全 文 ：基金项目:吉林省教育厅 “十一五”规划重点项目(2007238)
作者简介:张克勤 ,男 ,教授 研究方向:天然药物化学 Tel:0432)63509641 E-mail:kqzhang01@hotmail.com
长柱金丝桃中金丝桃素的含量变化
张克勤 1, 2 ,薛晓丽 2 ,孔令瑶 2 ,赵桂英 2 ,李玉杰 2 ,依守红 3 ,廖晓丹 2(1.吉林大学畜牧兽医学院 , 长春 132000;2.吉林农业科
技学院动物科学学院 ,吉林吉林 132101;3.吉林省通榆县制药厂 ,吉林 通榆 137200)
摘要:目的 确定长柱金丝桃中是否含有金丝桃素及金丝桃素含量的变化规律。方法 使用体积分数 80%的乙醇进行提取 ,
利用高效液相色谱仪进行金丝桃素的检测。结果 长柱金丝桃中含有金丝桃素;金丝桃素的含量随季节变化 ,茎 、叶 5月份较
高 , 以后下降 , 8月最低;花的变化与季节变化关系不大;同一时期不同器官含量不同 , 其中花中含量最高 ,叶中含量居中 , 茎中
含量最低。结论 长柱金丝桃中含有金丝桃素 ,金丝桃素含量随着季节和器官的不同而变化。
关键词:长柱金丝桃;金丝桃素;含量
中图分类号:R284 文献标志码:A 文章编号:1001-2494(2011)03-0174-03
TheChangeofHypericinContentinHypericumascyron
ZHANGKe-qin1, 2 , XUEXiao-li2 , KONGLing-yao2 , ZHAOGui-ying2 , LIYu-jie2 , YIShou-hong3 , LIAOXiao-dan2
(1.CollegeofAnimalHusbandryandVeterinary, JilinUniversity, Changchun132000, China;2.SchoolofAnimalSciences, JilinAg-
riculturalScienceandTechnologyColege, Jilin132101, China;3.TongyuPharmaceuticalFactory, Tongyu137200, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE TodeterminewhetherthereishypericininHypericum ascyronandchangesofhypericincontent.
METHODS Hypericinwasextractedby80%ethanolandthecontentsweredeterminedbyhigh-performanceliquidchromatography.
ThesampleswereseparatedonaSHIMADZUShim-packVP-ODSC18 column(4.6mm×150mm, 5μm)anddetectedat590 nmbya
SPD-20AUVdetector.Themobilephaseconsistedofmethanol-0.006 mol· L-1 disodiumhydrogenphosphate(87.5∶12.5, v/v, ad-
justedpHto6.5 withphosphoricacid)attheflowrateof1.0mL· min-1.Thecolumntemperaturewasat30℃.RESULTS Hy-
pericumascyroncontainshypericinandthecontentswerechangedwiththeseasons.Thehypericincontentsinstemsandleavesreached
peakinMayandtroughinAugust.Thehypericincontentinflowersdidnotchangewithseason.Thecontentswerediferentinvarious
kindsoforgansinthesamemonthanditwashighinflowers, mediuminleaves, lowinstems.CONCLUSION Hypericumascyron
containshypericin, andhypericincontentchangeswiththeseasonsandindiferentorgans.
KEYWORDS:Hypericumascyron;hypericin;content
长柱金丝桃又名红旱莲 、湖南连翘 ,为藤黄科金
丝桃属植物黄海棠(HypericumascyronL.)的全草 。
生于荒坡 、林间空地 、路边等 ,我国东北地区及黄河 、
长江 、珠江流域均有分布。金丝桃素(hypericin)是
金丝桃属最具有代表性的生物活性物质 ,具有抗病
毒 、抗抑郁和光活动性等作用。最近 ,又有金丝桃素
用于治疗禽流感 、口蹄疫[ 1]及抗高致病性猪生殖与
呼吸综合征病毒的报道[ 2] 。
关于长柱金丝桃的次级代谢产物的研究 ,国内
外许多学者均有涉足 。郑清明等 [ 3]采用 HPLC分析
了采自贵州的长柱金丝桃化学成分 ,其主要含有芦
丁(rutin)、槲皮素(quercetin)、金丝桃苷(hypero-
side)和贯叶金丝桃素(hyperforin)。高颖等[ 4]利用
多种色谱方法进行分离纯化 ,波谱解析结合理化鉴
定确定了 10种化合物的结构 ,包括黄酮类 、苷类 、有
机酸 、烷醇及甾醇类等。孟祥丽等 [ 5]对产自黑龙江
的长柱金丝桃化学成分鉴定显示含有黄酮类 、皂苷 、
鞣质 ,对金丝桃素检测显阴性 。王兆金等 [ 6]从长柱
金丝桃中分得了 5种黄酮结晶单体 ,并根据光谱分
析 、衍生物制备 、酸水解及物理常数测定 ,将它们鉴
定为槲皮素 、山柰酚 、金丝桃苷 、异槲皮苷及芦丁。
在贯叶连翘 、斑点金丝桃(H.maculatum)、四翼金丝
桃(H.tetraperum)和 H.elegans中发现约含 2 ×
10
-5 ～ 5×10-5的假金丝桃素 , 而在毛金丝桃 、糙枝
金丝桃和黄海棠 (H.ascyron)等植物中均未检测
到[ 7] 。此外 , Zevakova等 [ 8]首次报道在长柱金丝桃
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中含有金丝桃素 , Gerassim[ 9]则没有检测到。
为了确定长柱金丝桃中是否含有金丝桃素以及
金丝桃素的含量变化规律 ,从而扩大资源的利用范
围 ,笔者于 2008年 、2009年 4 ～ 10月在吉林省蛟河
市新站镇和吉林省左家自然保护区进行了此项
研究。
1 材料与方法
1.1 材料采集及预处理
1.1.1 材料采集 于每年的五月份开始 ,每隔 10d
采 1次材料 ,将金丝桃植株全株割下 ,带回实验室处
理;或者将其浸泡在体积分数 75%的酒精中备用 。
1.1.2 材料预处理 将上述材料按照茎 、叶 、花分
别整理后放入合适的容器中 ,在 60℃的鼓风干燥箱
中干燥 ,手感水分除尽即可取出。然后将各部分分
别打成粗粉 ,精确称重后放入渗漉器中 ,加入石油醚
(60 ～ 90 ℃)进行渗漉 ,除掉叶绿素及其他脂溶性杂
质 ,直到流出的渗漉液变成浅黄色为止。将除去叶
绿素的材料挥干残留石油醚 ,供提取时使用 。含量
的测定均以干燥样品材料质量为标准 。
1.2 金丝桃素的提取与分离
将上述除去叶绿素的材料加入烧瓶中 ,按 1∶30
的比例加入体积分数 80%的乙醇 ,放入恒温水浴箱
中 , 80 ℃加热提取 2h。提取结束后 ,将提取液放入
旋转蒸发器中进行浓缩 ,浓缩温度为 60℃。浓缩至
干后 ,加入少量的丙酮再溶解 ,然后放到蒸发皿内挥
发掉丙酮 ,再用甲醇定容 ,离心收取上清 ,用 PTFE
0.20μm滤膜过滤 ,取滤液作为检测试样 。
1.3 金丝桃素的检测
1.3.1 色谱条件 采用高效液相色谱法进行检测 ,
仪器为 SHIMADZULC-20AT, SPD-20A紫外检
测器 ,检测条件如下:SHIMADZUShim-packVP-ODS
C18色谱柱(4.6 mm ×150 mm, 5 μm);流动相为
甲醇-0.006 mol·L-1磷酸氢二钠(87.5∶12.5,用磷
酸调 pH至 6.5);检测波长 590 nm;流速 1.0mL·
min-1;柱温 30 ℃[ 10] 。
1.3.2 对照品 上海融禾医药科技有限公司的金
丝桃素 ,纯度为 98%,批号为 080615。精密称取金
丝桃素对照品 0.95 mg,置 5 mL棕色量瓶中 ,加甲
醇超声溶解并稀释至刻度 , 摇匀制得 0.19 mg·
mL-1对照品贮备液。从中精密量取 100 μL加甲醇
稀释至 2 mL棕色量瓶 ,制成 9.5 μg· mL-1对照品
溶液。
1.3.3 标准曲线配制 精密吸取 “1.3.2”项下质
量浓度为 9.5μg· mL-1金丝桃素对照品溶液 2、4、
6、8、10μL,分别注入高效液相色谱仪 ,测定金丝桃
素峰面积 ,以金丝桃素含量(ρ)(μg· mL-1)为纵坐
标 , 峰面积值 A为横坐标 ,绘制标准曲线 , r=0.999
9,表明金丝桃素的浓度与峰面积之间有良好的线性
关系 ,具有显著的相关关系 ,由此计算得回归方程
为:ρ=2.210 84×10-5A-6.661 32×10-2。
2 结 果
2.1 金丝桃素的定性鉴定
2.1.1 化学显色方法定性 由于金丝桃素在 pH
11.5以下时呈现红色 ,而在 pH11.5以上时则呈绿
色 ,因此可利用这个性质对金丝桃素进行鉴别。我
们将长柱金丝桃的提取物加入到不同 pH的氢氧化
钠溶液中 ,结果在 pH11.5以下时呈红色 ,在 pH12
时溶液则变成绿色 ,从而确定在长柱金丝桃提取物
中含有金丝桃素。
2.1.2 HPLC定性 利用高效液相色谱法确定长
柱金丝桃中含有金丝桃素。首先将金丝桃素标准品
进样到高效液相色谱仪中 ,确定其保留时间;然后再
将长柱金丝桃提取物加入仪器中 ,结果长柱金丝桃
提取物在标准品出峰保留时间处也有一个物质峰 ,
出峰时间均为 23 min左右 ,从而又证明在长柱金丝
桃中含有金丝桃素 。HPLC图见图 1。
2.2 金丝桃素的含量变化
2.2.1 金丝桃素的总体变化 花的金丝桃素含量显
著的高于叶和茎 ,叶比茎的含量略高;在不同时期 ,金
丝桃素的含量也有变化 ,花的变化不规则 ,而且波动
范围也较大 ,其变化也可能是由于采摘时花期的差异
所致;茎和叶在 5月份最高 , 6月份有所下降 , 8月最
低 ,但至 6月份以后变化幅度不是很大(图 2)。
图 1 长柱金丝桃中金丝桃素及标准品的 HPLC图
Fig.1 HPLCChromatogramsofhypericininHypericumascyron
andthestandard
·175·中国药学杂志 2011年 2月第 46卷第 3期 ChinPharmJ, 2011February, Vol.46No.3
2.2.2 不同器官的金丝桃素含量变化 由于花的
金丝桃素含量显著高于茎和叶 ,加之出现的时期不
一致 ,所以仅对茎和叶的金丝桃素含量的数量关系
进行分析。对茎和叶的金丝桃素的差异进行了方差
分析 ,结果 F值 =1.127
茎和叶金丝桃素含量的相关性分析:依据图 2
的数据 ,对茎和叶的金丝桃素的相关性进行分析 ,结
果 r2 =0.993,两者间有极显著的相关关系 ,因此 ,可
以认为茎和叶之间金丝桃素的变化有一定的线性关
系 ,据此配置了回归方程:y=2.779 1ρ-0.000 7
(ρ变量为茎的金丝桃素含量 、y变量为叶的金丝桃
素含量)。
3 讨 论
3.1 长柱金丝桃中是否含有金丝桃素
关于长柱金丝桃中是否含有金丝桃素 ,不同的
研究者得到的结果差异很大。从目前的资料看 ,多
数研究者的结论为阴性 。但从目前的检测结果看 ,
长柱金丝桃的金丝桃素的含量还要低于贯叶连翘 。
这也提示我们 ,改变长柱金丝桃的生存环境 ,可能会
影响它的金丝桃素含量 ,从而为我们获得更高含量
的金丝桃素提供一个线索 。
3.2 金丝桃素含量的季节变化
长柱金丝桃中金丝桃素含量还有季节变化 ,不
同的器官变化也不一致 ,其中花的变化不规则 ,变化
幅度相对较大;叶和茎在 5月份最高 ,以后逐渐下
降 。Southwel等 [ 10]对贯叶连翘的研究表明 ,金丝桃
素的积累和分泌组织的形成有着一定的相关关系 。
长柱金丝桃在生长旺盛的 5月份 ,其金丝桃素的分
泌也可能旺盛;生长后期随着营养生长的减慢及分
泌细胞的消亡 ,合成也开始降低。而茎和叶在 6月
份以后出现下降 ,是否也和花的出现导致金丝桃素
图 2 长柱金丝桃中金丝桃素的含量变化
Fig.2 HypericincontentinHypericumascyron
的转移有关。所以在不同季节的变化规律及其机制
的研究还不够深入 ,尚需进一步的工作 。
3.3 植物不同器官金丝桃素的含量变化
在不同器官的金丝桃素的检测中 ,花的含量最
高可达 0.02%, 比茎高出 34倍 。这与曾建国
等[ 11-12]对贯叶连翘等不同器官的检测结论一致。
吕洪飞等 [ 13]发现 ,贯叶连翘分泌细胞团主要存在于
贯叶连翘的叶边缘 、花瓣 、萼片 、花药和茎棱上 ,起源
于幼叶的基本分生组织 ,发育过程与叶的形成基本
是同时进行的 。
这也提示我们 ,金丝桃的最佳采收季节在 6月
末至 7月初 ,采摘部位以花为好 ,其次是叶。
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(收稿日期:2010-04-20)
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