全 文 ：醋酸镁-甲醇分光光度法
测定唐古特大黄中蒽醌类成分的含量
王慧春 ,祁平福 ,张成总
(青海师范大学生命与地理科学学院 ,青海 西宁　810008)
摘要:利用蒽醌类成分与醋酸镁反应显红色的特性 ,用比色法测定唐古特大黄中蒽醌类成分含
量。测定结果:唐古特大黄中蒽醌含量在 5 ～ 30 μg mL 范围内 ,浓度与吸光度之间线性关系良
好(r=0.9949);样品的平均回收率为 98.58%,RSD为 0.51%(n =5)。说明该方法简便 、快速 ,
结果可靠。
关键词:唐古特大黄;蒽醌类成分;分光光度法;醋酸镁-甲醇
中图分类号:O657.3　　文献标识码:B　　文章编号:1006-8996(2006)06-0083-03
Quantitative determination of anthraquinones in Rheum tanguticum
Maxim by magnesium acetate-methanol spectrophotometry
WANG Hui-chun , QI Ping-fu ,ZHANG Cheng-zong
(College of Life and Geography ,Qinghai Normal University ,Xining 810008 ,China)
Abstract:A method to determine the content of anthraquinones in Rheum tanguticum Maxim is estab-
lished by colorimetry.The results show calibration curve is linear(r=0.9949)in the range in 5 ～ 30μg mL
for 1 ,8-dioxyanthraquinone , the mean recovery is 98.58%, with RSD of 0.51%(n=5).This method is
simple ,quick and credible.
Key words:Rheum tanguticun Maxim;Anthraquinones;spectrophotometry;Magnesium acetate-methanol
唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxim.ex Regel),又名鸡爪大黄 ,属蓼科(Polyg -onaceae)大黄属
(Rheum Linn)多年生粗壮草本植物 ,其根及根茎为中国药典收藏的正品大黄药材 。该植物产于我国西
藏东部 ,青海 、甘肃等海拔1 700 ～ 4 300 m 的山坡林缘灌丛中及半坡石堆中 ,其中青海省是我国大黄的
主产区 ,目前主要是野生品 ,部分为栽培品[ 1] 。其根及根茎入药 ,基生叶柄和下部茎生叶具有长柄 。味
酸 、多汁 ,可入药[ 2] 。据《四部医典》 、《妙音本草》《晶珠本草》等藏医药典记载 ,大黄属植物不仅生津止
渴 ,还有消食 、通便等多种功效 ,民间有食用习俗。大黄的主要有效成分是羟基蒽醌类衍生物 ,一部分为
游离态 ,主要有大黄酚(Chrysophanol)、大黄酸(Rhein)、大黄素(Emodin)、芦荟大黄素(Aloe -emodin)和大
黄素甲醚(Physcion),证明有显著的抗菌 、抗肿瘤之功效[ 3] ;另一部分为结合态 ,主要是上述五种蒽醌的
甙类化合物 ,是大黄的主要致泻成分 ,其中以还原态存在的番泻甙类泻下作用最强[ 4] ,结合型蒽醌的多
少表示泻下作用的峻缓 ,寒性之强弱[ 5] ,因此 ,研究这几类成分在唐古特大黄中的分布 ,对于探讨唐古特
大黄的炮制作用 ,指导临床合理用药有一定意义。
1　仪器与试药
(1)仪器:721分光光度计(上海分析仪器厂),索氏提取器 ,水浴回流提取装置 ,电子分析天平(上海
天平仪器厂),恒温干燥箱(湖北省黄石市医疗器械厂)。
收稿日期:2005-07-08
基金项目:青海省科技厅资助项目(2004-Z-604)
作者简介:王慧春(1974—),女 ,青海平安人 ,讲师 ,硕士。
第 24卷　第 6期
2006年 12月 　 　　　　　
青 海 大 学 学 报 (自 然 科 学 版)
Journal of Qinghai University(Nature Science)　 　　　　　
Vol.24 No.6
Dec.2006
DOI :10.13901/j.cnki.qhwxxbzk.2006.06.023
　　(2)试剂:氯仿 、甲醇 、乙醚 、硫酸 、醋酸镁 、甲醇等试剂均为分析纯 ,水为蒸馏水。
　　(3)样品:唐古特大黄根茎粉末由本学院陈志博士提供 。
(4)标准品:1 ,8-二羟基蒽醌(中国药品生物制品检定所提供)。
2　方法与结果
2.1　最大吸收波长的选择　大黄羟基蒽醌类成分结构中均含有 1 ,8-二羟基蒽醌母环 ,羟基蒽醌类化
合物遇醋酸镁显红色 。以 1 ,8-二羟基蒽醌为标准品 ,于105℃烘 2 h后置干燥器内供用。精密量取 1 ,8
-二羟基蒽醌乙醚的标准液(0.1 mg mL)1.0 mL ,置于 10 mL 容量瓶中 ,水浴蒸发乙醚至干 。残渣加入
0.5%醋酸镁-甲醇液溶解 ,并稀释至刻度 ,摇匀 ,在 400 ～ 600 nm 范围内测定其吸收特征 ,结果见图 1。
醋酸镁-甲醇法最大的吸收波长为 498 nm。
2.2　标准曲线的绘制　分别精密量取 1 , 8-二羟基蒽醌乙醚的标准液(0.1mg mL)0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、
2.5 、3.0 mL ,分别置 10 mL 量瓶中 ,在水浴上挥去乙醚 ,残渣加 0.5%醋酸镁-甲醇液溶解并稀释至刻
度 ,摇匀 ,于498 nm处测定其吸收度 ,以 0.5%醋酸镁-甲醇液作空白对照 。将测得的数据进行一元线
性回归 ,得回归方程为A=0.3264C—0.0354 , R2=0.9949 ,根据 f=n-2=4 ,查相关系数临界值表得 r0.01
=0.917 ,由 r=0.9949>r0.01可知 ,呈极显著相关 ,故求得的回归方程可信。结果见图 2。
图 1　1 , 8-二羟基蒽醌的吸收光谱　　　　　　　　　　　　图 2　1 , 8-二羟基蒽醌的标准曲线
2.3　稳定性实验　取 1 ,8-二羟基蒽醌乙醚标准
液1.0 mL ,2.0 mL ,3.0 mL 按 2.2的方法 ,分别在 0
h ,0.5 h ,1 h ,1.5 h ,2 h于 498 nm处测定吸收度 ,考
察稳定性 ,结果发现吸收值在 0 ～ 2 h内稳定 ,故可
以在显色 2 h内完成测定(见表 1)。
2.4　样品中蒽醌类含量测定
表 1　稳定性试验结果
样品 时间(h)
0 0.5 1 1.5 2
1.0 mL 0.046 0.046 0.046 0.046 0.046
2.0 mL 0.135 0.135 0.135 0.135 0.135
3.0 mL 0.218 0.218 0.218 0.218 0.218
2.4.1　游离蒽醌含量测定　精密称取样品适量 ,置于索氏提取器中 ,加氯仿 150 mL 于水浴上回流提取
4 h至无色 ,使游离蒽醌提取尽 ,将氯仿液分出后蒸干 ,残渣加适量 0.5%醋酸镁-甲醇液溶解 ,并转移
至10mL 容量瓶中 ,稀释至刻度 ,摇匀 ,于498 nm处测定吸收度。以 0.5%醋酸镁-甲醇液作对照 。
2.4.2　总蒽醌含量测定　精密称取样品适量 ,置 250 mL 圆底烧瓶中 ,加 5 mol L硫酸 30 mL ,加热回流
水解 2 h ,冷却后 ,加入氯仿 40 mL置水浴上加热回流 30 min ,冷却后吸取底层氯仿液 ,酸水层再加氯仿
40 mL ,置水浴上继续回流 30 min ,再吸取底层氯仿 ,如此重复 4次 ,至酸水层中蒽醌成分提取尽 ,合并氯
仿提取液 ,用少量蒸馏水洗至中性后 ,将氯仿回收 ,然后依次按 2.4.1步骤测定 ,即得总蒽醌含量。
2.4.3　结合蒽醌含量测定　总蒽醌含量减去游离蒽醌含量即为结合蒽醌含量 。
2.4.4　还原性蒽醌含量测定　精密称取样品适量 ,用 1.5%的盐酸回流水解 ,用氯仿提取 ,操作按2.4.1
方法进行 ,比色测定 ,读数完毕后加热 ,再测定 ,再读数 ,由 1 , 8-二羟基蒽醌标准品回归方程求出加热
前后含量的差异即为还原型蒽醌类化合物的量。
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2.4.5　氧化型蒽醌的测定　总蒽醌含量减去还原型含量 ,即为氧化型蒽醌含量 。
以上测定结果见表 2。
表 2　唐古特大黄中各类蒽醌含量的测定结果 (单位:%)
项　　目 总蒽醌 游离型蒽醌 结合型蒽醌 氧化型蒽醌 还原型蒽醌
实测值 4.758 1.189 3.569 3.892 0.866
RSD 2.04 1.48 1.79 1.98 2.01
　注:以上数据均为 5次测定平均值
2.5　加样回收率测定　取已提尽成分的生药样品约 0.05 g ,精密加入 1 ,8-二羟基蒽醌标准品约 2 mg ,
进行加样回收试验。结果见表 3。
表 3　回收率测定结果
实验组 加入量(mg) 测得量(mg) 回收率(%) 平均值(%) RSD(%)
1 1.82 1.79 98.35
2 2.02 1.99 98.51
3 1.98 1.96 98.99 98.58 0.51
4 2.05 2.02 98.54
5 2.01 1.97 98.49
3　讨论
蒽醌类成分的测定方法多用碱液法[ 6] 。碱液法使溶液呈色后在 30 min后达最大值 ,60 min后逐渐
衰减 ,稳定性较差。薄层色谱法[ 7] 、高效液相色谱法[ 8] 、高效毛细管电泳色谱法[ 9] 等也常用于大黄及其
制剂的研究 ,但薄层色谱法前期处理复杂 ,重现性差;高效液相色谱法和高效毛细管电泳色谱法仪器昂
贵 ,所用流动相耗费大 。本文选用的醋酸镁-甲醇法显色 ,显色后 2 h内稳定 ,有利于测定。此方法简
便 、快速 ,平均回收率为98.60%,相关系数为 0.9949 ,结果可靠 ,不仅可有效地测定唐古特大黄中蒽醌类
成分的含量 ,而且对于其他含有蒽醌类成分的中药和中药制剂的含量分析亦具有一定意义。
通过实验还发现:在测定总蒽醌 、还原型蒽醌含量的实验中 ,酸和水如果不除尽 ,将会使样品溶液的
吸光度值降低 ,尤其酸的存在最为明显 ,使测定结果误差较大。误差产生是因为酸和水对蒽醌与镁离子
生成的络合物的稳定性降低所致 ,所以在加醋酸镁-甲醇溶液之前不能有酸和水残留 ,在结合蒽醌酸水
解后所收集的氯仿溶液用水洗涤至中性这一步很关键 ,由于酸的影响远大于水 ,所以在此过程中 ,一定
要用水洗至中性为止 ,在最后蒸干氯仿的同时也必须将水蒸干。
蒽醌类成分在新鲜植物中一般以还原态的蒽酚或蒽酮形式存在 ,其泻下作用较强 ,但随着植物放置
时间的增长 ,这种成分可缓缓氧化为蒽醌类成分 ,泻下作用减弱[ 10] 。我们所测的唐古特大黄样品为一
年前采集 , 故还原型蒽醌含量相对较低 ,仅为 0.866%。
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