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2008年第 5期
　
实验技术
有增强痢原清的疗效有关 ,或者是合剂中的痢原清与其他药
物之间具有协同作用 ,有待于进一步试验研究。
参考文献:
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大叶桉叶挥发油的抗炎活性研究
白　峰 ,李　瑾 ,王文魁
(山西农业大学动物科技学院 ,山西太谷　030801)
　　中图分类号:S853.74　　 　　　　　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2008)05-0034-03
　　大叶桉叶为双子叶植物桃金娘科大叶桉(Eucalyptusro-
bustaSmith)之叶 , 味辛 、苦 , 性凉 , 具有疏风发表 、清热解毒 、
祛痰止咳 、杀虫止痒之功效。大叶桉是华南地区民间常用中
草药 , 其叶水煎剂具清热解毒 、消炎止痛 、防腐止痒的功效 ,
其总挥发油可用于治疗流行性感冒 、上呼吸道感染和皮肤病
等疾病 [ 1] 。根据文献资料报道 ,桉叶油具有解热消炎和抗菌
防腐的作用 [ 2 , 3] ,奶牛乳腺炎无论是临床型还是隐性型 ,其临
床表现主要是炎症反应 , 造成乳腺组织损伤和产奶量下
降 [ 4] 。在研究中药治疗奶牛乳腺炎药理作用时 , 中药抗炎
作用是一项必不可少的指标 ,其抗炎试验结果可进一步为研
制治疗奶牛乳腺炎的有效中药组方提供坚实的理论依据。
因此在选择治疗奶牛乳腺炎的中药时要兼顾杀灭病原菌和
促进炎症消散。关于桉叶的抑菌作用已有文献报道 [ 5] ,笔者
等考查了其抗炎活性。
1　材料
1.1　主要药品试剂
大叶桉叶 , 购于成都五块石药市;地塞米松 , 批号:
071042,郑州羚锐制药有限公司;阿司匹林肠溶片 , 批号:
20070605,山西医科大学制药厂;醋酸泼尼松龙注射液 , 批
号:060409, 浙江仙琚制药股份有限公司;伊文思蓝 , 批号:
20040613,国药集团化学试剂有限公司进口分装;角叉菜胶 ,
批号:LOT17H1148,美国 Sigma公司。
1.2　主要实验仪器
离心机TGL-16G, 上海安亭科学仪器厂;分光光度计
收稿日期:2008-03-03
基金项目:山西省科技厅资助项目(编号:021047)
作者简介:白　峰(1983-),男 , 在读硕士研究生 ,研究方向:兽医药
理学。通讯作者:王文魁
UV-2000, 尤尼柯 (上海)仪器有限公司;电子分析天平
AR1140,奥豪斯国际科贸(上海)有限公司。
1.3　实验动物
昆明系小白鼠 ,由山西医科大学实验动物中心提供。
2　方法与结果
2.1　大叶桉叶挥发油的提取
将 100 g大叶桉叶片剪成 1-2 cm2的碎片 , 置于挥发油
提取器中按常规水蒸气蒸馏法连续提取 6 h, 所收集的油水
混悬液用适量乙醚萃取 ,低温回收乙醚后所得挥发油用无水
硫酸钠脱水 ,后密闭贮存于棕色瓶内 4 ℃保存备用 , 使用前
用 0.5%吐温 -80将挥发油稀释成所需浓度。
2.2　大叶桉叶油对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
参照文献方法 [ 6] ,取体重(22.5 ±2.0)g健康昆明系小
白鼠 30只 ,按表 1分为 3组 , 每组 10只 , 雌雄各半。在正常
饲喂的基础上给药组每天灌胃大叶桉叶油 1次 , 连续 5 d, 阳
性对照组灌胃阿司匹林 , 对照组给予 0.5%吐温 -80溶液。
末次给药 1h后 , 各小鼠尾静脉注射 2%伊文思蓝生理盐水
溶液(0.1mL/10 g体重), 同时立即腹腔注射 0.6%醋酸溶
液 0.2 mL。 30min后处死小鼠 , 用 5mL生理盐水冲洗腹腔。
将收集的腹腔液 1 000 r/min离心 5 min, 取上清液于分光光
度计 590 nm处测定 OD值 ,结果见表 1。
表 1　大叶桉叶油对小鼠腹腔毛细血管通透性的影响
组别 药物 剂量 OD值
对照组 0.5%吐温 -80 20mL/kg 0.397±0.177ab
给药组 大叶桉叶油 20mg/kg 0.234±0.104cd
阳性组 阿司匹林 0.2g/kg 0.212±0.116cd
　　注:同一列右肩标字母不同表示差异显著 ,两个字母不同差异极
显著。
34
DOI :10.13823/j.cnki.j tcvm.2008.05.015
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实验技术
2.3　大叶桉叶油对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
参照文献方法 [ 7] ,取体重(22.5 ±2.0)g健康昆明系小
白鼠 30只 ,分组及给药同实验 2.2,其中阳性对照组腹腔注射
地塞米松。末次给药 1 h后 ,每只小鼠右耳廓两面各均匀涂抹
30μL二甲苯致炎 ,左耳不涂作为对照 。致炎后 45 min处
死小鼠 , 用直径 8 mm打孔器在两耳的相同部位打下耳
片 , 分别精确称重 , 以左右耳重量差表示小鼠耳肿胀度 , 结
果见表 2。
表 2　大叶桉叶油对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响
组别 药物 剂量 耳肿胀度 /g
对照组 0.5%吐温 -80 20mL/kg 0.024 8±0.010 5ab
给药组 大叶桉叶油 20mg/kg 0.012 2±0.009 8cd
阳性组 地塞米松 5mg/kg 0.010 0±0.008 7cd
　　注:同一列右肩标字母不同表示差异显著 ,两个字母不同差异极
显著。
2.4　大叶桉叶油对角叉菜胶所致小鼠足肿胀及前列腺素 E2
(PGE2)渗出的影响
参照文献方法 [ 8] ,取体重(22.5 ±2.0)g健康昆明系小
白鼠 30只 ,分组及给药同实验 2.2,其中阳性对照组灌胃给
醋酸泼尼松龙。末次给药后 0.5 h, 每只小鼠左足跖皮下注
射 1%角叉菜胶 0.025 mL致炎。致炎 4 h后处死小鼠 ,各鼠
齐踝关节处将两后足剪下 , 分别称重 , 以左右两足跖重量差
表示肿胀程度。
将角叉菜胶所致炎足剥皮 ,浸于 2.5 mL生理盐水中 , 不
时振摇 , 2 h后取出 ,将浸泡液 3 000 r/min离心 15 min, 取上
清液 0.3mL加入 0.5 mol/LKOH-甲醇溶液 1 mL, 于 50 ℃
水浴异构化 20 min, 加甲醇 2.5 mL, 在 278 nm处测 OD值
(表示溶液中 PGE2含量),结果见表 3。
表 3　大叶桉叶油对角叉菜胶所致小鼠足肿胀及前列腺素
E
2
渗出的影响
组别 药物 剂量 足跖肿胀度 /g PGE2含量
对照组 0.5%吐温 -80 20 mL/kg 0.060 4±0.018 3ab 0.346 4±0.124 2ab
给药组 大叶桉叶油 20 mg/kg 0.032 6±0.007 8cd 0.279 0±0.111 7cd
阳性组 醋酸泼尼松龙 10 mg/kg 0.029 3±0.014 8cd 0.266 2±0.107 2cd
　　注:同一列右肩标一个字母不同表示差异显著 ,两个字母不同差异极显著。
2.5　大叶桉叶油对小鼠棉球肉芽肿的影响
参照文献方法 [ 9] ,取体重(22.5 ±2.0)g健康昆明系小
白鼠 30只 ,分组及给药同实验 2.2。各组小鼠按表 4给药
0.5 h后用乙醚麻醉 , 于左腋窝消毒 , 切一长约 0.5 cm的
切口 , 从切口植入 10mg具有青霉素活性的灭菌棉球 ,缝合
切口。连续给药 7 d, 1次 /d。第 8天脱臼处死小鼠 , 剥离棉
球肉芽肿 , 60 ℃烘干 ,称重 ,减去原棉球重即为肉芽肿净重 ,
结果见表 4。
表 4　大叶桉叶油对小鼠棉球肉芽肿的影响
组别 药物 剂量 肉芽肿质量 /g
对照组 0.5%吐温 -80 20mL/kg 0.017 0±0.001 2ab
给药组 大叶桉叶油 20mg/kg 0.009 3±0.001 2cd
阳性组 地塞米松 5mg/kg 0.007 1±0.001 3ce
　　注:同一列右肩标字母不同表示差异显著 ,两个字母不同差异极
显著。
2.6　实验数据分析
用 SPSS11.0统计软件对试验结果进行 ANOVA方差分
析 ,分析不同组之间数据的差异显著性。
3　讨论与分析
该实验以小白鼠腹腔毛细血管通透性增加模型 、耳廓肿
胀模型 、足跖肿胀急性炎症模型和棉球肉芽肿慢性炎症模
型 ,考察了大叶桉叶油的抗炎药理学活性。试验结果表明 ,
大叶桉叶油能够明显对抗由二甲苯引起的鼠耳肿胀 , 对醋酸
引起的小鼠腹腔毛细血管通透性增加有显著的抑制作用。
在足跖肿胀实验中 , 大叶桉叶油对小鼠足跖肿胀度及炎足
组织中的 PGE2渗出都具有显著的抑制效果。由以上 3个急
性炎症模型的实验结果可以看出 ,大叶桉叶油对急性炎症具
有十分显著的抗炎效果。同时大叶桉叶油还能明显减少棉
球所致的肉芽组织增生 ,表明大叶桉叶油对慢性炎症也同样
具有明显的抗炎效果。
角叉菜胶是大分子物质 ,在局部注入后被肥大细胞吞噬
而使得肥大细胞脱颗粒 ,释放前列腺素 、组胺 、5-HT、白三烯
等炎性介质 [ 10] 。本实验采用角叉菜胶致炎 , 研究发现大叶
桉叶油可显著降低大鼠炎足中炎性渗出液中 PGE2的含量 ,
说明大叶桉叶油能抑制 PGE2的合成或释放。
大叶桉叶油中主要成分有 α-蒎烯 、1, 8-桉叶素 、蓝桉
醇 、α, α, 4-三甲基 -3-环己烯甲醇 、雅槛蓝树油烯 、L-松
香芹醇等萜类化合物 [ 11] 。其中 α-蒎烯 、1, 8-桉叶素等含
氧单萜是抗炎抑菌的主要活性成分 [ 12, 13] 。实验结果表明 , 大
叶桉叶油对急慢性炎症模型表现出较强的抗炎活性 , 提示大
叶桉叶油可用于治疗奶牛的急慢性乳房炎 ,但其对急慢性乳
房炎的临床治疗效果还有待进一步研究。
参考文献:
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实验技术
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青蒿素对临床分离腹泻仔猪病原大肠杆菌的作用研究
张素辉 1 ,曹国文1 ,周淑兰 1 ,陈春林1 ,王孝友 1 ,邱进杰2
(1.重庆市畜牧科学院 ,重庆　402460;2.内江职业技术学院)
　　中图分类号:S853.74　　　　 　文献标识码:A　　文章编号:1000-6354(2008)05-0036-02
　　随着养猪规模化 、集约化发展 , 仔猪细菌性腹泻发病率
越来越高 ,危害也越来越严重。据资料统计 ,我国仔猪死亡
率一般为 15 % ～ 25 %, 2周龄以内死亡率为 26%, 2-4周
龄的死亡率为 16%,断奶前后因腹泻导致的死亡率占总死亡
的 49.11%,其中 70%的死亡被认为是大肠杆菌的作用 。目
前 ,常用抗生素防治仔猪大肠杆菌感染性腹泻 , 但长期大量
滥用抗菌药物易破坏肠道正常菌群 , 造成反复感染和继发感
染 ,同时易造成细菌耐药性的增加。青蒿素是全球公认的中
药产品 ,是具有过氧基团的倍半萜内酯化合物 , 因其对疟疾
具有 “高效 、速效”的显著疗效 , 已经成为越来越多国家治疗
疟疾的首选药物。青蒿素类化合物还具有其它很多重要的
药理活性 ,如抗血吸虫 、抗心律失常 、抗肿瘤 、清热 、抗炎及免
疫调节等 ,而其抑菌活性方面的研究鲜见报道。笔者等用青
蒿素溶液及其含药血清对临床分离大肠杆菌进行体外抑菌
杀菌实验 ,研究青蒿素及其体内代谢产物对大肠杆菌的作
用 ,为开发新兽药制剂提供理论基础 ,对提高青蒿素的利用 、
增加其经济价值具有重要意义。
1　材料与方法
1.1　材料
菌株:由本试验分离保存的腹泻仔猪大肠杆菌病原 34
株。培养基:麦康凯培养基 、普通琼脂培养基 、普通营养肉汤
培养基。材料:青蒿素(重庆正通动物药业有限公司惠赠)。
实验动物:体重 2-3kg的日本大耳白兔。
1.2　方法
1.2.1　大肠杆菌的复壮　无菌吸取普通营养肉汤溶解大肠
杆菌冻干粉 ,混匀 , 接种于营养肉汤试管 , 37 ℃培养 24 h, 观
察肉汤变混浊 , 底部有絮状物沉淀 。铂铒蘸取培养液划线接
收稿日期:2008-04-28
基金项目:重庆市科委资助项目
作者简介:张素辉(1980-),女 , 硕士 ,助理研究员 ,主要从事动物微
生态制剂与新兽药的研究 , E-mail:zhangsuhui1980@ya-
hoo.com.cn
种于麦康凯培养基 , 37 ℃培养 24 h后形成红色 、圆形 、光滑 、
湿润 、中央隆起 、中等大小的菌落。挑取单个红色菌落接种
于普通营养肉汤 , 37 ℃培养 24 h, 4 ℃保存备用。
1.2.2　青蒿素溶液的制备　称取青蒿素 2 000mg,溶于 20 mL
无水乙醇 , 浓度为 100 mg/mL, 按 5∶1体积比加入融溶的
PEG-6000 4 mL, 混匀 , 37 ℃挥发溶剂 , 加蒸馏水溶解定容
至 20 mL, 配制成工作浓度为 100 mg/mL的青蒿素溶液。
1.2.3　动物试验设计　健康成年家兔分为对照组与实验组 ,
每组 3个重复。试验组的青蒿素溶液肌肉注射量为 100mg/mL,
以青蒿素的临床使用剂量的 5倍进行 , 0.5 mL/次 , 2次 / d,
连用 3d;对照组注射生理盐水。未给药兔血清即正常兔血
清 ,系于用药前 1 d自耳缘或心脏采血;给药兔血清即含药兔
血清为末次给药 0.5h、1 h、1.5h、2h、3h后分别经心脏采血。
采集的血液置室温下 1 h,凝固后 , 置 4 ℃, 过夜(切勿冰冻)
析出血清 , 3 000 r/min离心 10 min,将血清保存于 -80 ℃冰
箱备用。
1.2.4　分离菌药敏试验　用灭菌棉拭子蘸取复壮菌的肉汤
培养物 ,均匀涂布接种于普通琼脂培养基 , 待稍干后, 放入牛
津杯 , 加入青蒿素溶液、青蒿素含药血清, 37℃培养 16-20 h,
后测定抑菌环的大小。判定标准:抑菌环直径在 15 mm以上
为高度敏感;10 -14 mm为中度敏感;10 mm以下为低度敏
感;无抑菌环为不敏感。
2　结果
本次试验结果显示 , 青蒿素溶液及其含药血清(体内代
谢产物)对所有分离的大肠杆菌均无抑菌效果 。
3　讨论
青蒿为传统清热解暑药 ,自 20世纪 70年代初分离出抗
疟有效成分青蒿素以来 , 对青蒿 、青蒿素及其衍生物进行了
多方面的研究 , 如抗炎作用 、抗菌作用 、抗寄生虫作用 、抗内
毒素作用 、免疫抑制作用等。金慧玲等体外研究证实 , 青蒿
琥酯浓度在 0.6%时对白喉杆菌 、副霍乱及痢疾杆菌 , 0.9%
时对绿脓杆菌 、石膏样小孢子菌 、玫瑰毛癣菌 、白色念珠菌 ,
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