全 文 : dermatology today[J].J Eur Acad Dermatol Venereol,2009,
23 (5):505-516.
[8] Singh J,Singh S.Transdermal iontophoresis:effect of penetra-
tion enhancer and iontophoresis on drug transport and surface
characteristics of human epidermis[J].Curr Probl Dermatol,
1995,22:179-183.
[9] Alvarez-Figueroa MJ,Delgado-Charro MB,Blanco-Mendez
J.Passive and iontophoretic transdermal penetration of metho-
trexate[J].Int J Pharm,2001,212 (1):101-107.
[10] 易鸿,梁光华,刘海乐,等.白藜芦醇三甲醚乳胶体外经皮
渗透研究[J].中南药学,2011,9 (5):324-328.
[11] 张玲玲,邓意辉,赵静,等.齐多夫定碳酸胆固醇酯脂质体
的制备及性质考察[J].中国药剂学杂志,2006,4 (5):
198-205.
[12] 谢悦良,张毕奎.柔性纳米脂质体的研究进展[J].中国药
房,2008,19 (25):1983-1985.
[13] Honeywel-Nguyen PL,Bouwstra JA.The in vitro transport
of pergolide from surfactant-based elastic vesicles through hu-
man skin:a suggested mechanism of action[J].J Control Re-
lease,2003,86 (1):145-156.
(收稿日期:2012-06-19;修回日期:2012-07-05)
作者简介:毛晶磊,女,主管药师,主要从事中药材质量研究工作,Tel:15304866960,E-mail:tnx79@sina.com *通讯作者:王
文凯,女,馆员,主要从事中医药文献信息检索工作,Tel:18946187959,E-mail:wwk@163.com
不同采收期及药用部位的长柱金丝桃中有效成分的含量变化
毛晶磊1,王文凯2 (1.大庆油田总医院,黑龙江 大庆 163000;2.黑龙江中医药大学,哈尔滨 150036)
摘要:目的 考察长柱金丝桃药用部位、采收期对金丝桃苷和金丝桃素的含量变化。方法 采用 HPLC法,色谱
柱为Agilent Zorbax Extend-C18 (250mm×4.6mm,5μm),金丝桃苷的流动相为乙腈-0.4%磷酸梯度洗脱,柱温
为室温,检测波长360nm,流速1.0mL·min-1;金丝桃素流动相为甲醇-0.1mol·L-1磷酸二氢钠 (90∶10),柱
温为室温,流速为1.0mL·min-1,检测波长590nm。结果 长柱金丝桃花中金丝桃苷及金丝桃素的含量最高;
长柱金丝桃在5月中旬其有效成分含量达到最高,后又逐渐降低。结论 长柱金丝桃中金丝桃苷和金丝桃素的含量
随着采收时间的不同而不同,而且不同器官中含量差异显著。
关键词:长柱金丝桃;采收季节;金丝桃苷;金丝桃素
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2012)08-0594-04
doi:10.3969/j.issn.1672-2981.2012.08.011
Determination of active constituents in Hypericum ascyron L.
in medicinal partsharvested at different time
MAO Jing-lei 1,WANG Wen-kai 2 (1.Daqing Oilfield General Hospital,Daqing Heilongjiang163000;2.Heilongjiang
University of Chinese Medicine,Harbin150036)
Abstract:Objective To determine the contents of hyperoside and hyperforin in Hypericum ascyron L.colected in
medicative parts at different time.Methods An HPLC method was adopted.The assay of hyperoside was performed
on Agilent Zorbax Extend-C18 (250mm×4.6mm,5μm)column with acetonitrile-0.4%phosphoric acid as the mo-
bile phase(gradient elution)at 1.0mL·min-1.The detection wavelength was 360nm and column temperature was
room temperature.The mobile phase of hypericin was methanol-0.1mol·L-1 sodium dihydrogen phosphate(90∶10)
at 1.0mL·min-1.The detection wavelength was 590nm and the column temperature was room temperature.Results
The content of hyperoside and hypericin was the highest in the blossom,the content of hyperoside and hypericin was
the highest in Hypericum ascyron L.harvested in mid-May,and then gradualy reduced.Conclusion The content of
hyperoside and hypericin in Hypericum ascyron L.changes with seasons in different parts.
Key words:Hypericum ascyron L.;harvest season;hyperoside;hypericin
长柱金丝桃又名黄海棠、红旱莲,有抗菌消炎、收敛止 血的作用[1]。金丝桃属 (HypericumL.)在我国有55种,
495
Central South Pharmacy.August 2012,Vol.10No.8 中南药学2012年8月第10卷第8期
主要分布在华东、华西、陕甘、新疆、贵州等地[2]。目前,
中国药典2010年版一部[3]收录的金丝桃属植物为贯叶金丝
桃,主要分布在西南地区,以云南分布最广,在东北地区分
布较少,作为药用植物的仅有2种,即长柱金丝桃 (Hype-
ricum ascyron L.)和乌腺金丝桃 (H.attenuatum)[4]。近年
来,金丝桃属植物提取物显示出较强的抗抑郁、抗炎、抗菌
活性。主要化学成分为芦丁 (rutin)、槲皮素 (quercetin)、
金丝 桃 苷 (hyperoside)和 贯 叶 金 丝 桃 素 (hyperforin)
等[5]。近年来由于过度开采,使其资源锐减,为了扩大药用
金丝桃属植物药材开发,本文应用 HPLC法对长柱金丝桃
的主要成分金丝桃素、金丝桃苷进行测定,建立了该有效成
分的测定方法,摸索了黑龙江地区长柱金丝桃的采收期,确
定了药用部位,为东北产的金丝桃属植物的进一步开发提供
依据。
1 仪器与试药
LC-2010C型 HPLC仪,包括 LCsolution色谱工作站、
UV-2010A检测器、自动进样器、柱温箱、四元低压梯度泵
(日本岛津公司);KQ-500DB型超声波清洗器 (昆山市超
声仪器有限公司)。
甲醇为色谱纯,水为高纯水,其余试剂均为分析纯;金
丝桃苷、金丝桃素对照品 (均购买于成都瑞芬思生物制品公
司,纯度≥98%);长柱金丝桃全草于2011年从5月份开始
每隔15d左右采集1次样本,全株采回,直至10月份。采
集于黑龙江省帽儿山山坡上,黑龙江中医药大学分析教研室
李彦冰老师鉴定为金丝桃属 (Hypericum)藤黄科长柱金丝
桃 (Hypericum ascyron L.)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性
色谱柱为Agilent Zorbax Extend-C18色谱柱 (250mm×
4.6mm,5μm);金丝桃素流动相甲醇-0.1mol·L
-1磷酸
二氢钠 (90∶10);检测波长590nm;金丝桃苷流动相乙腈
(A)-0.4%磷酸 (B)梯度洗脱:0~10min,9% A,11~
15min,9%~15% A,15~40min,15% A,41~45min,
9%A,检测波长 360nm;流速 1.0 mL·min-1;柱温
30℃,进样体积10μL。在此条件下金丝桃素与其他成分的
分离度R>1.5,保留时间适中,理论板数按金丝桃素计算
应≥3 000,色谱见图1。
2.2 标准溶液的配制
分别取1.72mg的金丝桃素、1.47mg的金丝桃苷对照
品,分别加甲醇定容至10mL容量瓶中,得到172μg·
mL-1的金丝桃素及147μg·mL
-1金丝桃苷对照品储备溶
液。取金丝桃苷储备液0、1、2、3、4mL分别置于5mL
容量瓶中,加甲醇定容至刻度,得浓度为0、29.4、58.8、
88.2、117.6μg·mL
-1对照品溶液。取金丝桃素储备液0、
1、2、3、4mL分别置于5mL容量瓶中,加甲醇定容至刻
度,得浓度为0、34.4、68.8、103.2、137.6μg·mL
-1对
照品溶液 (加样回收试验所需金丝桃苷对照品另配,含量为
1.430mg·mL-1)。
2.3 供试品的制备
图1 长柱金丝桃高效液相色谱图
Fig 1 HPLC chromatogram of Hypericum ascyron L.
A.金丝桃苷对照品 (hyperoside reference);B.金丝桃素对照品
(hypericin);C、D.长柱金丝桃样品 (sample);1.金丝桃苷 (hy-
peroside);2.金丝桃素 (hypericin)
将长柱金丝桃60℃烘干,粉碎过60目筛,各精密称取约
1g,6倍石油醚进行脱脂浸泡12h,滤过晾干药渣,20mL
75%甲醇超声提取30min,进行3次提取,合并提取液
60℃蒸干,定容至25mL容量瓶,过0.45μm滤膜,即得。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取金丝桃苷和金丝桃素储备溶液10μL,注
入高效液相色谱仪。以浓度 (X,μg·mL
-1)为横坐标,
峰面积积分值 (Y)为纵坐标,分别绘制标准曲线,金丝桃
苷的回归方程为Y=2.160×104 X+2.812×104 (r=
0.999 7),线性范围为0~117.6μg·mL
-1;金丝桃素的回
归方程为Y=6.848×104 X-2.786×103 (r=0.999 7),线
性范围为0~137.6μg·mL
-1。
2.5 精密度试验
分别取金丝桃苷和金丝桃素对照品溶液,连续进样5
次,每次10μL,测定峰面积。结果金丝桃苷和金丝桃素峰
面积的RSD分别为0.49%和1.2% (n=5),表明仪器精密
度良好。
2.6 稳定性试验
精密吸取室温放置的同一批次采集的长柱金丝桃供试品
溶液,分别于0、2、4、6、8、10、12h进样10μL,测定
峰面积。结果金丝桃苷和金丝桃素面积的 RSD 分别为
2.5%和1.8% (n=7),表明供试品溶液在12h内稳定。
2.7 重复性试验
精密称取同一批号样品6份,每份1.00g,分别按
“2.3”项下方法制备供试品溶液,各进样10μL,测定峰面
595
中南药学2012年8月第10卷第8期 Central South Pharmacy.August 2012,Vol.10No.8
积。结果金丝桃苷和金丝桃素峰面积的RSD 分别为2.1%
和2.0% (n=6),表明本方法重复性良好。
2.8 加样回收试验
精密称取8月20日所采样品全草 (金丝桃苷、金丝桃素
含量见表3)粉末约1.00g于25mL容量瓶中,平行6份,
分别加入等体积的 “2.2”项下金丝桃苷和金丝桃素对照品溶
液,按 “2.3”项下方法制备供试品溶液,按 “2.1”项下色
谱条件分别测定质量分数,计算加样回收率,结果见表1。
表1 金丝桃苷和金丝桃素的加样回收试验结果 (n=6)
Tab 1 Recovery of hyperoside and hypericin (n=6)
成分
(composition)
取样量
(sample)
/g
样品含量
(content)
/mg
加入量
(added content)
/mg
测得量
(measured value)
/mg
回收率
(recovery)
/%
平均回收率
(average recovery)
/%
RSD/%
金丝桃苷 1.002 5 6.10 5.32 11.14 94.7 98.3 3.6
1.012 1 6.15 5.32 11.67 104.0
1.109 9 6.74 5.32 11.88 96.6
1.141 6 6.94 5.32 11.99 94.9
1.102 3 6.70 5.32 11.94 98.5
1.055 6 6.42 5.32 11.79 101.0
金丝桃素 1.002 5 2.03 2.58 4.55 97.7 97.5 2.7
1.012 1 2.04 2.58 4.67 102.0
1.109 9 2.24 2.58 4.68 94.6
1.141 6 2.31 2.58 4.83 97.7
1.102 3 2.23 2.58 4.68 95.0
1.055 6 2.13 2.58 4.65 97.7
2.9 样品测定与结果
将不同日期采集的样品 (S1~S9)以及8月份采集样本
的花 (S10)、茎 (S11)、叶 (S12)、全草样品,按 “2.3”
项下样品制备方法制备,结果见表2、图2。
表2 金丝桃素及金丝桃苷样品测定结果 (n=3)
Tab 2 Content determination of hyperoside and hypericin
in Hypericum ascyron L.(n=3)
样品
(sample)
日期
(date)
金丝桃苷
(hyperoside content)
/mg·g-1
金丝桃素
(hypericin content)
/μg·g-1
S1 2011.5.7 11.05 -
S2 2011.5.21 12.43 -
S3 2011.6.10 11.22 -
S4 2011.6.24 8.75 4.32
S5 2011.7.11 7.22 3.05
S6 2011.8.20 6.08 2.02
S7 2011.9.5 5.88 -
S8 2011.9.21 4.36 -
S9 2011.10.6 4.25 -
S10 2011.8.20 1.13 2.74
S11 2011.8.20 1.03 1.53
S12 2011.8.20 0.17 0.022
注 (Note):“-”表示未检出 (“-”notdetected)。
图2 长柱金丝桃中金丝桃苷的含量变化
Fig 2 Variation of hyperoside in Hypericum ascyron L.
3 讨论
3.1 金丝桃素的含量问题
对于长柱金丝桃中是否含有金丝桃素的问题,本试验在
不同采收时间进行了测定,通过结果 (见表2)可见,在黑
龙江省帽儿山地区6月中旬到8月中旬所采集的长柱金丝桃
样品能够检测出金丝桃素,而其他样品均未检出,而对于能
够检出的样品分别测定不同器官,结果表明,金丝桃素的含
量花>叶,茎中几乎不含有该成分,这与曾建国等对贯叶连
翘等不同器官的检测结论一致[6-7]。通过吕洪飞等[8]对贯叶
金丝桃的研究表明,金丝桃素的积累和分泌组织的形成有着
一定的联系。长柱金丝桃在生长旺盛的5~6月份,其金丝
桃素的分泌也可能处于其分泌的旺盛阶段,而后随着营养器
官增长的减慢,其分泌量也跟着减少。所以,不同季节的变
化规律及其机制,以及8份以后未检测出金丝桃素是否也和
花期的到来有关,还需一定的研究。对于采摘部位的问题,
虽然花中含有较高含量的金丝桃素和金丝桃苷,但由于花的
产量远小于叶,而叶中的含量仅次于花,因此笔者认为长柱
金丝桃最佳采收季节在6月末至7月初,采摘部位以叶
为宜。
3.2 流动相的考察
对于金丝桃苷的测定,笔者首先考察了中国药典2010
年版一部贯叶金丝桃中金丝桃苷含量测定的流动相条件,乙
腈-0.1%磷酸 (16∶84),检测波长360nm,但对照品对应
位置峰与其他成分峰不能较好的分离,重复性较差,后对该
方法进行改进,确定为本试验所示色谱条件。
对于金丝桃素的测定,本试验对流动相条件进行了考
察,分别用甲醇-0.4% (45∶55)、磷酸甲醇-0.006mol·
L-1磷酸氢二钠 (87.5∶12.5,用磷酸调pH至6.5)、甲醇-
0.1mol·L-1磷酸二氢 (90∶10)等不同系统进行洗脱,结
果表明本试验所采用的方法为最佳,其相邻峰的分离度>
1.5,符合分析要求,保留时间较短且分离效果好。
695
Central South Pharmacy.August 2012,Vol.10No.8 中南药学2012年8月第10卷第8期
3.3 样品提取条件的考察
本试验对长柱金丝桃的提取条件也进行了考察,分别采
用25%、50%、75%、100%甲醇对其进行提取,结果表明
75%甲醇提取效果最佳;在考察75%甲醇提取的基础上,
又对提取时间及提取方法进行了考察,结果显示超声提取
30min时,长柱金丝桃中金丝桃苷已经完全提取,因此采
用体积分数为75%的甲醇水溶液,超声提取30min。
参考文献
[1] 潘映红,郭宝林,彭勇 .国产金丝桃属药用植物资源现状及利
用前景[J].中药材,1993,16 (3):14-17.
[2] 中国科学院植物志编辑委员会 .中国植物志[M].50卷 .第2
分册 .北京:科学出版社,1990:2-71.
[3] 中国药典2010年版 .一部[S].2010:215.
[4] 崔艳红,李晶 .金丝桃属植物研究进展及黑龙江省的资源概况
[J].东北农业学学报,2006,37 (1):105-110.
[5] 郑清明,秦路平,郑汉臣,等 .国产11种金丝桃属植物中化
学成分 的 含 量 分 析 [J].第 二 军 医 大 学 学 报,2003,24
(4):457.
[6] Zeng JG,Zhang S,Chen YL.Hypericin content is analyzed by
HPLC in different parts of Hypericum perforatum [J].North-
westPharm J,2000,15 (4):158-162.
[7] Hang Q.The content of hypericin is analyzed in different parts
of Hypericum perforatum [J].Zhejiang J Integr Tradit Chin
West Med,2004,14 (12):780-782.
[8] Luh F,Hu ZH.Studies on the development of secretory struc-
tures and their secretory products accumμLation of Hypericum
perforatum [J].Acta Bot Boreale-Occidentalia Sin,2001,21
(2):287-292.
(收稿日期:2012-04-26;修回日期:2012-05-14)
基金项目:国家药典委员会国家药品标准提高行动计划 (编号288)。
作者简介:罗艳,女,硕士研究生,主要从事药品、保健食品质量控制研究,Tel:(0731)82275847,E-mail:luoyan_0103@ya-
hoo.com.cn *通讯作者:钟庆元,女,主任药师,主要从事药品、食品、化妆品质量控制研究,Tel:(0731)82275836,E-mail:
yjszhong@126.com
复方益肝灵片定性定量方法研究
罗艳,赵薇,雷玉萍,孟庆玉,李文莉,钟庆元* (湖南省食品药品检验研究院,长沙 410001)
摘要:目的 建立复方益肝灵片定性定量方法。方法 采用薄层色谱法鉴别水飞蓟素和五仁醇浸膏;采用高效液相
色谱法测定水飞蓟宾和五味子醇甲的含量。结果 薄层色谱斑点清晰,分离度好,专属性强;水飞蓟宾在
0.098 8~1.976μg (r=0.999 9)与峰面积线性关系良好,平均加样回收率99.7%,RSD为1.7%;五味子醇甲在
0.095 1~1.902μg (r=0.999 9)与峰面积线性关系良好,平均加样回收率101.6%,RSD为1.7%。结论 本法
简便、可靠、准确,可用于复方益肝灵片的质量控制。
关键词:复方益肝灵片;定性定量方法;薄层色谱法;高效液相色谱法
中图分类号:R917,R927.2 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2012)08-0597-05
doi:10.3969/j.issn.1672-2981.2012.08.012
Qualitative and quantitative study of Fufang Yiganling Pian
LUO Yan,ZHAO Wei,LEI Yu-ping,MENG Qing-yu,LI Wen-li,ZHONG Qing-yuan* (Hunan Institute for Food
and Drug Control,Changsha410001)
Abstract:Objective To establish the qualitative and quantitative method for Fufang Yiganling Pian.Methods Sily-
marin and extractive material from Fructus Schisandrae Chinensis in Fufang Yiganling Pian were identified by TLC.
The content of silybin and schisandrol A was determined by HPLC.Results The quality identification by TLC was
clear,specific and wel separated.The calibration curve of silybin was linear at 0.098 8-1.976μg (r=0.999 9),the
average recovery was 99.7%,and RSD was 1.7%.The calibration curve of schisandrol A was linear at 0.095 1-
1.902μg (r=0.999 9),the average recovery was 101.6%,and RSDwas 1.7%.Conclusion The method is sim-
ple,reliable,accurate and can be used for the quality control of Fufang Yiganling Pian.
Key words:Fufang Yiganling Pian;quality standard;TLC;HPLC
795
中南药学2012年8月第10卷第8期 Central South Pharmacy.August 2012,Vol.10No.8