全 文 ：收稿日期:2013 － 03 － 13;修回日期:2013 － 04 － 28
基金项目:贵州省科技计划项目“贵州中药民族药研制创新能力建设”［院所创能(2009) ］
* 通讯作者:E － mail:yangx22002@ 126． com
中华青荚叶提取物体外抗氧化活性研究
唐健波1，2，姚 佳1，2，肖 雄1，2，杨 娟1*
(1．贵州大学 生命科学学院，贵州 贵阳 550025;
2．贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州 贵阳 550002)
摘 要:采用 80 %乙醇对青荚叶进行提取，得到的醇提浸膏依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。运用羟基
(·OH) 自由基体系、二苯代苦味基肼( DPPH·) 自由基体系对 Fe3 +的还原能力进行试验，比较了中华青荚叶各提取
物的抗氧化活性。结果表明:与抗坏血酸比较，中华青荚叶提取物对自由基均有较强清除作用，对·OH 的清除率
为乙酸乙酯萃取物 ＞正丁醇萃取物 ＞石油醚萃取物 ＞水层部分 ＞总醇提取物，IC50值分别为 0． 484、0. 737、0. 775、
0. 855、1. 008 mg /mL;对 DPPH·的清除率为乙酸乙酯萃取物 ＞水层部分 ＞正丁醇萃取物 ＞总醇萃取物 ＞石油醚萃
取物，IC50值分别为 0. 047、0. 060、0. 061、0. 073、0. 721 mg /mL。各提取物对 Fe
3 +均有较强的还原能力，其中正丁醇
萃取物还原效果最为明显。
关键词:中华青荚叶;抗氧化;清除自由基;还原力
中图分类号:Q946． 3 文献标识码:A 文章编号:1008 － 0457(2013)04 － 0349 － 04
The Antioxidant Activities of Extracts In Vitro from Helwingia Chinensis
TANG Jian-bo1，2，YAO Jia1，2，XIAO Xiong1，2，YANG Juan1* (1． College of Life Sciences，Guizhou University，
Guiyang Guizhou 550025，China;2． Key Laboratory of Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and
Chinese Academy of Sciences，Guiyang Guizhou，550002，China)
Abstract:Ethanol (80%) ，petroleum ether，ethyl acetate and n-butanol were used to extract antioxidants
from Helwingia chinensis leaves． The antioxidant activities of extracts in vitro were compared by experiments
of the hydroxyl free radical (·OH) ，DPPH free radical(DPPH·)and deoxidization Fe3 + reaction system．
Compared with the ascorbic acid，the extracts from Helwingia Chinensis showed stronger scavenging effects on
the free radicals． The activity for scavenging·OH was in order of ethyl acetate extract ＞ n-butanol extract ＞
petroleum ether extract ＞ water extract ＞ total ethanol extract，whoes corresponding IC50 values were 0． 484
mg /mL，0． 737 mg /mL，0． 775 mg /mL，0． 855 mg /mL and 1． 008 mg /mL，respectively． The DPPH·-scav-
enging effect was in order of ethyl acetate extract ＞ water extract ＞ n-butanol extract ＞ total ethanol extract ＞
petroleum ether extract，and their corresponding IC50 values were 0． 047 mg /mL，0． 06 mg /mL，0． 061 mg /
mL，0． 073 mg /mL，0． 721 mg /mL，respectively． All of the extracts demonstrated strong deoxidization ability
to Fe3 +，among which the n-butanol extract ranked the first．
Key words:Helwingia chinensis;antioxidant;Radical scavenging;deoxidization
中华青荚叶(Helwingia chinensis Batal)为山茱
萸科 Cornaceae青荚叶属(Helwingia Willd)植物，又
名叶上花、叶上果、叶上珠，因花着生于叶上面的中
脉(近于基部)而得名。可全株入药，根能驱风除
湿，祛瘀活血;果实和叶具有清热除湿、解毒消肿、
行气止痛、凉血止血、清肺止咳的作用［1 － 2］。中华
山 地农业生物学报 32 ( 4 ) : 349 ～ 352，2013
Journal of Mountain Agriculture and Biology
DOI:10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2013.04.016
青荚叶主要分布于我国西部和南方地区［3］。目前，
国内外对于中华青荚叶的研究鲜有报道，已有的研
究也仅限于资源分布、生药鉴定和部分化学成分分
析［4 － 5］。为了更好地开发利用中华青荚叶药用资
源，本试验运用体外抗氧化活性评价方法，对中华
青荚叶不同极性溶剂提取物体外抗氧化能力进行
评价，旨在为中华青荚叶的进一步开发利用提供理
论依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 供试材料 中华青荚叶购自贵阳市万东桥
药材市场，经贵阳中医学院陈德媛教授鉴定为中华
青荚叶 H． Chinensis Batal。
1． 1． 2 仪器与试剂 HP － 8453 型紫外可见分光
光度计(惠普公司) ;MD spectra MAX － 190 连续波
长酶标仪(美国 MD公司) ;AL204 梅特勒电子分析
天平(梅特勒·托利多仪器(上海)有限公司) ;DK
－98 － 11 电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有
限公司)。二苯代苦味基肼自由基(DPPH·) (百灵
威公司) ;抗坏血酸(Vc)、无水乙醇、H2O2、水杨酸、
硫酸亚铁、铁氰化钾、三氯化铁、磷酸氢二钠、磷酸
二氢钠、三氟乙酸均为国产分析纯试剂，乙醇为食
用级。
1． 2 方法
1． 2． 1 样品提取与制备 将中华青荚叶干燥粉
碎，经 80 %乙醇回流提取 4 次，合并提取液减压浓
缩至无醇味，得中华青荚叶总醇提取物。取适量醇
提物用水混悬后依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇
萃取，各萃取液及萃取后的水层部分减压浓缩至固
体，真空干燥后得石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、
正丁醇提取物及水层部分，作为待测样品置于干燥
器中保存。
1． 2． 2 抗氧化活性测定
(1)Fe3 +还原力测定［6 － 7］。取 2． 5 mL 不同浓
度的样品溶液，加入 0． 2 mol /L，pH 值 6． 6 的磷酸
缓冲溶液 2． 5 mL 及 1 %铁氰化钾溶液 2． 5 mL，
50℃水浴 20 min 后急速冷却，加入 10 %三氯乙酸
溶液 2． 5 mL，于 4 000 rp 离心 10 min，取上清液 5
mL，加入蒸馏水 4 mL 及 0． 1 %三氯化铁溶液 1
mL，混匀后 10 min 于 700 nm 处测定吸光值，吸光
值越大则还原能力越强，以 Vc作为对照。
(2)·OH 清除作用测定［7 － 12］。采用 Fenton 反
应体系法测定，利用 H2O2 与 Fe
2 +混合产生·OH，
在该体系中加入水杨酸捕捉·OH 并产生有色物
质，该物质在 510 nm 处有最大吸收。取醇提部分
萃取物各 50 mg，用无水乙醇定容至 50 mL;取水层
部分 50 mg，用蒸馏水定容至 50 mL，配制成质量浓
度为 1 mg /mL，再以该质量浓度溶液配制成所需浓
度。加入一定浓度样品 4 mL，9 mmol /L FeSO4 0． 5
mL，9 mmol /L水杨酸 0． 5 mL，8． 8 mmol /L H2O2 0． 5
mL，混匀，于 37℃水浴中加热 30 min，510 nm 测定
样品吸光度(Ai)。将体系中的样品改为加入 4 mL
蒸馏水，测定得空白对照吸光度(A0) ，向体系中加
入 0． 5 mL 蒸馏水代替 8． 8 mmol /L H2O2，测定得样
品本底吸光度(Aj)。其中，样品吸光度(Ai)每个
质量浓度做 3 个平行，取平均值，以抗坏血酸作阳
性对照，按下式计算清除率:
K =［A0 －(Ai － Aj) ］/A0 × 100%
(3)DPPH·自由基清除作用测定［13 － 17］。
DPPH·是一种稳定的自由基，在有机溶剂中呈紫
色，在 517 nm处有较大吸收，加入抗氧化剂后一部
分自由基被清除掉，使该波长下吸收强度减弱，可
借此来评价某物质的抗氧化活性。取醇提部分萃
取物各 50 mg，分别用无水乙醇溶解并定容至 50
mL;取水层部分 50 mg，蒸馏水定容至 50 mL，配制
成质量浓度为 1 mg /mL样品，再以该质量浓度配制
成所需浓度。以无水乙醇配制 0． 16 mmol /L
DPPH·溶液，置于棕色容量瓶中。取 3 mL 样品溶
液加入 3 mL DPPH·溶液于25℃水浴中加热 15 min
后，在 517 nm 测得试样吸光度(Ai) ，取 3 mL 蒸馏
水代替样品测得空白吸光度(A0) ，以 3 mL 样品中
加入 3 mL蒸馏水测得样品本底吸光度(Aj)。其中
(Ai)每个样品质量浓度做 3 个平行，取平均值。以
抗坏血酸作阳性对照，按下式计算清除率:K =［A0 －
(Ai －Aj)］/A0 ×100%
1． 2． 3 数据统计 采用 SPSS19． 0 统计分析软件，
执行回归，Probit分析，选取可信度 95%计算 IC50。
2 结果与分析
2． 1 Fe3 +还原力测定
还原能力的测定，可检验化合物是否为良好的
电子供应体，所提供的电子可以使 Fe3 + 还原为
Fe2 +，从而使体系溶液颜色改变，即反应出体系中
氧化还原状态的改变。吸光值越大，还原力越强，
抗氧化效果越佳。由图 1 可见，在试验浓度范围
内，各萃取物的还原力与其质量浓度成明显的量效
关系，各部分的还原力大小依次为 Vc ＞正丁醇提取
053 山地农业生物学报 2013 年
物 ＞水层部分 ＞乙酸乙酯提取物 ＞总醇提取物 ＞石
油醚提取物。
2． 2 ·OH清除作用的测定
由图 2可见，大部分提取物对·OH自由基都表
现出一定程度的清除能力，并在试验浓度范围内呈
现明显的量效关系，但清除能力都弱于 Vc，清除能
力大小依次为乙酸乙酯萃取物 ＞正丁醇萃取物 ＞
石油醚萃取物 ＞水层部分 ＞总醇提取物。考虑到
样品本底吸收的影响，本试验样品设最高浓度为 1
mg /mL(未测定更高浓度样品的清除作用) ，IC50值
分别为 0. 484 mg /mL(乙酸乙酯萃取物)、0. 737
mg /mL(正丁醇萃取物)、0. 775 mg /mL(石油醚萃
取物)、0. 855 mg /mL(水层部分)、1. 008 mg /mL(总
醇提取物)。IC50值越小表明清除能力越强，说明
提取物中乙酸乙酯萃取物的清除率相对较好。
图 2 清除羟基自由基的能力
Fig． 2 The extract ability for hydroxyl radical-scavenging effect
2． 3 DPPH·自由基清除作用测定
DPPH·自由基属于比较稳定的有机物自由基，
广泛应用于测定纯抗氧化剂或植物提取的体外抗
氧化活性。以抗氧化剂 Vc 作为参照，本研究利用
该法对比了提取物的 DPPH·自由基清除效果。从
图 3 可看出，各提取物部分对 DPPH·自由基都表现
出了很强的清除能力，并在试验范围内呈现明显的
量效关系。其中，乙酸乙酯萃取物对 DPPH·的清
除能力最好，当质量浓度达到 0. 15 mg /mL 时清除
率达到了 91. 5%。总的清除能力大小依次为 Vc ＞
乙酸乙酯萃取物 ＞正丁醇萃取物 ＞水层部分 ＞总醇
萃取物 ＞石油醚萃取物。
中华青荚叶提取物对 DPPH·自由基清除作用
的半清除率浓度 IC50大小依次为 0. 047、0. 060、
0. 061、0. 073、0. 721 mg /mL。其中，乙酸乙酯萃取
物的效果最好，水层部分和正丁醇萃取物的 IC50比
较接近，但从曲线趋势看，正丁醇的上升趋势比较
好，因此认定正丁醇的效果总体上比水层部分稳
定，效果更佳。
图 3 清除 DPPH·自由基的能力
Fig. 3 The extract ability for DPPH·radical-scavenging effect
3 结 论
在所选的 3 种体外抗氧化活性评价方法中，乙
酸乙酯萃取物对·OH自由基和 DPPH·自由基的清
除作用均较好，其次是正丁醇萃取物;而在对 Fe3 +
还原力检测中正丁醇萃取物显示出了最好的效果。
试验显示，中华青荚叶各提取物都具有一定的抗氧
化能力，且在一定质量浓度时，样品溶液的部分抗
氧化指标接近于 Vc 的抗氧化效果，说明中华青荚
叶提取物具有良好的抗氧化活性，可以作为天然的
抗氧化剂。本试验结果为中华青荚叶的抗衰老作
用提供了科学的理论依据。
参 考 文 献:
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253 山地农业生物学报 2013 年