全 文 ：天然产物研究与开发 NatProdResDev2008, 20:469-472
文章编号:1001-6880(2008)03-0469-04
收稿日期:2006-07-05 接受日期:2006-09-30
基金项目:国家中西部专项(2001BA901A47);青海省重大科技项
目(2001-N-107-02)
＊通讯作者 86-971-6143523;E-mail:gcchen@nwipb.ac.cn
青海栽培和野生唐古特大黄蒽醌类成分的 HPLC对比分析
李玉林 1, 2 ,车国冬 1, 2 ,索有瑞 1 ,周国英 1, 2 ,胡凤祖 1 ,陈桂琛 1＊
1中国科学院西北高原生物研究所 ,西宁 810001;2中国科学院研究生院 ,北京 100039
摘 要:采用 HPLC法测定青海栽培唐古特大黄中的 5种蒽醌含量 , 并和野生唐古特大黄药材进行了比较。结
果表明 , 二 、三 、四年龄栽培唐古特大黄中芦荟大黄素 、大黄酸 、大黄素 、大黄酚 、大黄素甲醚 5种蒽醌总量分别为
1.21%, 2.01%, 1.62%, 其中三 、四年龄栽培唐古特大黄已达到《药典》规定的药用标准;野生大黄的总蒽醌含
量远高于栽培大黄为 3.64%。
关键词:栽培唐古特大黄;蒽醌;芦荟大黄素;大黄酸;大黄素;大黄酚;大黄素甲醚
中图分类号:Q946.8;R284.1 文献标识码:A
ComparativeAnalysisofAnthraquinonesContentBetween
CultivatedandWildRheumtanguticum
LIYu-lin1, 2 , CHEGuo-dong1, 2 , SUOYou-rui1 , ZHOUGuo-ying1, 2 , HUFeng-zu1 , CHENGui-chen1＊
1NorthwestInstituteofPlateauBiology, theChineseAcademyofSciences, Xining810001 , China;
2GraduateUniversityofChineseAcademyofSciences, Beijing100039 , China
Abstract:Thetotalcontentsoffiveanthraquinonesincludingaloe-emodin, rhein, emodin, chrysophanol, andphyscionin
cultivatededandwildRheumtanguticumfromQinghaiProvincewereanalyzedbyHPLC.Theresultsshowedthattheto-
talcontentsoffiveanthraquinonesincultivatedRheumtanguticumgrowingtwo, threeandfouryearswere1.21%,
2.01% and1.62%, respectively, andthetotalcontentsoffiveanthraquinonesinthreeandfouryearscultivatedRheum
tanguticumwereallachievedofficinalstandard.ThetotalcontentsoffiveanthraquinonesinwildRheumwere3.64%
andhigherthanthatincultivatedRheum.
Keywords:cultivatedRheumtanguticum;anthraquinones;aloe-emodin;rhein;emodin;chrysophanol;physcion
唐古特大黄 (Rheum tanguticum Maxim.ex
Balf.)为蓼科(Polygonaceae)大黄属(RheumLinn.)
多年生草本植物 ,是药典中大黄药材的主要来源 ,是
青海省的道地药材之一。其有效成分主要是大黄
素 、大黄酚 、大黄酸 、芦荟大黄素和大黄素甲醚等蒽
醌类衍生物 ,具有泻热通肠 ,凉血解毒 ,逐淤通经等
功能。由于需求量很大 ,野生资源日渐枯竭 ,现已有
多处人工栽培。由于蒽醌类化合物为大黄的主要活
性部分 ,因此定期采集栽培大黄样品 ,对不同生长年
限栽培大黄根部样品进行活性成分跟踪分析 ,并和
野生大黄药材进行比较 ,对于人工栽培大黄质量控
制具有重要意义 [ 1] 。测定大黄中蒽醌含量的主要
方法有高效液相色谱法 、薄层扫描法 、比色法等 [ 2-4] 。
本实验采用 《中华人民共和国药典 》(2005年第一
部)[ 5]所载 HPLC法测定和比较了二 、三和四年龄唐古
特大黄和野生唐古特大黄药材中芦荟大黄素、大黄酸 、
大黄素 、大黄酚 、大黄素甲醚 5种蒽醌的含量。
1 仪器 、试剂与材料
1.1 仪器与试剂
Waters515高效液相色谱仪 , Waters2996二极
管阵列检测器 , MetlerToledoAG135万分之一电子
天平 。芦荟大黄素(批号 110795-200504)、大黄酸
(批号 0757-200206)、大黄 素 (批 号 1107565-
200110)、大黄酚 (批号 110796-200309)、大黄素甲
醚(批号 0758-200206)对照品由中国药品生物制品
检定所提供。甲醇为色谱醇 ,水为蒸馏水 ,其它试剂
均为分析纯。
1.2 材料
实验用唐古特大黄(RheumtanguticumMaxim.
exBalf)样品采自青海省湟源县大黑沟乡大黄种植
基地(表 1)。野生大黄药材购自青海省果洛藏族自
治州。取采集的大黄样品根部 ,洗净 ,自然干燥 ,粉
碎 ,过 60目筛 ,备用。
表 1 栽培唐古特大黄和野生唐古特大黄药材样品概况
Table1 ThesamplesofcultivatedandwildRheumtanguticum
样品编号
No.
采样时间
Colectingtime
生长期
Grownage
地点
Region
海拔(m)
Altitude
DHG030927B 2003.09.27 二年 湟源 2900
DHG040927C 2004.09.27 三年 湟源 2900
DHG040927D 2004.09.27 四年 湟源 2900
DHYC (野生药材) 不详 果洛 3600～ 3900
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:PhenomenexkromasicC18柱;流动相:甲
醇 -0.1%磷酸(85:15);检测波长:254 nm;流速:1.0
mL/min;柱温:室温。在此条件下各组分得到良好
分离 , HPLC液相色谱图见图 1。
图 1 对照品 、栽培大黄及野生大黄的高效液相色谱图
Fig.1 HPLCChromatogramsofSamples
1.芦荟大黄素 Aloe-emodin;2.大黄酸 Rhein;3.大黄素 Emodin;4.大
黄酚 Chrysophanol;5.大黄素甲醚 Physcion
a.对照品 Referencesubstances;b.栽培大黄 CultivatedRheum;c.野
生大黄 WildRheum
2.2 对照品溶液制备
精密称取芦荟大黄素对照品 、大黄酸对照品 、大黄
素对照品 、大黄酚对照品 、大黄素甲醚对照品适量 ,用
甲醇溶解分别制成每 1mL含芦荟大黄素 、大黄酸 、大
黄素 、大黄酚各 80mg,大黄素甲醚 40mg的溶液;分别
精密量取上述对照品溶液 2mL,混匀 ,即得。
2.3 线性关系考察
精密量取大黄素 、大黄酸 、大黄酚 、芦荟大黄素
对照品溶液适量混合 ,加甲醇制成标准系列进样测
定 。以色谱峰面积 A对进样量 C(mg)进行线性回
归 ,结果表明:各组分在各自进样量范围内线性关系
良好 ,线性范围 、回归方程 、回归系数见表 2。
表 2 5种蒽醌衍生物对照品标准曲线
Table2 Calibrationcurveof5 anthraquinonederivatives
对照品
Control
回归方程
Regressive
equation
相关系数
r
线性范围
Linear
range(mg)
芦荟大黄素
Aloe-emodin y=49654500x+12970 0.9996 0.005 ～ 0.16
大黄酸
Rhein y=41723300x+173577 0.9996 0.005 ～ 0.16
大黄素
Emodin y=49327800x+266023 0.9992 0.005 ～ 0.16
大黄酚
Chrysophanol y=34584600x+136418 0.9990 0.005 ～ 0.16
大黄素甲醚
Physcion y=24179800x+45923 0.9986 0.0025～ 0.08
2.4 供试样品的制备
取本品粉末约 0.30g,精密称取 ,置具塞锥形瓶
中 ,精密加入甲醇 25mL,密塞 ,称定重量 ,加热回流
1h,放冷再称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇
匀 ,过滤 ,精密量取滤液 5 mL,置烧瓶中 ,挥去甲
醇 ,加入 8%盐酸溶液 10mL,超声处理 2 min,再加
三氯甲烷 10mL,加热回流 1 h,放冷 ,移至分液漏斗
中 ,用少量三氯甲烷洗涤容器 ,并入分液漏斗中 ,分
取三氯甲烷层 ,酸液用三氯甲烷提取三次 , 每次约
10 mL,合并三氯甲烷萃取液 ,减压回收溶剂至干 ,
残渣加甲醇使溶解 ,转移至 10mL容量瓶中 ,加甲醇
到刻度 ,摇匀即得。
2.5 样品测定
分别精密吸取对照品混合溶液和供试品溶液各
10 mL,按上述色谱条件进行测定 ,以外标法计算样
品中大黄素 、大黄酸 、大黄酚 、芦荟大黄素的含量 ,结
果见表 3。
2.6 精密度试验
在上述色谱条件下 ,对同一对照品溶液重复进
样 5次 ,测得峰面积的 RSD为芦荟大黄素 1.38%,
大黄酸 1.22%,大黄酚 1.42%,大黄素 1.65%,大黄
素甲醚 1.88%(n=5)。
2.7 重现性试验
在上述色谱条件下 ,对同一批样品按样品溶液
的制备方法平行制备 5份 ,分别进样 10 μL,同时取
混合对照品溶液进样 10 mL进行 HPLC分析 ,按外
标法测定含量并计算 RSD,芦荟大黄素 2.46%,大
黄酸 2.24%,大黄酚 2.65%,大黄素 3.09%,大黄素
甲醚 3.45%。
470 天然产物研究与开发 Vol.20
表 3 样品含量测定结果
Table3 Theanalyticalresultsofsamples
样品编号
No.
称样量
Quality
含量 Content(%)
芦荟大黄素
Aloe-emodin
大黄酸
Rhein
大黄素
Emodin
大黄酚
Chrysophanol
大黄素甲醚
Physcion
总量
Total
DHG030927B 0.300 0.24 0.47 0.36 0.09 0.05 1.21
DHG040927C 0.301 0.38 0.70 0.65 0.16 0.12 2.01
DHG040927D 0.304 0.33 0.56 0.49 0.13 0.11 1.62
DHYC 0.300 0.60 0.39 0.83 1.40 0.42 3.64
2.8 回收率试验
取已知含量的大黄样品 5份 ,精密称定 ,分别精密
加入一定量对照品溶液 ,按照样品溶液制备方法制备
并测定 ,计算平均回收率。结果芦荟大黄素的平均回
收率 98.2%(RSD=2.58%, n=5);大黄酸的平均回收
率 99.0%(RSD=2.46%, n=5);大黄素的平均回收率
98.6%(RSD=2.72%, n=5);大黄酚的平均回收率 97.
5%(RSD=3.08%, n=5);大黄素甲醚的平均回收率
96.5%(RSD=3.37%, n=5)。
图 2 栽培和野生大黄中 5种蒽醌成分的对比分析
Fig.2 Comparativeanalysisoffiveanthraquinoneconstituents
betweencultivatedandwildRheum
3 讨论
3.1 俞森等 [ 6]报道栽培掌叶大黄生长时间越久 ,
其成分含量越高 ,三年龄大黄质量可以达到药典要
求 。 《中华人民共和国药典 》规定:药用大黄中 5种
蒽醌的总量不得少于 1.5%[ 5] 。 HPLC分析表明 ,栽
培唐古特大黄中 5种蒽醌总量二 、三 、四年龄的分别
为 1.21%、2.01%、1.62%,蒽醌活性成分积累基本
呈上升趋势 。但四年的较三年的蒽醌总量则有所下
降 ,三 、四年龄的栽培唐古特大黄均达到 《药典》规
定的药用标准。
3.2 二至四年龄栽培大黄中芦荟大黄素 、大黄酸 、
大黄素 、大黄酚及大黄素甲醚的积累基本呈增加趋
势 ,但四年的较三年的则均略有下降。和野生大黄
药材比较 ,二至四年龄栽培大黄中 ,芦荟大黄素和大
黄素的积累程度已达到野生大黄的 40% ～ 80%;大
黄酸的含量则比野生大黄要高;而大黄酚和大黄素
甲醚的积累远远不足 ,只有野生大黄的五分之一至
十分之一。大黄素和大黄素甲醚是大黄中的主要有
效单体 ,大黄素能抑菌 、抗炎 、保护肝肾 、抑制血小板
凝聚 、改善微循环及抗癌等活性 [ 7] ;大黄素甲醚则
通过血脑屏障 ,具有抗菌活性 [ 8] 。虽然三 、四年龄
栽培大黄总蒽醌含量即可达到 《药典 》规定的标准 ,
但和野生大黄药材相比 ,大黄酚和大黄素甲醚的含
量则明显较低 ,这是否影响到栽培大黄药材的药效
作用 ,有待进一步做药理学方面的研究 。
参考文献
1 LiYL(李玉林), SuoYR(索有瑞), WangHL(王洪伦).
AnalysisoftotalanthraquinonescontentincultivatedRheum
tanguticum.NatProdResDev(天然产物研究与开发),
2006, 18:1020-1022.
2 CaoWG(曹纬国), LiuZQ(刘志勤), ShaoY(邵赟), et
al.Determinationoffouranthraquinonederivativesintrue
bornRheumtanguticumofQinghaiProvince.ActaBotanica
Boreali-OccidentaliaSinica(西北植物学报), 2004, 24:
2140-2142.
3 HeLY(何丽一), LuoSR(罗淑荣).Studyontheanalysis
ofanthraquinonederivativesofChinesemedicinalherbs.Acta
PharmaSin(药学学报)1980, 15:555-562.
4 ZhuY(朱晔), LinZQ(林竹青).Thestudyonassayan-
thraquinonecontentofRhdixetRihizomaRhei.Heilongjiang
MedJ(黑龙江医药), 2003, 16:171-172.
5 ChinaPharmcopoeiaCommitee(中华人民共和国药典委员
会).ChinesePharmcopoeia, 1stVolume(中国药典 , 第一
部).Beijing:ChemicalIndustryPress, 2005.17-18.
6 YuS(俞森), ZhangH(张浩), LiuXF(刘显福), etal.
Comparisonofcontentsofemodinandchrysophanolin
RheumpalmatumL.indiferentgrowingperiodsandbydis-
tinctivecultivatedmethod.WestChinaJPharmSci(华西药
学杂志), 2005, 20:221-223.
7 ZhangXP(张喜平), LiZF(李宗芳).Generalsituationin
pharmacologicalstudiesonemodin.ChinPharmBull(中国
药理学通报), 2003, 19:851-854.
8 ZhangP(张平), SuLK(苏立凯), LiHM(李会敏), etal.
Protectiveefectsofphysiconagainstcerebralinjuryinduced
byischemia-reperfusioninrats.ChinJPathophysiology(中
国病理生理杂志), 2005, 21:1829-1833.
471Vol.20 李玉林等:青海栽培和野生唐古特大黄蒽醌类成分的 HPLC对比分析