全 文 ：[成分分析]
双波长分光光度法测定贯叶连翘提取物中金丝桃素
王利宾 , 王旭东
(成都康弘制药有限公司技术中心 ,成都 610041)
关键词:金丝桃素;双波长分光光度法;含量测定
摘要:目的:利用双波长分光光度法测定贯叶连翘提取物中金丝桃素的含量。方法:双波长分光光度法波长组合为
λ647nm ～ λ589nm , 甲醇作溶剂空白。结果:金丝桃素在 1.30μg/ ml～ 29.75μg/ml范围内线性好(r=0.9998)。平均回收
率为 102.32%, RSD=1.08%(n=6)。结论:结果较为准确 、简单易行。
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2001)-11-0822-02
收稿日期:2001-02-50
作者简介:王利宾(1957～ ),男 ,山西浮山人 ,主管技师 ,主要从事药品分析及质量标准研究。联系电话:028-5453543转 675。
Determination of Hypericin Content in Extract of Hypericum
by Dual-Wavelength Spectrophotometry
WANG Li-bin , WANG Xu-dong
(Techn ical Centre of Chengdu Kanghong Pharmaceut ical Co., Ltd., Chengdu 610041 , Ch ina)
Key words:hypericin;dual-waveleng th spect ropho tometry
Abstract:Objective:Hypericin content w as determined in the ex t ract of hypericum by dual-waveleng th spec-
trophotometry .Methods:The w aveleng ths were adopeted 589nm ～ 647nm against a methanol blank.Results:
The linear co rrelation w as observed wi thin the range of 1.30 ～ 29.75μg/ml(r=0.9998).The average recovery
of hypericin was 102.32%(n=6), RSD was 1.08%.Conclusion:the result w as exact , method was simple and
convenient .
金丝桃素(hypericin)是金丝桃属(Hypericum
L)植物中药用成分之一 ,尤以贯叶连翘(Hypericum
perforatum L .)中含量最高 ,近年来研究表明 ,金丝
桃素具有抗抑郁 、镇定 、抗菌消炎 、创伤收敛 ,能抗
DNA 、RNA 病毒 ,可用于艾滋病的治疗[ 1 ,2] 。目前
对金丝桃素测定方法有高效液相色谱法 ,薄层色谱
扫描法 ,分光光度法[ 3 , 4 , 5] ,前两种方法须用金丝桃
素对照品 ,但目前金丝桃素对照品的价格极高 ,不利
普遍使用 ,目前应用的单波长分光光度法无抗干扰
能力 ,故准确性较差 ,笔者通过对贯叶连翘提取物中
的干扰研究 ,建立了双波长分光光度法测定贯叶连
翘提取物中金丝桃素的方法。结果较为准确 ,简单
易行 。
1 仪器与试剂
1.1 仪器
岛津 UV-1601 型分光光度计 , UV-1800PC 型
分光光度计 , CQ-250 型超声波震荡仪 ,玻璃层析柱
(直径为 21mm),内填大孔树脂 。
1.2 试药
甲醇 、乙醇 、丙酮等(均为AR级)。
金丝桃素对照品(SIGMA 公司提取 ,HPLC 试
剂 ,含量为 85%)。
贯叶连翘提取物(本公司自制)。
2 方法和结果
2.1 条件的选择
2.1.1 确定检测波长与参比波长
2.1.1.1 干扰部分的分离
称取贯叶连翘提取物 0.2g ,加甲醇 75ml ,超声
15min ,滤过 ,取滤液 5ml缓缓加入已备好的玻璃层
析柱中用 30ml甲醇洗脱 ,收集该段洗脱液(黄色),
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水浴上浓缩后成为干扰部分 1;再用 95%乙醇
150ml洗脱(橙红色),最后用丙酮 50ml洗脱 ,收集
此段洗脱液 ,水浴上挥干 ,加 5ml甲醇溶解残渣 ,为
干扰部分 2。
2.1.1.2 扫描图谱的处理
以甲醇作空白 ,将金丝桃素对照品溶液分别于
350 ～ 750nm 波长范围内扫描 ,将干扰 1液与干扰 2
液混合后同法扫描 ,结果见图 1。
图 1 1 为金丝桃素对照品(实线) 2 为干扰部分(虚线)
由上图选定测定波长为 589nm ,参比波长为 647nm
(即■Aλ2-λ1=0)。
2.2 标准曲线及常数确定
精密称取金丝桃素对照品适量 ,加甲醇数毫升 ,
超声 3min ,使金丝桃素对照品完全溶解 。加甲醇制
成1ml含 29.75μg金丝桃素 ,精密量取该溶液 ,定量
加甲醇逐级稀释成1.30μg/ml , 3.57μg/ml , 4.46μg/
ml , 5.59μg/ml , 8.92μg/ml ,以甲醇作参比 ,用确定
的波长组合λ647 ～ 589 测得 ΔAλ647-λ589 ,以金丝
桃素对照品溶液浓度为横坐标 , ΔAλ647-λ589 为纵
坐标制得金丝桃素标准曲线 , 其回归方程为
ΔAλ647-λ589=0.005+0.00487C , r =0.9998。表
明在 1.30μg/ml ～ 29.75μg/ml 间有良好的线性关
系。
2.3 样品测定
精密称取已混匀的贯叶连翘提取物 0.15g ,置
100ml棕色量瓶中 ,加甲醇 75ml ,超声 15min ,冷却
后 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,弃去初滤液 2ml ,取
续滤液置 1cm 比色皿中(甲醇作参比),按波长组合
λ647-589测得 ΔAλ647-λ589 ,照以下公式计算:
P=ΔAλ647-λ589
1000
×100×20.53× 1
W
×100%
ΔAλ647-λ589———波长组合λ647-λ589所测值。
W ———取样量(mg)。
20.53———单位 ΔAλ647-λ589所含金丝桃素的量(μg/ml)(甲醇
溶液 , 1cm 比色皿)。
2.4 回收率测定
精密量取照上述方法处理的贯叶连翘提取物样
品液 1 ～ 9ml ,分别加入不同体积的金丝桃素对照品
溶液 ,混合均匀后照上法测定 ,计算而得 ,结果见表
1。
表 1 金丝桃素对照品回收结果
编
号
本底值
(μg)
加标量
(μg)
样液加标
(μg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
变异
(%)
1 19.61 32.03 52.56 102.90
2 35.29 6.41 41.88 102.92
3 11.39 10.59 22.28 102.72 X=102.32%RSD=1.08
4 11.39 15.89 27.84 103.49
5 15.19 5.30 20.53 100.77
6 14.95 5.42 20.43 101.11
2.5 精密度
日内测定变异:对浓度为 4.93μg/ml , 3.26μg/
ml的样液测定 5次 , RSD%分别为 1.31%,1.52%。
2.6 灵敏度
桑德尔灵敏度 S =504/ε=504/24504.89 =
0.0206(μg/cm2)
3 讨论
3.1 因 SIGMA公司提供的金丝桃素对照品含量
为 85%,不宜直接配制使用 ,为保证其准确性 ,笔者
将其称出量乘 0.85后(即折为 100%)而配制 。
3.2 金丝桃素对照品溶液及样液不宜放置日光下 ,
吸光值会随放置时间延长而增高 ,使测定结果偏高。
选用棕色量瓶可大大改善这一影响 ,如样品溶液不
能及时测定 ,应置柜内避光 ,但应当日完成测定 。
3.3 对金丝桃素对照品甲醇溶液在不同仪器上扫
描 ,所得最大吸收均在 588.2nm ～ 589nm ,贯叶连翘
提取物样液经大孔树脂柱处理后 ,扫描所得最大吸
收值也在 588.5nm ～ 589nm ,依据扫描谱图 ,选定
589nm 作为测定波长 。
3.4 笔者对金丝桃素对照品溶液及样品溶液于
350 ～ 750nm 波长范围内扫描所得一 、二 、三阶导数
吸收光谱进行了分析 ,选用二阶导数光谱 ,仍可进行
排除大部干扰的测定(588.5nm),不足之处是由于
二阶导数光谱处理后 ,所需的信息量大大减少 ,使测
定相对误差增大。
致谢:感谢技术中心信息室相关资料的查证。
参考文献:
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RP-HPLC法同时测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量
安彩贤 , 杨广德 , 叶建涛 , 符军梅
(西安交通大学药学院 710061)
关键词:高效液相色谱法;小果博落回;血根碱;白屈菜红碱
摘要:目的:测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量。方法:反相高效液相色谱法。色谱柱:Kromasil C18柱 ,流动
相:乙腈-0.1%磷酸水溶液(25∶75), 检测波长:270nm , 流速 1.0ml·min-1 。结果:白屈菜红碱 、血根碱的回收率分别为
90.2%, 92.8%;RSD分别为 1.5%, 2.4%。结论:为测定小果博落回中生物碱含量提供了准确 、灵敏 、可靠的分析方法。
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2001)-11-0824-02
作者简介:安彩贤(1947～ ),女 ,西安市人 ,教授 ,大学本科。主要从事中药新制剂的开发与研究。电话:(029)8226929 ,邮编:710061。
Simultaneous Determination of Sanguinarine and Chelerythrine
in Macleaya Microcarpa(Maxim)Fedde by RP-HPLC
AN Cai-xian , YANG Guang-de , YE Jian-tao , FU Jun-mei
(College of Pharmacy , Xi an Jiao Tong U niversity , X i an 710061 , China)
Key words:RP-HPLC;macleaya microcarpa(Maxim)fedde;sanguinarine;chelery thrine
Abstract:Objective:To determine the content of sanguinarine and chelery thrine in M acleaya microcarpa(Max-
im)Fedde.Methods:RP-HPLC was adopted , kromasil C18 column (150mm ×4.6mm.5μm)with a mobile
phase acetonit rile-0.1%(V/V)phosphoric acid solution(25∶75)by UV detector at 270nm.Results:The aver-
age recoveries of chelery thrine and sanguinarine w ere 90.2%, 92.8%, RSD were 1.5%, 2.4% respectively.
Conclusion:A simple , rapid and sensitive method w ith good precision w as established.
小果博落回[ Macleaya m icrocarpa(Maxim)
Fedde]为罂粟科博落回属植物 ,其地上部分具有清
热解毒 、杀虫止痒等功效[ 1] 。主要活性成分为生物
碱 ,包括血根碱(sanguinarine)、白屈菜红碱(chelery-
thrine)等[ 2 , 3] 。本文采用 RP-HPLC 法测定了不同
部位小果博落回中血根碱和白屈菜红碱含量 。
1 仪器和试药
1.1 仪器
高效液相(包括泵 , 紫外检测器)(Hi-teeh 公
司);ANASTAR色谱工作站。
1.2 试剂
乙腈(色谱纯);三蒸水;其它试剂均为分析纯 。
1.3 药品
血根碱 、白屈菜红碱标准品(Sigma 公司);药材
于 1999年 10月采自陕西青华山 ,经鉴定为小果博
落回[ Macleaya microcarpa(Maxim)Fedde] ,试验
前将药材分为叶 、茎 、全株三部分 ,自然通风干燥 。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:Kromasil C18柱(150mm ×4.6mm ,
5μm),检测波长:270nm[ 4] ,流动相:乙腈-0.1%磷酸
水溶液(25∶75),流速:1.0m l·min-1 ,柱温:室温。
2.2 标准品溶液的制备
精密称取血根碱 、白屈菜红碱标准品各约
10mg ,加甲醇溶解并定容于 100m l量瓶中 ,配制成
混合标准品储备液 ,再用甲醇稀释成 2 , 4 , 10 , 12 ,
16μg·ml-1的系列溶液 。按选定的色谱条件进样。
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