多糖分子量相差
不大，约在 10–40kDa 之间，均为小分子量多糖；
猴头菌不同发育阶段多糖分子量的差异主要在大
分子多糖部分，其分子量大小与体外免疫活性之间
的关系值得进一步探究。
2.3 单糖组成分析
不同发育阶段猴头菌分级醇沉后所得的 21 个
多糖组分，经高效阴离子色谱（HPAEC）检测后所
得的单糖组成及摩尔数的结果见表 4。猴头菌在不
同发育阶段产生多糖的单糖组成差异显著，20%醇
沉多糖主要由葡萄糖、半乳糖构成，且葡萄糖占的
比例很高，说明这部分多糖组分以葡聚糖为主；随
着猴头菌的生长发育，葡萄糖的含量先增加后减
少，第 5 阶段达到最大量 786.62μmol/g，说明在第
5 阶段前大分子量的葡聚糖以合成代谢为主，后期
转为分解代谢；结果亦显示出第 1 阶段多糖中含有
少量的核糖，第 7 阶段含有一定量的鼠李糖，这与
猴头菌发育过程中多糖的合成分解代谢密切相关。
50%醇沉多糖的单糖均由岩藻糖、半乳糖、葡萄糖、
甘露糖和葡萄糖醛酸组成，其中在发育第 1 到第 3
阶段，葡萄糖含量高于半乳糖，而第 4 到第 7 阶段
半乳糖含量却高于葡萄糖且半乳糖与葡萄糖之间
的比例逐渐增大，说明猴头菌生长后期分子量
20–40kDa 的多糖是以半乳聚糖为主。70%醇沉多
糖的单糖组成中葡萄糖含量均高于其他单糖，第 7
阶段的含量最高为 851.52μmol/g，第 6 到第 7 阶段
还含有少量葡萄糖醛酸，说明在发育后期分子量
10–20kDa 的多糖产生了酸性多糖。这为猴头菌生
长发育过程中活性多糖的动态形成研究提供了一
定的理论基础。
2.4 粗多糖刺激巨噬细胞释放 NO 的产量
NO 是巨噬细胞的一个重要效应分子，当巨噬
细胞被激活后，iNOS 的基因表达增加，从而产生
NO，生成的 NO 能够杀伤入侵机体的病原体和肿
瘤细胞（姜玥 2013）。猴头菌 7 个生长发育阶段得
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表 1 不同生长发育阶段猴头菌 20%醇沉多糖的分子量分布范围
Table 1 Molecular weight distribution of 20% ethanol precipitated polysaccharides from Hericium erinaceus fruiting bodies
harvested at different growth stages
Peak1 Peak2 Fraction
Mw (Da) Mn (Da) Mw/Mn Ratio (%) Mw (Da) Mn (Da) Mw/Mn Ratio (%)
H1P20 2.97×106 2.72×106 1.09 40.70 2.67×105 1.49×105 1.79 59.30
H2P20 3.11×106 2.86×106 1.09 38.70 2.66×105 1.54×105 1.73 61.30
H3P20 3.05×106 2.61×106 1.17 53.30 3.18×105 2.35×105 1.35 46.70
H4P20 3.78×106 3.34×106 1.13 58.90 5.36×105 4.32×105 1.24 41.10
H5P20 5.37×106 3.95×106 1.36 64.20 9.08×105 6.72×105 1.35 35.80
H6P20 3.59×106 3.36×106 1.07 57.9 6.14×105 4.90×105 1.25 42.10
H7P20 3.63×106 3.24×106 1.12 40.80 1.56×105 1.15×105 1.36 59.20
注：H1P20–H7P20：猴头菌不同发育阶段 20%醇沉多糖.
Note: H1P20–H7P20: 20% ethanol precipitated polysaccharides from Hericium erinaceus fruiting bodies at different growth
stages.
表 2 不同生长发育阶段猴头菌 50%醇沉多糖的分子量分布
范围
Table 2 Molecular weight distribution of 50% ethanol
precipitated polysaccharides from Hericium erinaceus fruiting
bodies harvested at different growth stages
Peak1 Fraction
Mw (Da) Mn (Da) Mw/Mn Ratio (%)
H1P50 2.15×104 1.90×104 1.13 100
H2P50 2.02×104 1.60×104 1.26 100
H3P50 3.27×104 2.74×104 1.19 100
H4P50 3.47×104 3.07×104 1.13 100
H5P50 2.87×104 2.40×104 1.20 100
H6P50 2.64×104 2.42×104 1.09 100
H7P50 2.42×104 2.21×104 1.10 100
注：H1P50–H7P50：猴头菌不同发育阶段 50%醇沉多糖.
Note: H1P50–H7P50: 50% ethanol precipitated
polysaccharides from Hericium erinaceus fruiting bodies at
different growth stages.
到的 21 个多糖组分，刺激巨噬细胞产生 NO 的能
力有较大差异，在试验浓度范围内免疫活性均高
于阴性对照，并且体外免疫活性随着样品浓度的
升高而增强，具有浓度依赖性（图 3）。不同发育
阶段，20%部分多糖在低浓度 50μg/mL 就表现出
很好的免疫活性，其中第 1、第 4 和第 5 阶段活
性较好，这可能与第 1 阶段中含有一定比例的核
糖及第 4、5 阶段中大分子多糖所占比例较高有一
定关系；50%部分多糖活性呈现先增大后减小的
趋势，这与该组分多糖的分子量变化有一定相关
性；70%部分多糖，以第 1 和第 6 阶段活性最好，
第 1 阶段的多糖中同样存在一定的核糖而第 6 阶
段中甘露糖所占的比例较大，这部分多糖活性的
增加是否与其特殊结构有关还有待深入探讨。总
体来说，猴头菌在第 5 阶段的活性最好，且每个
阶段 20%醇沉的多糖活性均优于 50%、70%醇沉
的多糖，也进一步说明猴头菌中大分子多糖具有
更好的体外免疫活性。
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表 3 不同生长发育阶段猴头菌 70%醇沉多糖的分子量分布范围
Table 3 Molecular weight distribution of 70% ethanol precipitated polysaccharides from Hericium erinaceus fruiting bodies
harvested at different growth stages
Peak1 Peak2 Fraction
Mw (Da) Mn (Da) Mw/Mn Ratio (%) Mw (Da) Mn (Da) Mw/Mn Ratio (%)
H1P70 3.50×104 3.27×104 1.07 10.50 1.40×104 1.29×104 1.09 89.50
H2P70 3.66×104 3.33×104 1.10 10.80 1.35×104 1.20×104 1.13 89.20
H3P70 2.68×104 2.52×104 1.06 25.30 1.24×104 1.15×104 1.08 74.70
H4P70 3.18×104 2.90×104 1.10 14.00 1.22×104 1.19×104 1.03 86.00
H5P70 3.09×104 2.94×104 1.05 10.90 1.42×104 1.33×104 1.07 89.10
H6P70 3.08×104 2.95×104 1.04 12.00 1.58×104 1.52×104 1.04 88.00
H7P70 2.57×104 2.44×104 1.05 29.00 1.49×104 1.47×104 1.01 71.00
注：H1P70–H7P70：猴头菌不同发育阶段 70%醇沉多糖.
Note: H1P70–H7P70: 70% ethanol precipitated polysaccharides from Hericium erinaceus fruiting bodies harvested at different
growth stages.
表 4 不同发育阶段猴头菌多糖组分的单糖组成及摩尔数
Table 4 Mole of monosaccharide of Hericium erinaceus polysaccharides at different growth stages of fruiting bodies
20% 50% 70% Stage
Rha Gal Glc Man Rib Fuc Gal Glc Man GluA Fuc Gal Glc Man Rib GluA
H1 — 19.64 322.85 25.66 82.77 81.32 534.39 608.53 41.97 52.33 16.58 28.47 132.40 32.89 30.40 —
H2 — 22.90 427.20 36.99 — 112.88 578.36 766.96 36.76 63.18 15.33 80.51 382.78 70.78 — —
H3 — 15.02 543.26 16.55 — 94.81 683.60 739.72 47.12 44.88 51.89 256.10 639.04 58.92 — —
H4 — 8.64 418.22 — — 152.60 709.86 627.30 38.80 39.60 30.47 123.09 576.92 67.46 — —
H5 — 62.07 786.62 — — 234.56 981.74 689.47 27.06 19.06 38.84 109.18 459.12 73.33 — —
H6 — 40.38 709.94 — — 321.05 1013.07 674.04 68.45 71.04 49.31 145.25 587.38 81.09 — 45.97
H7 106.60 45.49 376.69 — — 301.71 1294.80 555.06 66.03 46.02 17.83 399.25 851.52 68.77 — 27.10
注：单位：μmol/g；“—”表示未检测到；H1–H7：猴头菌生长发育的 7 个阶段.
Note: Values are expressed as μmol/g polysaccharide; “—”not detected; H1–H7 represents the seven stages of growth and
development of Hericium erinaceus fruiting bodies.
唐川 等 /猴头菌不同发育阶段产生的多糖结构特征及免疫活性
菌物学报
75
图 3 不同生长发育阶段猴头菌粗多糖对 RAW264.7 巨噬细胞释放 NO 的影响 PBS：磷酸缓冲液为阴性对照；LPS：细菌
脂多糖为阳性对照；H1P20–H7P20：猴头菌不同发育阶段 20%醇沉多糖；H1P50–H7P50：猴头菌不同发育阶段 50%醇沉多
糖；H1P70–H7P70：猴头菌不同发育阶段 70%醇沉多糖.
Fig. 3 Effect of Hericium erinaceus polysaccharides extracted from fruiting bodies at different growth stages on NO release from
RAW264.7 megalophage cells. PBS: Phosplate buffer, negative control; LPS: Lipopolysaccharide, positive control; H1P20–H7P20:
20% ethanol precipitated polysaccharides extracted from H. erinaceus fruiting bodies at different growth stages; H1P50–H7P50:
50% ethanol precipitated polysaccharides extracted from H. erinaceus fruiting bodies at different growth stages; H1P70–H7P70:
70% ethanol precipitated polysaccharides extracted from H. erinaceus fruiting bodies at different growth stages.
3 讨论
近年来，对于猴头菌子实体多糖的研究，主要
集中在多糖提取、醇沉工艺优化，理化性质、结构
特征及生物活性的研究，而关于猴头菌不同发育阶
段多糖的理化性质、结构特征及活性变化规律缺乏
系统全面的报道。本文的研究发现猴头菌分级醇沉
的多糖，在生长过程中其理化性质、结构特征及体
外免疫活性差异显著。首先，20%醇沉多糖的多糖
含量总体上呈先增大后减小趋势，第 5 阶段最大，
而蛋白含量总体上呈降低趋势，第 1 和第 2 阶段含
量显著高于其他阶段。50%醇沉多糖的多糖含量呈
增大趋势，第 6 阶段达到最大，而 70%醇沉多糖其
多糖含量差异不显著，第 7 阶段最大。
其次，猴头菌不同发育阶段分级醇沉多糖的分
子量分布、单糖组成均有显著差异。50%醇沉多糖
的液相图谱中峰形单一，纯度较高，易得到纯品多
糖；20%醇沉多糖主要包含 2 个峰，分子量分别在
3 000kDa 左右及 100–900kDa 之间；而 50%与 70%
醇沉多糖均为小分子量多糖，分子量在 10–40kDa
之间。猴头菌不同发育阶段产生多糖的单糖组成分
析结果显示：20%醇沉多糖以葡聚糖为主，第 5 阶
段前大分子量的葡聚糖以合成代谢为主，后期转为
分解代谢；50%醇沉多糖的单糖均由岩藻糖、半乳
糖、葡萄糖、甘露糖和葡萄糖醛酸组成，在生长后
期分子量 20–40kDa 的多糖是以半乳聚糖为主；
70%醇沉多糖的单糖组成中葡萄糖含量均高于其
他单糖，在发育后期分子量 10–20kDa 的多糖产生
了酸性多糖。研究结果为猴头菌生长发育过程中活
性多糖的动态形成提供了一定的理论基础。
从体外刺激巨噬细胞产生 NO 的活性试验结
果可以看出，猴头菌生长发育过程中产生的多糖均
有较好的免疫活性。其中分子量 1 000–5 000kDa
多糖在低浓度 50μg/mL就表现出显著的免疫活性。
研究结果进一步表明，猴头菌多糖的分子量大小、
单糖组成等结构特征与其体外免疫活性存在一定
的相关性。此外，第 5 阶段即中菌刺期产生的多糖
活性最优，在此时采摘可以得到最佳的药品及保健
品材料。研究结果为猴头菌多糖构效关系的研究提
供了一定的理论基础。
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（本文责编：王敏）