全 文 ：第 27卷第 1期　 　　　　　　　　　　　　　　　　中南民族大学学报 (自然科学版 )　　　　　　　　　　　　　　　　　Vol. 27 No. 1
2008年 3月　　　　　　　　　　 Journal of Sou th-Cent ral University for Nationali ties( Nat. Sci. Edi tion )　　　　　　　　　　 Mar. 2008
蕲艾燃烧灰烬化学成份的 HPLC分析
农熠瑛 ,杨　梅 ,江　丹 , 洪宗国*
(中南民族大学 化学与材料科学学院分析化学国家民委重点实验室 , 武汉 430074)
摘　要　目的: 分离蕲艾燃烧灰烬甲醇提取物化学成分 .方法:在 C18柱 ,甲醇、水混合流动相 (体积比10∶ 90) ,柱温
30℃ ,检测波长 219 nm条件下用 HPLC对样品进行分析 .结果: 获得 14个独立峰 ,表明样品中至少含有 14种化合
物 . 结论:此方法分离蕲艾燃烧灰烬甲醇提取物化学成分有可行性 .
关键词　蕲艾 ; 燃烧灰烬 ; 化学成分 ; HPLC分析
中图分类号　 O657. 7+ 2　文献标识码　 A　文章编号　 1672-4321( 2008) 01-0034-03
HPLC Analysis of the Burnt QiAi Ashes
Nong Yiying , Yang Mei , J iang Dan, Hong Zongguo
( Key Labor ato ry o f Ana ly tical Chemistry of the Sta te Ethnic Affairs Commission, Co lleg e of Chemical
and Mate rials Science , South-Centr al Univ er sity fo r Na tionalities, Wuhan 430074, China)
Abstract　 Th e chemical constituents o f th e methano l ex tract o f Qi Ai ashes w ere sepera ted in C18 HPLC column.
Methano l-w ate r ( 10∶ 90) w as used as the eluenting phase with co lumn tempe ratur e at 30℃ and the de tec tion
w aveleng th was 219 nm. A to tal o f 14 well sepa ra ted peaks w ere observ ed, indica ting the sample contained a t least
14 differ ent components. This method could be used for the sepa ration o f the methanol ex tr act of the ash of
Ar temisia.
Keywords　 QiAi( Ar temisia a rgyi Lev l. et Vant. cv . qiai) ; ash; chemical composition; HPLC
　　艾灸历史悠久 ,功效显著 ,主要为通经活络、行
气活血、去湿逐寒、消肿散结、回阳救逆、防病保健 .
其治疗的机理主要为药物渗透和热刺激 [1 ] .蒋伯成、
洪宗国等分别对蕲艾 ( Artemisia argyi Levl. et
Vant. cv . qiai )燃烧烟雾的苯-甲醇提取物和正丁醇
提取物进行了 GC-M S分析 [2, 3 ] .日本大西基代发现
艾燃烧生成物的甲醇提取物有清除自由基作用 ,并
且比未燃烧的艾的甲醇提取物作用更强 [4 ] .西谷郁
子将艾的燃烧生成物的甲醇提取物用硅酸柱色谱法
和薄层色谱法 ( TLC)进行分带 .再用重量法测定各
带的抗氧化作用 .结果显示 Rf0. 14带的抗氧化作用
优于人工合成的抗氧化剂 BHT的抗氧化作用 [5 ] .为
弄清引起上述作用的具体作用物质 ,本文对蕲艾燃
烧灰烬的甲醇提取物进行了 HPLC分析 .
1　实验部分
1. 1　原料、仪器与药品
蕲艾 ,购自湖北蕲春中药材公司 ,采集于 2007
年端阳节 ;甲醇 (分析与色谱纯 ) ,武汉克密科化学试
剂有限公司 ;硅胶 (柱层析用 ,化学纯 ) ,青岛海浪硅
胶干燥剂厂 ; SHZ-3Ⅲ型循环水真空泵 ,河南省予华
仪器有限公司 ; V ARIAN Pro star210分析制备
HPLC ,生产厂家 VARIAN ( USA) ,主要部件: 210
收稿日期　 2007-12-20　* 通讯联系人　洪宗国 ( 1958-) ,男 ,教授 , E-mail: h ong zongguo@ yahoo . com. cn
作者简介　农熠瑛 ( 1982-) ,男 ,硕士研究生 ,研究方向: 天然产物化学与中药化学 , E-mail: y yingyy@ sina. com. cn
基金项目　湖北省自然科学基金资助项目 ( 2005ABA071)
型传输泵 , 500型柱阀箱 , 325型紫外可见检测器 ,色
谱柱: C18;紫外 /可见分光光度计 , LAMBDA BIO
35型 ,德国珀金 -埃尔默公司 .
1. 2　样品的制备
精选艾叶暗火燃烧成白色灰烬 ,用分析纯甲醇
按 1 g灰烬 /50 mL甲醇提取 ,浸泡时间为 48 h,粗
滤 ,微孔滤膜精滤 ,浓缩 ,得检测样品 .
1. 3　测定提取液的最大吸收波长
将样品用紫外 /可见分光光度计扫描 ,其最大吸
收波长为 219 nm.
1. 4　 HPLC法分析提取液的成分
流动相:甲醇、水两相混合 ,流速 1. 0 mL /min,
柱温 30℃ ,紫外检测器吸收波长 219 nm,进样量 20
μL.改变流动相两相混合比例 ,可得到不同的分离
效果 .
1. 5　柱层析
采用硅胶为固定相 ,甲醇水溶液为流动相 ,流速
1滴 /s ,对上述样品进行层析 ,洗脱液收集 1次 /10
m L,取样进行 HPLC分析 ,相近样品合并 ,重结晶 .
2　结果与讨论
2. 1　蕲艾燃烧灰烬甲醇提取物 HPLC分析
按 1. 4色谱条件 ,用甲醇与水混合流动相 ( V甲醇
∶ V水 = 10∶ 90) ,分析蕲艾燃烧灰烬甲醇提取物得
到色谱图见图 1.
图 1　 V甲醇∶V水 = 10∶ 90的色谱图
Fig. 1　 HPLC of volume com pares for VCH3OH∶V H2O= 10∶ 90
由图 1可知 ,此方法可得到 14个独立可辨认的
峰 ,因此该样品至少含有 14种不同的物质 .在这些
物质中 ,含量最大的物质其保留时间为 2. 4 min.
2. 2　不同色谱条件下的分析效果
改变混合流动相的混合比 ,其分离效果见图 2.
由图2可知 ,在纯甲醇的洗脱下 ,各成分的保留时间
都很短 ,很多峰重叠在一起 ,分离效果差 .随着水的
加入和比例变大 ,保留时间不断延长 ,分离效果提
高 .但超过 10∶ 90后 ,柱压升高 ,不能进行有效分
离 .由于水的极性大于甲醇 ,增加水的含量就是增加
溶剂的整体极性 ,使各成分保留时间延长 ,说明样品
极性不高 .随着流动相水量增加 ,样品对 C18的相对
亲合性增加 ,从而延缓了随流动相流出的速度 .
图 2　不同甲醇与水体积比的色谱图
Fig. 2　 HPLC of dif f erence Volume com pares
2. 3　柱色谱分离
将 2. 2节中所述规律应用于柱色谱并对浓缩液
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进行分离洗脱 ,固定相为柱色谱硅胶 ( 200～ 300目
粒 ) ,流动相为甲醇和水 ,使用以上梯度洗脱条件对
浓缩液进行洗脱 .可得到一种单一成分 .其 HPLC分
析结果见图 3. 该结果证明为 1个单峰 .经过浓缩 ,得
到一种晶体 .
图 3　晶体的 HPLC图
Fig. 3　 HPLC of the crystal
2. 4　结构鉴定
对上述晶体进行元素分析 ,得其分子式为
C30 H36N2O3 -3H2O.质谱显示其分子量达到 472,基峰
192,同时在 231、 345、 457出现碎片峰 .红外图谱在
3 423、 1 651、 1 575、 1 448、 1 388、 1 274等处出现吸
收峰 .在 2 300处有弱峰 ,说明有三键 . H1NM R在
4. 538出现超强峰 ,有大量的羟基、氨基和双键氢存
在 ,在 3. 300、 1. 881和 1. 274出现组合峰 , 6～ 8区有
吸收峰说明有苯存在 .旋光分析证明有手性碳 .初步
显示具有甾体结构 ,可能是甾族化合物的燃烧氧化
产物 . 由于结构复杂 , 需要培养单晶进行 X-射线衍
射分析最终确定其结构 .
3　结论
( 1)利用 C18柱 ,甲醇 /水混合流动相 (V甲醇∶V水
= 10∶ 90) ,在 1. 0 mL /min流速 , 30℃柱温条件下
可以对蕲艾燃烧灰烬的甲醇提取物进行有效分离 ,
得到可辨认的 14个峰 ,证明至少含有 14种不同的
物质 ;
( 2)改变 HPLC混合流动相比例 ,增加甲醇 /水
混合流动相中水的比例 ,可以延长提取液中不同成
分的保留时间 ,增加对提取液的分离效果 .
参　考　文　献
[1]　王德深 .针灸基础知识 [M ].北京: 人民卫生出版社 ,
2001.
[ 2]　蒋伯成 ,魏　莉 ,马春华 .艾叶挥发成分分析 [ J].国土
与自然资源研究 , 1990( 2): 75-77.
[3 ]　洪宗国 ,农熠瑛 ,杨兆涛 .蕲艾燃烟化学成分的 GC-M S
分析 [ J].中南民族大学学报: 自然科学版 , 2007, 26
( 1): 10-12.
[ 4]　西谷郁子 .关于艾的燃烧生成物中含有的抗氧化作用
物质 [ J].国外医学中医中药分册 [ J]. 1989, 11( 5): 47.
[ 5]　大西基代 .燃烧生成物的自由基清除作用研究 [ J].国
外医学中医中药分册 , 1992, 14( 3): 60.
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