全 文 ：【方药研究】
鸡血藤提取物体外抗肿瘤实验研究
唐　勇1 ,王笑民1 ,何　薇2 ,王玉芝1 ,李春梅1 ,戈妍娟3
(1.首都医科大学附属北京中医医院 肿瘤科 ,北京　100010;
2.北京市中医研究所 ,北京　100010;3.北京中医药大学 ,北京　100029)
　　摘要:鸡血藤水提物对 6种肿瘤细胞系均有一定生长抑制作用 ,对不同种属 、器官 、组织来源
的细胞系敏感性不同 。水提物的柱层析产物当中 ,50%、70%和 95%乙醇洗脱部分抑瘤作用更强 ,
IC50仅为水提物的一半左右 。鸡血藤提取物体外对肿瘤细胞系有广谱生长抑制作用 ,黄酮类化合
物可能是其抗肿瘤的有效成分 。
　　关键词:鸡血藤;提取物;抗肿瘤
　　中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1006-3250(2007)04-0306-03
　　“固本抑瘤 Ⅱ号”是北京中医医院治疗肺癌 、肠
癌的有效方剂[ 1] ,鸡血藤作为方中主要成分 ,其抗肿
瘤作用不明确 ,国内外相关报道亦很少。作者应用
MTT 法 ,观察了鸡血藤水提物对多种肿瘤细胞系的
直接杀伤作用 ,并通过聚酰胺柱层析分离技术 ,进一
步寻找鸡血藤的抑瘤活性部位 。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　药品与试剂　鸡血藤饮片购自北京卫
仁中药饮片厂(批号 603305101)。聚酰胺(30 ～ 60
目),江苏临江试剂化工厂生产;95%乙醇(AR)北京
化工厂生产;DMEM 培养基 , GIBCO 公司;新生牛血
清 ,奥地利 PAA 股份有限公司(Cat No:B15-001);胰
蛋白酶 ,GIBCO公司;噻唑蓝(MTT),华美公司进口
分装 。
1.1.2　细胞系及细胞培养　人高转移巨细胞
肺癌 PG由北京大学医学部病理室提供。人肠腺癌
HT-29 、人肺腺癌 A549 、人胰腺癌 PANC-1 、人肝癌
SMMC-7721 、大鼠小肠上皮细胞癌 IEC-6由本科中心
实验室提供。细胞培养条件:高糖 DMEM 培养基 ,
含10%小牛血清和双抗(青霉素 100μ·ml-1 、链霉素
100μg·ml-1),置 37℃、5%CO2 的恒温箱中传代培
养。
1.2　方法
1.2.1　实验用药的制备　鸡血藤水溶性提取
物的制备:将药材碎成小块(100g),加去离子水浸泡
1h ,回流提取 1.5h ,滤过 。冷藏过夜 ,取上清浓缩至
稠膏 , 真空干燥(温度 60℃、真空度 0.01Pa 、时间
6h),干膏称重(11.08g)。梯度乙醇洗脱物的制备:
取干膏适量 ,水溶解。将上述已处理好的聚酰胺柱
(柱直径 3cm 、柱高40cm)水洗至洗出液澄明后 ,收集
洗液浓缩至稠膏 , 真空干燥。换不同浓度乙醇
(30%、50%、70%、95%)洗脱 ,分别收集洗脱液。回
收乙醇至无醇味 ,经水浴蒸干 、真空干燥得各洗脱
物。
1.2.2　聚酰胺薄层色谱分析　取鸡血藤水提
物和各浓度乙醇洗脱物(0 、30%、50%、70%、95%)
适量 , 用水溶解 , EtOAc 萃取 , 水浴蒸干 , 残渣用
MeOH溶解 ,作为供试液 。选用 CHCL3-MeOH(5∶3)
作为展开剂 ,60℃～ 70℃,紫外灯 365nm下观察并照
像。
1.2.3　MTT 比色法　将单层贴壁且处于对数
生长期的肿瘤细胞 ,用 0.25% Trypsine ～ 0.02mol·
L
-1
EDTA消化液消化后 ,用含 10%新生牛血清的
DMEM培养基稀释成单细胞悬液 ,根据不同细胞生
长速率 ,调细胞浓度 2.5 ～ 5×107·L-1 。将上述细胞
悬液加入 96孔细胞 、培养板中 ,每孔 100μl ,于 37℃、
5%CO2 的恒温培养箱中培养 24h后 ,每孔加 100μl
含药或无药培养液 ,设空白及细胞对照组 、各浓度用
药组 、各浓度药品凋零组 ,每组至少设 3个复孔。继
续培养72h后 ,每孔加入 MTT(5g·L-1)15μl ,同等条
件继续培养 4h。弃培养液 ,每孔加入 150μl DMSO ,
充分震荡混匀 ,使结晶溶解 ,在奥地利 SA1000酶联
仪上测490nm处光吸收度(A 值),并计算细胞生长
抑制率(IR),实验重复 3次。
细胞生长抑制率(IR)=[(对照组 OD值-实验
组OD值) 对照组OD值] ×100%。
1.3　统计学处理
所有数据采用 SAS 6.12统计分析软件处理 ,以
x±s表示 。应用 Origin软件根据细胞生长抑制率
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Chinese Journal of Basic Medicine in Traditional Chinese Medicine
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2007.Vol.13.No.4
基金项目:北京市科技项目(H010910190119)
(IR)计算药物半数抑制浓度(IC50)。
2　结果
2.1　鸡血藤水提物对 6种肿瘤细胞系生长的
影响
鸡血藤水提物对 6种肿瘤细胞系均有一定生长
抑制作用(表 1 ～ 2),具有剂量依赖关系。对不同种
属细胞敏感性不同 ,大鼠肠上皮癌细胞 IEC-6的 IC50
仅为人肠上皮 HT-29的 1 4。同种属 、不同器官来源
的细胞敏感性也不同 ,鸡血藤水提物对肝癌细胞
SMMC-7721作用最强 ,肠腺癌 HT-29最差 。对同种
属 、同器官来源 ,但组织学来源不同的细胞系 A549
和 PG作用也有明显差异 。
表 1　不同浓度的鸡血藤水提物对 6 种肿瘤细胞系的生长抑制作用( x ±s , n=3)
剂量
(μg·ml-1)
生长抑制率(%)
HT-29 A549 PG PANC-1 SMMC-7721 IEC-6
12.5 1.58± 1.92 7.70±4.53 2.00± 2.83 2.00±12.73 7.05± 6.29 3.67± 4.04
25 2.69± 2.02 8.85±6.72 13.50± 3.54 5.50± 7.78 13.65±19.30 22.00± 5.29
50 9.88± 3.85 26.45±8.41 34.50±19.09 29.50± 4.95 46.65± 6.15 40.00±11.27
100 17.87± 2.12 34.25±3.04 62.50±19.09 53.00±11.31 76.20±15.27 76.00±12.49
200 40.68± 6.44 87.65±1.34 79.00± 9.90 80.50±10.61 88.60± 8.34 95.33± 1.15
400 54.62±12.61
表 2　6种肿瘤细胞系应用鸡血藤水提物后的 IC50( x±s , n=3)
HT-29 A549 PG PANC-1 SMMC-7721 IEC-6
IC50(μg·ml-1) 258.90±27.87 122.62±0.83 77.97±33.55 94.92±14.38 57.63±14.38 63.28±15.29
　　2.2　鸡血藤水提物经聚酰胺柱层析 ,不同浓度
乙醇洗脱物作用于A549和HT-129细胞系的 IC50
与鸡血藤水提物相比 ,50%、70%和95%乙醇洗
脱物抑瘤作用明显增强 ,半数生长抑制浓度用量减
少一半左右(图 1 ～ 2)。30%乙醇洗脱物与水提物
之间无明显差别 ,水洗脱物基本无效。
图1　鸡血藤提取物作用于 HT-29 细胞系的 IC50
A.鸡血藤水提物;B.水洗脱物;C.30%乙醇洗脱物;D.50%乙
醇洗脱物;E.70%乙醇洗脱物;F.95%乙醇洗脱物
图 2　鸡血藤提取物作用于 A549细胞系的 IC50
A.鸡血藤水提物;B.水洗脱物;C.30%乙醇洗脱物;D.50%乙
醇洗脱物;E.70%乙醇洗脱物;F.95%乙醇洗脱物
2.3　鸡血藤水提物及其聚酰胺柱层析分离组
分的薄层色谱分析
聚酰胺薄层色谱显示 , 鸡血藤 50%、70%和
95%乙醇洗脱物具有相应位置的色谱条带 ,三者可
能含有共同的抑瘤成分 ,值得进一步分离 、提纯和鉴
定。
3　讨论
鸡血藤 为豆科(Leguminosae)植物密 花豆
(Spatholobus suberectus Dunna.)的干燥藤茎 。古籍记
载:其性温 ,味苦 、甘 ,归肝 、肾经 ,有补血 、活血 、通络
之功效 ,为血分之圣药 ,多用于月经不调 、血虚痿黄 、
麻木竣痪 、风湿痹痛等症[ 2] 。
鸡血藤化学成分复杂 ,药理作用多样。以往的
研究表明 ,鸡血藤能扩张外周血管 ,降低血压 、抑制
血小板凝聚 、降脂 、抗动脉硬化 、促进肾脏总磷代谢 ,
对免疫系统有双向调节作用[ 3] 。近几年对鸡血藤刺
激骨髓造血功能的研究较多 ,鸡血藤能升高因60Co
照射和腹腔注射盐酸苯肼引起的骨髓抑制性贫血小
鼠的红细胞 、白细胞 ,并刺激 BFU-E 、CFU-E和 CFU-
GM 的增殖[ 4 、5] 。鸡血藤体内诱导制备的小鼠巨噬
细胞 、脾细胞 、肺和骨骼肌体外条件培养液 ,能明显
促进正常小鼠和贫血小鼠的骨髓细胞增殖 ,考虑与
其直接或间接刺激造血微环境的基质细胞分泌较高
活性的造血生长因子有关[ 6] 。其他实验研究还发
现 ,鸡血藤水提物在一定浓度下能明显提高 NK 细
胞和 LAK细胞活性 ,其抑瘤作用可能与此有关[ 7] 。
以往的研究尚未发现鸡血藤具有直接抑制肿瘤
细胞生长的作用。本实验采用MTT 比色法 ,发现该
药水提物体外抑瘤谱较广 ,且具有种属 、器官 、组织
选择性 ,有很高研究价值 。但是 ,鸡血藤粗提物体外
实验用药剂量偏大 , 对人肠腺癌 HT-29 的 IC50达
258.9μg·ml-1 ,因而对其抑瘤成分进行分离势在必
行。
现有的资料显示 ,鸡血藤主要含黄酮类 、三萜
类 、甾醇类以及蒽醌类化合物 ,其中黄酮类成分最
多 ,包括异黄酮类 ,如芒柄花素(Formononctin)、芒柄
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2007.Vol.13.No.4 　　　　　　
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花甙(Ononin)、樱黄素(Prunetin)等;二氢黄酮类 ,如
密花豆素;拟雌内酯类 ,如苜蓿内酯(medicagol)等;
查尔酮类 ,如异甘草素(isoliquiritigenin)、2′, 4′, 3 ,4-
四羟基查尔酮(2′,4′,3 ,4-tetrahydroxy chalcone);花青
素类 , 如 表 儿 茶 精 (epicatechin)、原 儿 茶 酸
(procatechuis acid)、儿茶素(catechin)等[ 8～ 13] 。本实
验采用聚酰胺柱层析 、梯度乙醇洗脱的方法 ,对其黄
酮类成分进行了初步分离 。结果显示 ,50%、70%和
95%的乙醇洗脱物抑瘤效果好 , IC50值大幅度下降 ,
说明黄酮类成分很可能是其抗癌成分 。当然 ,洗脱
物中还有一些酚羟基类和酯溶性物质 ,要确证其中
的抗肿瘤生物活性成分 ,尚有待进一步分离纯化。
总之 ,鸡血藤具有抗肿瘤作用 ,其抑瘤成分值得
深入研究 。
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收稿日期:2006-03-14
作者简介:唐勇(1967-),男 , 北京市人 ,主治医
师 ,医学硕士 ,从事中西医结合肿瘤基础与临床研
究。
(上接第 242页)
成为可能 。通过构建医学数据中心 ,利用Web 服
务 ,XSD 文档映射 ,将不同医疗机构 、不同结构的医
学数据统一整合到医学数据中心 ,实现医学数据的
自然积累 ,从而构建起一个强大的中西医学数据平
台。
医学数据中心的构建 ,对于中医证型的规范化 ,
有着极为重要的意义:
首先 ,医学数据中心实现对不同医疗机构医学
数据的自然积累 ,它将解决中医证型规范化所需要
的充分样本集的问题 。医学数据中心更能满足中医
临床本身的动态性 、可扩展性等本质特征 。它能够
从更宏观和更微观的角度 ,对数据进行更为有效的
分析 ,如现代诊疗技术的某些指标能否成为中医症
状描述的特征属性? 某一地区患某一疾病人群中某
一中医证型的症状特征是什么 ?与西医的某些化验
指标有无一定的关联性等 。
3.3.2　建立专家委员会　根据需要 ,建立各个
专业的专家委员会。对医学数据中心中的症状描述
数据进行统计分析 、数据挖掘 ,定期给出报告 ,请各
专业专家委员会讨论 ,定出一个对于临床有指导性
的症状描述标准 ,并反馈于临床 ,从而逐步动态地促
进中医症状描述的规范化 。
3.3.3　进行数据挖掘　通过对中医临床数据
的准确描述 ,运用数据挖掘手段 ,促进中医证型辨证
函数的规范化。当数据的量集中到一定程度后 ,对
其中的医学数据进行有指导性的数据挖掘 。如探索
西医的某些化验指标与中医的证型有无特定的关联
性 ,某些中医证型的最小化症状集合 ,以及对于某一
特定证型 、中药处方的配伍规律等 。它的难点在于
数据挖掘模型的建立 ,即挖掘哪些数据 ,采用何种数
据挖掘算法? 暂时可选用目前已成熟并已集成到软
件中(如SQL 2005)的算法 ,并试着开发适用于中医
证型的数据挖掘算法。
中医证型的规范化是一个亟待解决的难题 ,本
文从方法学角度对这个问题进行了探讨。正如文中
提到 ,中医证型的规范化是一个系统工程 ,它不仅仅
需要技术上的突破 ,更需要建立一种机制 ,从而动
态 、渐进地促进中医证型的规范化 。
参考文献:
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收稿日期:2006-04-26
作者简介:成福春(1972-),男 ,四川合江人 ,助
理研究员 ,医学博士 ,从事中医基础理论研究。
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